甘蔗宿根矮化病（Ratoon stuning disease,RSD）是一種細(xì)菌性病害,長期困擾著世界各植蔗國和地區(qū)。其致病菌Leifsonia xyli subsp.xyli（Lxx）是一種革蘭氏陽性苛養(yǎng)菌,體外培養(yǎng)較為困難,因此,Lxx與C4作物甘蔗互作致病機(jī)理的研究進(jìn)展緩慢。直到近來有研究發(fā)現(xiàn)GFP標(biāo)記的Lxx出現(xiàn)在甘蔗“花環(huán)結(jié)構(gòu)”中的維管束鞘細(xì)胞和葉肉細(xì)胞處,表明Lxx不是一直以來研究者認(rèn)為的木質(zhì)部依賴菌,為Lxx致病性的探究開辟了新視角。C4作物特化的“花環(huán)結(jié)構(gòu)”與光合固碳途徑中C4循環(huán)密切相關(guān),Lxx侵染是否會造成甘蔗中該結(jié)構(gòu)的病變并影響甘蔗C4循環(huán)和光合固碳功能亟待探索,本研究旨在從細(xì)胞、生理和分子水平探討Lxx侵染對甘蔗C4循環(huán)的影響,以探尋Lxx在甘蔗中的致病機(jī)理。以健康和感RSD且矮化明顯的拔地拉蔗株為材料,利用樹脂半薄切片技術(shù)分析Lxx侵染對甘蔗“花環(huán)結(jié)構(gòu)”的影響,同時對該區(qū)域的光合固碳終產(chǎn)物淀粉進(jìn)行染色,并運(yùn)用原位PCR對Lxx的定植區(qū)進(jìn)行探究。在實(shí)現(xiàn)對Lxx分離、培養(yǎng)和鑒定的基礎(chǔ)上,以健康種莖為供試材料,進(jìn)行Lxx接種研究。利用qPCR對葉中的Lxx進(jìn)行定量,... 

【文章來源】：華僑大學(xué)福建省

【文章頁數(shù)】：89 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第1章 引言
    1.1 甘蔗宿根矮化病研究進(jìn)展綜述
        1.1.1 甘蔗宿根矮化病的發(fā)現(xiàn)與調(diào)查
        1.1.2 甘蔗宿根矮化病致病菌Leifsoniaxylisubsp.xyli
        1.1.3 甘蔗宿根矮化病的檢測與防治
        1.1.4 Lxx與甘蔗的互作研究
    1.2 植物C4光合作用途徑簡述
        1.2.1 C4途徑光合作用的優(yōu)越性
        1.2.2 C4關(guān)鍵酶酶活特性以及測定原理
    1.3 選題依據(jù)、研究內(nèi)容及意義
第2章 甘蔗宿根矮化病菌的分離、培養(yǎng)與鑒定
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑和儀器
        2.1.3 蔗汁RSD感病性檢測
        2.1.4 RSD病原菌Lxx的分離、培養(yǎng)
        2.1.5 病原菌Lxx的形態(tài)學(xué)鑒定
        2.1.6 病原菌Lxx分子生物學(xué)鑒定
    2.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
        2.2.1 疑似染RSD蔗株的PCR鑒定
        2.2.2 病原菌Lxx的分離培養(yǎng)及形態(tài)學(xué)特征
        2.2.3 病原菌Lxx的分子生物學(xué)鑒定
第3章 感染RSD蔗株的解剖結(jié)構(gòu)與Lxx的組織定位
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.2 主要生化試劑和儀器
        3.1.3 樹脂半薄切片的制作
        3.1.4 樹脂半薄切片多糖染色
        3.1.5 對冰凍切片中Lxx直接原位PCR方法的建立
    3.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
        3.2.1 RSD蔗株與健康蔗株局部組織結(jié)構(gòu)差異
        3.2.2 RSD蔗株與健康甘蔗葉片多糖染色情況
        3.2.3 Lxx在甘蔗莖、葉中的定植區(qū)
    3.3 討論
        3.3.1 于冰凍切片上直接原位PCR探究Lxx定植區(qū)
        3.3.2 基于Lxx定植區(qū)結(jié)構(gòu)功能對Lxx致病性的思考
第4章 Lxx侵染對甘蔗C4途徑酶活性及基因表達(dá)的影響
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        4.1.1 材料處理
        4.1.2 主要生化試劑和儀器
        4.1.3 qPCR定量分析葉片中Lxx細(xì)胞數(shù)量
        4.1.4 Lxx侵染下甘蔗差異表達(dá)基因富集分析
        4.1.5 甘蔗C4途徑關(guān)鍵酶活的測定
        4.1.6 甘蔗C4途徑關(guān)鍵酶基因表達(dá)量的測定
    4.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
        4.2.1 接種后不同時期甘蔗葉片中Lxx細(xì)胞數(shù)量變化
        4.2.2 Lxx侵染下甘蔗差異表達(dá)基因富集分析
        4.2.3 Lxx侵染對甘蔗葉中C4途徑關(guān)鍵酶活的影響
        4.2.4 Lxx侵染對甘蔗葉中C4途徑關(guān)鍵酶基因表達(dá)量的影響
    4.3 討論
        4.3.1 Lxx侵染對甘蔗C4途徑酶活性及基因表達(dá)的影響
        4.3.2 基于Lxx侵染下C4循環(huán)關(guān)鍵酶的響應(yīng)對Lxx致病性的思考
第5章 總結(jié)與展望
    5.1 總結(jié)
    5.2 創(chuàng)新點(diǎn)
    5.3 不足與展望
參考文獻(xiàn)
致謝
個人簡歷、在校期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文和研究成果



本文編號：3182648