發(fā)布時間：2021-06-16 20:24

　　大多數革蘭氏陽性病原細菌如炭疽芽胞桿菌、單核細胞增生李斯特菌、肺炎鏈球菌、金黃色葡萄球菌等都存在dlt操縱子,其功能是使細胞壁的磷壁酸發(fā)生D-丙氨�；揎�,從而使細胞壁表面帶正電荷,導致對宿主陽離子抗菌肽（AMPs）的抵抗力增強,逃避宿主免疫反應,這是病原微生物在與宿主相互作用過程中進化出的一種有效保護機制。蘇云金芽胞桿菌（簡稱Bt）是昆蟲及線蟲的一種革蘭氏陽性病原細菌,分析其基因組發(fā)現也有dlt操縱子的存在。Bt作為一種殺蟲微生物,以殺蟲晶體蛋白為其主要殺蟲活性成分,在其與昆蟲宿主相互作用過程中,病原和宿主都會進化出各種保護機制,從而提高其在自然界中的生存能力,dlt操縱子極有可能是Bt逃避昆蟲宿主免疫反應的一種有效方式。因此,本研究通過敲除Bt菌株中dlt操縱子,分析其對Bt自身生長繁殖等基礎生物學方面的影響,并探討其在與昆蟲宿主相互作用過程中的生物學功能。本研究利用同源重組技術敲除Bt無晶體突變株BMB171中dltA基因,成功構建了dltA基因缺失突變株,同時構建了互補株和空載體菌株。表面電荷差異分析表明dl 操縱子功能缺失可引起菌體細胞表面凈負電荷顯著增加,驗證了其在Bt中具... 

【文章來源】：湖南師范大學湖南省 211工程院校

【文章頁數】：77 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－１?Ｃｒｙ毒素的孔洞形成模型［４６］??Ｆｉｇ．?１－１?Ｐｏｒｅ?ｆｏｒｍａｔｉｏｎ?ｍｏｄｅｌ?ｏｆ?Ｃｒｙ?ｔｏｘｉｎｓ１４６＾??

導致害蟲對其抗性形成。目前，己有大量研宂表明Ｃｒｙ毒素蛋白能與多種膜蛋白??結合，包括堿性磷酸酶［５Ｑ］、氨肽酶祕４５］、鈣黏蛋白［５１－５３］和人８＜：轉運蛋白［５４］等，??圖１－３中展示了毒素ＣｒｙｌＡｂ在煙草天蛾（Ｍｓｅｘｒａ）上的三個受體結合位點［５５］。??ｇｉＦ?—：「巧……．．：：ｒ??ＡＬＰ?ＡＰＮ??Ｃａｄｆａｅｒｉｎ??圖１－３?ＣｒｙｌＡｂ毒素單體／低聚物與煙草天蛾上三個受體的結合位點［５５１??Ｆｉｇ．?１－３?Ｂｉｎｄｉｎｇ?ｒｅｇｉｏｎｓ?ｏｆ?ｍｏｎｏｍｅｒｉｃ／ｏｌｉｇｏｍｅｒｉｃ?ｆｏｒｍｓ?ｍａｐｐｅｄ?ｉｎ?Ｃｒｙｌ?Ａｂ?ｔｏｘｉｎ?ｔｏ?Ｍａｎｄｕｃａ??ｓｅｘｔａ?ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ，?ｃａｄｈｅｒｉｎ，?ＡＬＰ?ａｎｄ?ＡＰＮ＾５５＾??但是Ｃｙｔ殺蟲蛋白到目前為止還沒有發(fā)現與之特異性相結合的膜受體，關于??其作用機理己有相關文獻報道表明，Ｃｙｔ分子是不能直接與膜結合的，只有當其??被激活后先和位于膜上的不飽和脂肪酸發(fā)生親和，再通過多個Ｃｙｔ分子寡聚化進??一步產生Ｐ－桶狀跨膜結構，最終在細胞膜上形成孔隙，水和離子由孔大量進入細??胞質導致細胞裂解以及組織損傷??２．２營養(yǎng)期殺蟲蛋白??營養(yǎng)期殺蟲蛋白（ＶＩＰｓ）是Ｂｔ菌體在營養(yǎng)期這一生長階段內形成的一類對??昆蟲有高效毒殺活性的新型蛋白，達到了納克級水平，它與ＩＣＰ在進化上沒有同??７??

�。拢艋蚪M作為模板，用引物對（ｉ／ｄｕｐ－Ｆ、ｃｆｅ４－ｕｐ－Ｒ和ｄ／Ｍ－ｄｏｗｎ－Ｆ、??』Ｌ４－ｄｏｗｎ－Ｒ擴增基因的上下游同源臂，得到５７７ｂｐ的上游臂和５７１ｂｐ的下??游同源臂（圖３－１），膠回收片段后經雙酶切、分步連接到ｐＲｅｃ－ｍｏｂ－Ｔｓ載體上，??構建流程如圖３－２所示，熱轉至Ｚｃｏ／ｉ?ＤＨ５ｏｔ中，重組子￡．ｃｏ／ｚ＿?ＤＨ５ａ??（ｐＲｅｃ－ｍｏｂ－Ｔｓ－ｕｐ－ｄｏｗｎ）分別經?＿ＳａｗＨ?Ｉ、ｆｅｅ?Ｉ?和Ｉ、＆／１?雙酶切鑒定（圖?３－３?），??獲得正確轉化子。??ｂｐ??腿—??７５０?—??５００?—??２５０??圖３－１?ｒｆ／ｄ基因上／下游同源臂ＰＣＲ產物分析??Ｆｉｇ．３－１?Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ＰＣＲ?ｐｒｏｄｕｃｔｓ?ｆｏｒ?ｄｌｔＡ?ｇｅｎｅ?ｕｐｓｔｒｅａｍ?／ｄｏｗｎｓｔｒｅａｍ??ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ?ａｒｍ??Ｍ：?ＤＬ２０００?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ??１?ｊ／Ｍ基因上游同源臂??２：?Ｊ／Ｍ基因下游同源臂??３５??

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3233731