為有效鑒定煙草的主要病毒,包括煙草普通花葉病毒（Tobacco mosaic virus,TMV）、黃瓜花葉病毒（Cucumber mosaic virus,CMV）、馬鈴薯Y病毒（Potato virus Y,PVY）和煙草脈帶花葉病毒（Tobacco vein banding mosaic virus,TVBMV）,建立了一種同時(shí)檢測這4種病毒的多重RT-PCR檢測方法。通過人工接種4種病毒試驗(yàn),發(fā)現(xiàn)TVBMV在混合侵染中受TMV、CMV和PVY的拮抗作用。為提高4種病毒復(fù)合侵染下TVBMV的檢測靈敏度,篩選出TVBMV中表達(dá)水平最高的PIPO基因,利用該基因結(jié)合TMV、CMV和PVY的CP基因,基于保守區(qū)域設(shè)計(jì)引物,并優(yōu)化引物及模板的濃度,在一個(gè)PCR反應(yīng)體系中穩(wěn)定擴(kuò)增獲得大小分別為700、452、275和235 bp的產(chǎn)物。該方法實(shí)現(xiàn)了對(duì)多種病毒的同時(shí)檢測,適用于目前大部分煙區(qū)田間病毒復(fù)合侵染的監(jiān)控。 

【文章來源】：煙草科技. 2020,53(09)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 病葉材料
    1.2 試劑
    1.3 煙草病葉總RNA的提取
    1.4 反轉(zhuǎn)錄
    1.5 引物設(shè)計(jì)
    1.6 單重PCR
    1.7 多重PCR
2 結(jié)果與分析
    2.1 煙草病葉總RNA檢測
    2.2 TMV和CMV的雙重PCR檢測體系構(gòu)建
    2.3 TMV、CMV和PVY的3重PCR檢測體系構(gòu)建
    2.4 TMV、CMV、PVY和TVBMV的4重PCR檢測體系構(gòu)建
        2.4.1 TVBMV引物篩選
        2.4.2 TVBMV在復(fù)合侵染中的分析
        2.4.3 4重PCR反應(yīng)條件的優(yōu)化
3 討論
4 結(jié)論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]檢測三種煙草病毒的一步法多重RT-PCR[J]. 張俊祺,楊軍,宋紀(jì)真,羅朝鵬,王燃,李鋒,周小龍.  煙草科技. 2014(02)
[2]云南煙草蝕紋病毒與其他病毒復(fù)合侵染的多重RT-PCR檢測[J]. 佟愛仔,趙興能,孔寶華,陳海如,蔡紅,楊根華,秦西云,莫笑晗.  云南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)). 2013(03)
[3]2011年云南煙草病毒病發(fā)生動(dòng)態(tài)及復(fù)合侵染分析[J]. 佟愛仔,趙興能,孔寶華,陳海如,蔡紅,楊根華,秦西云,莫笑晗.  植物病理學(xué)報(bào). 2013(01)
[4]陜西省煙草主要病毒病種類及植物帶毒的檢測[J]. 李金嶺,羅晶,牛小義,成巨龍,陳德鑫,安德榮.  西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2013(01)
[5]五種煙草病毒TMV、CMV、TEV、PVY及TVBMV的多重RT-PCR同步檢測[J]. 鄭軒,成巨龍,趙震,李正男,王威麟,張昊,吳云鋒.  植物病理學(xué)報(bào). 2011(02)
[6]煙草中TMV、CMV和PVY多重RT-PCR檢測體系的建立與應(yīng)用[J]. 楊金廣,張帥,申莉莉,錢玉梅,陳德鑫,王長栓,黃瑾,王鳳龍.  中國煙草學(xué)報(bào). 2010(04)
[7]RT-PCR快速檢測3種煙草病毒技術(shù)[J]. 谷瑞華,王進(jìn)忠,文思遠(yuǎn),王升啟,張愛環(huán),魏艷敏.  華北農(nóng)學(xué)報(bào). 2007(S1)
[8]應(yīng)用多重RT-PCR檢測煙草上的TMV和CMV[J]. 宋婷婷,陳榮溢,楊雷亮.  遼寧農(nóng)業(yè)科學(xué). 2007(01)
[9]陜西煙草病毒病毒原鑒定及種群區(qū)系分布[J]. 王秀敏,郝興安,吳云鋒,成巨龍,黎登寨.  煙草科技. 2005(08)
[10]全國16個(gè)主產(chǎn)煙�。▍^(qū)）煙草侵染性病害調(diào)研報(bào)告[J]. 陳瑞泰,朱賢朝,王智發(fā),郭振業(yè),董漢松,王蘭珍,劉延榮,石金開.  中國煙草科學(xué). 1997(04)



本文編號(hào)：3187189