果生刺盤(pán)孢是蘋(píng)果炭疽葉枯病的主要病原菌,它不僅可以侵染葉片造成早期落葉,還可以危害蘋(píng)果果實(shí),引起果實(shí)斑點(diǎn),給蘋(píng)果的品質(zhì)和產(chǎn)量造成嚴(yán)重的影響。果生刺盤(pán)孢引起的蘋(píng)果炭疽葉枯病近年來(lái)在我國(guó)蘋(píng)果產(chǎn)區(qū)快速蔓延,對(duì)于果生刺盤(pán)孢的致病機(jī)理目前還了解很少。有絲分裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinases,MAPK）是MAPK信號(hào)通路的關(guān)鍵因子,是參與細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo),調(diào)控細(xì)胞生長(zhǎng)、分化、環(huán)境適應(yīng)的重要因子。絲狀真菌中,MAPK基因Pmk1所在的Fus3/Kss1-MAPK通路是調(diào)控病原菌交配、生長(zhǎng)、產(chǎn)孢、和致病的關(guān)鍵基因。本研究以果生刺盤(pán)孢1104-B菌株為研究對(duì)象,通過(guò)基因敲除技術(shù)獲得Pmk1缺失突變體,再通過(guò)對(duì)該突變體的表型變化研究推斷該基因的功能,以期闡明果生刺盤(pán)孢的致病中的作用。主要研究結(jié)果如下:1.基于基因重組技術(shù),PEG介導(dǎo)原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化技術(shù),共獲得抗潮霉素的轉(zhuǎn)化子52株,通過(guò)PCR檢測(cè)、玻璃紙穿透試驗(yàn)篩選、共得到基因敲除突變體兩株,分別是1104Pmk1-37B和1104Pmk1-38B。2.將突變體以及野生型菌株分別在PDA培養(yǎng)基培養(yǎng),結(jié)果顯示突變體... 

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蘋(píng)果炭疽葉枯病在葉片以及果實(shí)上的癥狀（符丹丹2014）

6果生刺盤(pán)孢M(jìn)APK信號(hào)通路Pmk1基因的功能分析MAPKs在酵母細(xì)胞生理上有著非常重要的作用。在敲除Fus3和Kss1和Smk1后的突變體的有性繁殖以及孢子的形成會(huì)受阻。在酵母當(dāng)中，MAPKs可以幫助維持彼此的信號(hào)的特異性以及穩(wěn)定性。在高滲透的情況下，Hog1可以通過(guò)Ste11來(lái)防止Fus3和Kss1的失活（Sprague1998），菌絲的生長(zhǎng)調(diào)控子Tec1可以受Fus3來(lái)降低菌絲的生長(zhǎng)，同時(shí)Kss1的活性也可以靠Fus3來(lái)弱化（Qietal2005）。在菌絲交配和生長(zhǎng)信號(hào)因子也可以通過(guò)激活Ste11來(lái)確保Hog1的信號(hào)通路的正常運(yùn)行，同時(shí)在交配的過(guò)程當(dāng)中促使Fus3的活性超過(guò)Kss1（Qi&Elion2005）。圖1.1釀酒酵母MAPK組成示意圖（Rispailetal2009）Fig1.1SaccharomycescerevisiaeMAPKcomponentdiagram（Rispailetal2009）1.4.3植物病原真菌的MAPK通路概況植物病原真菌的生長(zhǎng)和發(fā)育及致病性均受到其細(xì)胞外信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的調(diào)控。研究表明，植物病原真菌的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑主要有3類，即Ca2+、cAMP以及MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，其中MAPK是近年來(lái)細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)研究的熱點(diǎn)。植物病原真菌中至少存在3條保守的MAPK級(jí)聯(lián)途徑，它們分別是：Fus3/Kss1-MAPK途徑、Slt2-MAPK途徑以及Hog-MAPK途徑。Fus3/Kss1-MAPK主要參與調(diào)控病原菌的附著胞發(fā)育、交配反應(yīng)、侵入和致病性等過(guò)程，例如在玉米黑粉病菌（Ustilagomaydils）中該途徑主要參與并調(diào)控了U.mayils的菌絲生長(zhǎng)，致病毒力；Slt2-MAPK途徑在小麥赤霉病菌（Fusariumgraminerarum）和小麥殼針枯葉病菌（Mycosphaerellagraminicola）中主要參與了細(xì)胞壁的發(fā)育及完整性的調(diào)控；Hog-MAPK途徑在灰霉病菌（Botrytiscinerea）等致病中主要是調(diào)控病菌對(duì)高滲透脅迫的反應(yīng)。在病原真菌中，MAPK的研究開(kāi)展目前較為深入，已經(jīng)鑒定出了三個(gè)關(guān)鍵基因，分別是

第一章文獻(xiàn)綜述7Pmk1、Mps1以及Osm1，參與了病原菌的發(fā)育、分化和致病的過(guò)程（Xuetal2000）。在稻瘟菌中，分別含有MAPK（Pmk1、Osm1以及Mps1），MAPKK（Mst7、Pbs2以及Mkk2）和MAPKKK（Mst11、Ssk2以及Mck1）（圖1.3）（Lietal2012;Xu2000）。其中，Mps1不會(huì)涉及到附著胞的形成，只是參與了細(xì)胞壁的形成，附著胞的穿透以及侵染（Jeonetal2008;Zhaoetal2005）。Mps1調(diào)控阿拉伯糖和葡萄糖的外層細(xì)胞壁的積累，來(lái)抵抗侵染植物過(guò)程中的幾丁質(zhì)酶（Fujikawaetal2009）。Osm1調(diào)控了細(xì)胞的滲透壓，但是和附著胞芽管的產(chǎn)生和寄主的侵染關(guān)系很�。―ixonetal1999)。研究表明，在稻瘟菌當(dāng)中，敲除Pmk1基因后，得到的突變體Pmk1的菌絲生長(zhǎng)狀況同野生型沒(méi)有差異，另外，有性和無(wú)性產(chǎn)孢都未受到影響，但是無(wú)法形成正常的附著胞，使寄主感病（Xu&Hamer1996）。在稻瘟菌中，Mst5、Mst11（MAPKKK）、Mst7（MAPKK）、Pmk1（MAPK）和GASS/GAS2基因都是Pmk1-MAPK信號(hào)途徑的重要組成部分（Jinetal2013）。同樣在Pmk1相關(guān)的基因Mst7和Mst11的突變體也無(wú)法形成附著胞，并且喪失了致病力（Jinetal2013）。利用附著胞階段的蛋白進(jìn)行雙分子熒光互補(bǔ)和免疫共沉淀分析，發(fā)現(xiàn)Mst7的N端有MAPK的接入點(diǎn)，因此證實(shí)了Mst50和Pmk1是由相互作用（Zhao&Xu2007）。另外，研究發(fā)現(xiàn)，MAPK級(jí)聯(lián)途徑在植物于病原菌識(shí)別、植物防衛(wèi)反應(yīng)中均具有重要的調(diào)控作用。圖1.3稻瘟病中與其致病形態(tài)相關(guān)的主要信號(hào)途徑（Lietal2012）Figure1.3Thekeysignalingpathwayinvolvedininfection-relatedmorphogenesisinM.oryzae（Lietal2012）

【參考文獻(xiàn)】：
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博士論文
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碩士論文
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