家蠶是重要的泌絲經(jīng)濟(jì)昆蟲,在我國有悠久的馴養(yǎng)歷史,由于昆蟲本身缺乏哺乳動(dòng)物的獲得性免疫系統(tǒng),使之易受病原微生物的影響,我國每年因蠶病造成的經(jīng)濟(jì)損失非常嚴(yán)重,其中家蠶核型多角體病毒（Bombyx mori nucleopolyhedroshivirus,BmNPV）是養(yǎng)蠶業(yè)主要防控病原。Hsp60是熱休克蛋白中重要的一員,它不但能夠參與蛋白質(zhì)的正確折疊,對(duì)高溫、缺氧、饑餓等產(chǎn)生應(yīng)答,同時(shí)也是昆蟲生長發(fā)育的必要因子。此外,Hsp60在昆蟲先天性免疫過程中也扮演了重要作用。有學(xué)者通過病毒覆蓋檢測發(fā)現(xiàn)了Hsp60是BmNPV直接相互作用的蛋白之一,本課題小組前期研究也證明了Hsp60受到BmNPV極晚期表達(dá)因子LEF-11劫持,參與了病毒增殖。但Hsp60促進(jìn)BmNPV增殖的具體機(jī)制仍然未知,本研究通過釣取家蠶Hsp60相互作用蛋白,鑒定了它們對(duì)BmNPV增殖和細(xì)胞ATP水平的影響,初步探究了它們之間的調(diào)控關(guān)系,對(duì)BmNPV與宿主相互作用的解析以及侵染調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的繪制具有一定意義,并取得如下結(jié)果:1.家蠶BmHsp60相互作用蛋白鑒定首先驗(yàn)證了Hsp60能夠促進(jìn)BmNPV在細(xì)胞水平的增殖,同時(shí)發(fā)... 

【文章來源】：西南大學(xué)重慶市 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：92 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 熱休克蛋白研究進(jìn)展
        1.1.1 熱休克家族基因概述
        1.1.2 熱休克蛋白Hsp60研究進(jìn)展
        1.1.3 Hsp60在病毒侵染過程中作用的研究
        1.1.4 昆蟲熱休克蛋白Hsp60研究進(jìn)展
    1.2 桿狀病毒研究
        1.2.1 桿狀病毒概述
        1.2.2 桿狀病毒與宿主相互作用
        1.2.3 BmNPV與宿主相互作用
第二章 引言
    2.1 研究背景與目的意義
    2.2 主要研究內(nèi)容
    2.3 技術(shù)路線
第三章 家蠶BmHsp60相互作用蛋白鑒定
    3.1 材料與方法
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.2 試劑及溶液配置
        3.1.3 主要儀器
        3.1.4 實(shí)驗(yàn)方法與步驟
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 BmHsp60過表達(dá)載體轉(zhuǎn)錄分析
        3.2.2 BmHsp60對(duì)BmNPV增殖的影響
        3.2.3 BmHsp60相互作用候選蛋白的釣取
        3.2.4 BmHsp60相互作用候選蛋白的驗(yàn)證
        3.2.5 BmHsp60相互作用蛋白亞細(xì)胞定位研究
        3.2.6 BmANT1表達(dá)特征鑒定
    3.3 討論
第四章 BmANT1對(duì)BmNPV增殖的影響
    4.1 材料與方法
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.2 試劑及溶液配置
        4.1.3 主要儀器
        4.1.4 實(shí)驗(yàn)方法與步驟
    4.2 結(jié)果與分析
        4.2.1 BmANT1過表達(dá)載體轉(zhuǎn)錄分析
        4.2.2 過表達(dá)BmANT1對(duì)BmNPV增殖的影響
        4.2.3 BmANT1基因的CRISPR/Cas9敲除效果檢測
        4.2.4 BmANT1在家蠶細(xì)胞中CRISPR/Cas9敲除對(duì)BmNPV增殖的影響
    4.3 討論
第五章 BmHsp60和BmANT1對(duì)BmNPV增殖的共同影響
    5.1 材料與方法
        5.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        5.1.2 試劑及溶液配置
        5.1.3 主要儀器
        5.1.4 實(shí)驗(yàn)方法與步驟
    5.2 結(jié)果與分析
        5.2.1 過表達(dá)BmHsp60同時(shí)過表達(dá)或敲除BmANT1對(duì)BmNPV增殖的影響
        5.2.2 過表達(dá)BmANT1同時(shí)過表達(dá)或敲除BmHsp60對(duì)BmNPV增殖的影響
        5.2.3 BmHsp60與BmANT1在BmNPV感染過程中對(duì)細(xì)胞ATP水平影響
    5.3 討論
第六章 BmHsp60調(diào)控BmANT1機(jī)制初探
    6.1 材料與方法
        6.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        6.1.2 試劑及溶液配置
        6.1.3 主要儀器
        6.1.4 實(shí)驗(yàn)方法與步驟
    6.2 結(jié)果與分析
        6.2.1 BmHsp60對(duì)BmANT1轉(zhuǎn)錄水平調(diào)控研究
        6.2.2 BmNPV對(duì)宿主TLR4受體通路激活的研究
        6.2.3 NF-κB抑制劑PDTC對(duì)BmNPV增殖及BmANT1表達(dá)影響
    6.3 討論
第七章 結(jié)論與展望
    7.1 結(jié)論
    7.2 展望
論文創(chuàng)新點(diǎn)
參考文獻(xiàn)
在讀期間發(fā)表論文及參加課題
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]家蠶表皮蛋白基因的表達(dá)譜分析及表皮蛋白BmorCPT1的功能研究[D]. 梁九波.西南大學(xué) 2012

碩士論文
[1]家蠶中腸及圍食膜與BmNPV互作蛋白的鑒定[D]. 耿磊.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[2]家蠶核型多角體病毒（BmNPV）增殖復(fù)制關(guān)鍵基因的篩選與鑒定[D]. 何倩.西南大學(xué) 2014



本文編號(hào)：3203935