本研究針對重要的農(nóng)業(yè)害蟲白星花金龜Protaetia brevitarsis幼蟲,建立RNA干擾體系,以期為免疫相關(guān)基因功能研究奠定基礎(chǔ)。通過血腔注射dsRNA,成功干擾了肽聚糖識別蛋白（peptidoglycan-recognition protein LB,PGRP-LB）基因的表達(dá),發(fā)現(xiàn)dsRNA注射量為9μg,注射后48 h取樣,pgrp-lb基因沉默效率最高。通過血腔注射對白星花金龜無殺蟲活性的Bt菌株G03,發(fā)現(xiàn)pgrp-lb基因沉默破壞了白星花金龜幼蟲的免疫防御系統(tǒng),顯著提高了白星花金龜對G03菌株的敏感性。表達(dá)免疫識別基因dsRNA菌株的構(gòu)建,將為白星花金龜?shù)纳锓乐翁峁┬滤悸贰?nbsp;

【文章來源】：植物保護(hù). 2020,46(04)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：8 頁

【圖文】：

dsRNA注射后不同時(shí)間采樣目的基因

為了進(jìn)一步分析免疫相關(guān)蛋白PGRP-LB在鞘翅目及其他昆蟲中的親緣關(guān)系并預(yù)測其生物學(xué)功能,構(gòu)建了PGRP-LB蛋白親緣關(guān)系樹。其中,白星花金龜與鞘翅目多食亞目的食糞金龜Onthophagus taurus序列相似程度較高,說明兩者遺傳關(guān)系較為接近,PGRP-LB蛋白序列具有較高的相似性,這與物種親緣關(guān)系分布一致。說明了其PGRP-LB蛋白在功能和結(jié)構(gòu)上與已報(bào)道的其他鞘翅目昆蟲相似(圖1)。2.2 pgrp-lb基因RNA干擾載體構(gòu)建

通過在線預(yù)測(http://rnaidesigner.thermofisher.com/rnaiexpress/)蛋白表達(dá)的ORF區(qū)541 bp位點(diǎn)到1 207 bp位點(diǎn)中潛在的RNAi靶位點(diǎn),在734～1 059 bp位點(diǎn)處得到10個(gè)可能的RNAi位點(diǎn),所以選擇了該325 bp序列作為干擾片段進(jìn)行克隆。同時(shí)以實(shí)驗(yàn)室已有的GFP蛋白核酸序列為模板,對其中173～677 bp片段進(jìn)行克隆。將目的片段和L4440載體進(jìn)行雙酶切并連接,成功構(gòu)建了L4440-pgrp-lb及L4440-gfp重組質(zhì)粒(圖2)。2.2.2 pgrp-lb-dsRNA及gfp-dsRNA的誘導(dǎo)表達(dá)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3279312