抗菌肽（Antibmicrobial peptides）是體液免疫中產(chǎn)生的效應(yīng)分子,在昆蟲的免疫防御中起重要作用。家蠶是一種重要的經(jīng)濟昆蟲,也是鱗翅目昆蟲的模式代表,其免疫機制的研究備受關(guān)注。根據(jù)抗菌肽的結(jié)構(gòu)和功能特點,家蠶中的抗菌肽被分為7個家族,其中Cecropin、Attacin、Lebocin、Moricin、Enbocin和Gloverin 6個家族抗菌肽的功能和活性已有報道,而Defensin家族的兩個抗菌肽成員DefensinA和DefensinB的功能尚未得到鑒定,仍有待進一步研究。論文首先通過桿狀病毒真核表達系統(tǒng)表達家蠶抗菌肽DefensinB,檢測重組蛋白DefensinB的抑菌活性;其次,從不同家蠶品種擴增DefensinB的基因序列,分析品種間的序列差異,并進一步檢測細菌和真菌誘導(dǎo)后不同品種中家蠶DefensinB基因的轉(zhuǎn)錄表達情況。研究獲得以下主要結(jié)果:1、以家蠶幼蟲脂肪體cDNA為模板,通過RT-PCR擴增得到C端帶有His.tag的DefensinB編碼序列,酶切連接到pFastBac1載體,成功構(gòu)建pFast Bac1-DefensinB重組載體,利用B... 

【文章來源】：華南農(nóng)業(yè)大學(xué)廣東省

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
1 前言
    1.1 家蠶的體液免疫
    1.2 昆蟲Defensin的研究概況
    1.3 本論文的研究目的和意義
2 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 實驗質(zhì)粒、菌株、細胞和家蠶
        2.1.2 主要藥品及試劑
        2.1.3 主要消耗品及其處理方法
        2.1.4 常用溶液及培養(yǎng)基的配制
        2.1.5 Tricine-SDS-PAGE相關(guān)試劑
        2.1.6 蛋白質(zhì)純化試劑
        2.1.7 蛋白質(zhì)免疫印記試劑
        2.1.8 主要儀器及設(shè)備
    2.2 實驗方法
        2.2.1 真核表達載體pFastBac1-DefensinB的構(gòu)建
        2.2.2 重組桿狀病毒的獲得
        2.2.3 重組病毒AcMNPV-DefensinB的制備與增殖
        2.2.4 目的蛋白DefensinB的表達與鑒定
        2.2.5 重組桿狀病毒表達蛋白的大量純化
        2.2.6 DefensinB重組蛋白抑菌活性鑒定
        2.2.7 不同品種家蠶DefensinB的序列差異分析
        2.2.8 不同品種家蠶DefensinB對微生物誘導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄活性檢測
3 結(jié)果與分析
    3.1 家蠶與其他鱗翅目昆蟲Defensin序列的比對分析
    3.2 家蠶DefensinB基因PCR擴增
    3.3 重組表達載體的構(gòu)建
    3.4 重組桿狀病毒的獲得
    3.5 桿狀病毒感染的Sf9細胞的病變分析
    3.6 重組蛋白DefensinB的表達鑒定
        3.6.1 Western blot鑒定DefensinB的表達
        3.6.2 重組蛋白DefenisnB的純化與質(zhì)譜鑒定
    3.7 DefensinB蛋白的大量純化
    3.8 DefensinB蛋白的抑菌活性
        3.8.1 重組蛋白DefensinB對細菌的抑菌活性
        3.8.2 重組蛋白DefensinB對真菌的抑菌活性
    3.9 不同品種的家蠶DefensinB序列分析
    3.10 不同家蠶品種DefensinB的轉(zhuǎn)錄活性
        3.10.1 定量引物的特異性檢測
        3.10.2 qRT-PCR檢測靶基因轉(zhuǎn)錄活性
4 討論
    4.1 抗菌肽的重組表達策略
    4.2 DefensinB蛋白的抑菌活性
5 結(jié)論
致謝
本論文研究受到以下項目的資助
參考文獻
附錄


【參考文獻】：
期刊論文
[1]家蠶防御素基因的序列特征與表達模式分析及原核表達試驗[J]. 馬振剛,賈俊杰,陳全梅,黃為,李田,潘國慶,周澤揚.  蠶業(yè)科學(xué). 2012(02)



本文編號：3199871