近幾年,蘋果炭疽葉枯�。℅lomerella leaf spot,GLS）在我國蘋果產(chǎn)地迅速蔓延。果生刺盤孢（Colletotrichum fructicola）是該病害的的主要病原。田間條件下,果生刺盤孢在致病后期可以產(chǎn)生大量子囊孢子。子囊孢子能夠隨風遠距離傳播可能是蘋果炭疽葉枯病迅速蔓延的重要原因。交配型基因是調控真菌有性生殖的關鍵因子。大多數(shù)絲狀子囊真菌有性子實體發(fā)育和子囊孢子形成需要交配型基因MAT1-1-1和MAT1-2-1的互相識別。異宗配合真菌同一菌株僅含MAT1-1-1或MAT1-2-1,交配型基因不同的菌株間發(fā)生交配。同宗配合真菌同一菌株同時含有MAT1-1-1和MAT1-2-1,自身即可完成有性生殖。與其它子囊真菌不同,目前十幾個已知的刺盤孢屬真菌基因組中均只含有MAT1-2-1,而無MAT1-1-1,而且部分菌株仍能發(fā)生同宗配合。目前尚不清楚MAT1-2-1是否是刺盤孢真菌有性生殖的關鍵調控因子。果生刺盤孢1104-6-B菌株在固體培養(yǎng)基上產(chǎn)生大量散生不育子囊殼,該菌株與性親和菌株1104-7-W-S對峙培養(yǎng),則會形成由聚生可育子囊殼構成的雜交線。本研究以1104... 

【文章來源】：西北農(nóng)林科技大學陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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刺盤孢真菌獨特的交配型位點基因結構

12果生刺盤孢交配型基因MAT1-2-1的功能分析GATGAGGTAG2.根據(jù)交配型MAT1-2-1基因及其上下游2000bp左右的序列，再結合潮霉素磷酸轉移酶基因（hph）序列設計基因敲除載體構建所用的PCR擴增引物。引物序列見表2-1，圖2-1顯示引物的位置。表2-1交配型MAT1-2-1基因敲除和檢測所用引物Table.2-1DesignedprimersusedforgeneratinganddetectinggeneknockoutmutantsofthematingtypegeneMAT1-2-1引物名稱PrimerName引物序列Sequence(5’-3’)Mat1-2-1LFGGGAAATGATGGGGTTTCTAACTGCMat1-2-1LRAscIGCATTGGCGCGCCGGCGCAGACGTTGCTAGAATTATGGMat1-2-1RFNotIATAAGAATGCGGCCGCCGCTGTAGTATCAGTCATGGAACGGMat1-2-1RRCAGGAGAACAAGGCTGCAGTGCTAGMat1-2-1DFGTTGCTGTCTCTCAGAAGGATTACCMat1-2-1DRCAATAGCGATGCCGTTGACCGAGACMat1-2-1LFNestTGCATGGTTGCATGGAGACGTAAGCMat1-2-1RRNestTTGATCCCATCGAGACCAAAGAAGCXuHyRGTATTGACCGATTCCTTGCGGTCCGAAXuYgFGATGTAGGAGGGCGTGGATATGTCCTXu855RGCTGATCTGACCAGTTGCXu866FGTCGATGCGACGCAATCGT圖2-1PCR擴增引物位置示意圖Fig.2-1Schematicrepresentationoftheprimerpositions

18果生刺盤孢交配型基因MAT1-2-1的功能分析5.于接種后的第六天，觀察發(fā)病狀況并記錄結果。2.3結果分析2.3.1果生刺盤孢ZW1104菌株MAT1-2-1蛋白序列的分析果生刺盤孢ZW1104菌株MAT1-2-1基因編碼區(qū)長843bp，有兩個內含子，外顯子含一個726bp開放閱讀框，編碼241個氨基酸（圖1）。編碼蛋白序列144至220位為MATA_HMG(highmobilitygroup)box結構域（黃色區(qū)域），內含13個保守的DNA結合位點（紅色），這些結構特征與已知MAT1-2-1蛋白一致。對NCBI數(shù)據(jù)庫做BlastP比對，發(fā)現(xiàn)MAT1-2-1蛋白序列與果生刺盤孢MAT1-2-1最為接近。圖2-1果生刺盤孢MAT1-2-1基因編碼的預測蛋白序列。黃色區(qū)域為MATA_HMG(highmobilitygroup)box結構域，紅色氨基酸為保守的DNA結合位點。Figure.2-1PredictedproteinsequenceencodedbytheColletotrichumfructicolaMAT1-2-1gene.MATA_HMG(highmobilitygroup)boxdomainishighlightedinyellowandtheconservedaminoacidsinvolvedinDNAbindingarehighlightedinred.將MAT1-2-1基因編碼的蛋白與其在果生刺盤孢（Colletotrichumfructicola）、菜豆刺盤孢真菌（Colletotrichumlindemuthianum）尖孢鐮刀菌（Fusariumoxysporum）、禾谷鐮刀菌（Fusariumgraminearum）、冬蟲夏草（Cordycepsmilitaris）、核盤菌（Sclerotiniasclerotiorum）、灰葡萄孢（Botrytiscinerea）、串孢鐮刀菌（FusariumVerticillioides）、構巢曲霉（Aspergillusnidulans）、稻瘟菌（Magnaporthegrisea）、栗疫病菌（Cryphonectriaparasitica）、柄孢菌（Podosporaanserina）、大麥殼針孢（Septoriapasserinii）、蜂蜜球囊菌（Ascosphaeraapis）中的同源蛋白進行序列比對和系統(tǒng)進化樹分析發(fā)現(xiàn)：其和果生刺盤孢（Colletotrichumfructicola）的親緣關系最近。

【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
[1]中國蘋果炭疽病病原菌的遺傳多樣性[D]. 符丹丹.西北農(nóng)林科技大學 2014

碩士論文
[1]PEG介導的蘋果果生刺盤孢Colletotrichum fructicola原生質體轉化體系的研究[D]. 韓小路.西北農(nóng)林科技大學 2015
[2]禾谷鐮刀菌AMT1基因的功能研究[D]. 王光輝.西北農(nóng)林科技大學 2010



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