小菜蛾P(guān)lutella xylostella是十字花科蔬菜上的主要害蟲之一,因長期、大量使用廣譜性化學(xué)殺蟲劑,小菜蛾對常用的許多殺蟲劑產(chǎn)生了較強(qiáng)的抗藥性。玫煙色棒束孢Isaria fumosorosea作為一類重要的昆蟲病原真菌可有效地控制小菜蛾種群數(shù)量的增長。有研究表明玫煙色棒束孢分泌的類枯草桿菌絲氨酸蛋白酶、絲氨酸類胰蛋白酶、幾丁質(zhì)酶、抗菌肽類等蛋白酶參與了菌體對宿主的侵染;感染玫煙色棒束孢后,小菜蛾體內(nèi)Serpins基因的表達(dá)量明顯上調(diào);這表明玫煙色棒束孢在侵染小菜蛾的過程中存在著致病基因與受體基因間的識別、免疫互作關(guān)系。本論文通過利用酵母雙雜交技術(shù),構(gòu)建由小菜蛾誘導(dǎo)的玫煙色棒束孢酵母雙雜交cDNA文庫,以小菜蛾Serpin基因編碼的蛋白為誘餌,利用酵母雙雜交技術(shù),以期從cDNA文庫中篩選出與誘餌蛋白相互作用的蛋白及其相對應(yīng)的功能基因,明確玫煙色棒束孢與小菜蛾間的互作關(guān)系。（1）玫煙色棒束孢酵母雙雜交cDNA文庫的構(gòu)建與檢測以小菜蛾為誘導(dǎo)物、培養(yǎng)玫煙色棒束孢菌絲一定時間后,抽濾菌絲并提取菌絲的總RNA,根據(jù)Clontech公司的Make Your Own“Mate&Pla... 

【文章來源】：華南農(nóng)業(yè)大學(xué)廣東省

【文章頁數(shù)】：56 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 玫煙色棒束孢的研究現(xiàn)狀
        1.1.1 玫煙色棒束孢的生物學(xué)特性
        1.1.2 玫煙色棒束孢對寄主的侵染過程
        1.1.3 玫煙色棒束孢的分子生物學(xué)研究
        1.1.4 玫煙色棒束孢在生物防治中的應(yīng)用
    1.2 小菜蛾的抗性機(jī)理研究
        1.2.1 小菜蛾的抗藥性機(jī)理研究
        1.2.2 小菜蛾的免疫機(jī)制研究
    1.3 Serpins的研究現(xiàn)狀
        1.3.1 Serpins的結(jié)構(gòu)及作用機(jī)制
        1.3.2 Serpins在昆蟲免疫中的作用及研究
    1.4 酵母雙雜交的研究進(jìn)展
    1.5 研究目的及意義
2 玫煙色棒束孢酵母雙雜交c DNA文庫的構(gòu)建與檢測
    2.1 材料和方法
        2.1.1 主要儀器、設(shè)備
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)材料與試劑
        2.1.3 玫煙色棒束孢菌絲總RNA的提取
        2.1.4 c DNA第一條鏈的合成
        2.1.5 雙鏈c DNA的合成與純化
        2.1.6 雙鏈c DNA與載體的同源重組及轉(zhuǎn)化
        2.1.7 收獲克隆
        2.1.8 文庫質(zhì)量鑒定
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 玫煙色棒束孢菌絲總RNA的制備
        2.2.2 ds cDNA的制備
        2.2.3 cDNA文庫的制備
        2.2.4 cDNA文庫的檢測
    2.3 討論
3 誘餌質(zhì)粒p GBK T7-Serpin的構(gòu)建及其自激活效應(yīng)和毒性檢測
    3.1 材料與方法
        3.1.1 主要儀器、設(shè)備
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)材料與試劑
        3.1.3 誘餌質(zhì)粒的構(gòu)建與鑒定
        3.1.4 誘餌質(zhì)粒的自激活效應(yīng)與毒性檢測
    3.2 結(jié)果
        3.2.1 誘餌質(zhì)粒p GBK T7- Serpin的構(gòu)建與鑒定
        3.2.2 誘餌質(zhì)粒p GBK T7-Serpin的自激活效應(yīng)檢測
        3.2.3 誘餌質(zhì)粒p GBK T7-Serpin的毒性檢測
    3.3 討論
4 c DNA文庫中與Serpin基因表達(dá)蛋白的互作蛋白篩選
    4.1 材料與方法
        4.1.1 主要儀器、設(shè)備
        4.1.2 實(shí)驗(yàn)材料與試劑
        4.1.3 用p GBK T7-Serpin誘餌菌株從酵母雙雜交c DNA文庫中篩選互作蛋白
    4.2 結(jié)果
        4.2.1 雜交二倍體形態(tài)檢測
        4.2.2 雜交效率檢測
        4.2.3 所篩二倍體菌落數(shù)計(jì)算
        4.2.4 酵母雙雜交陽性菌落的篩選
        4.2.5 酵母雙雜交陽性菌落的鑒定
    4.3 討論
5 本論文的創(chuàng)新之處
6 進(jìn)一步研究設(shè)想
致謝
參考文獻(xiàn)


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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[5]玫煙色棒束孢毒力基因的克隆與表達(dá)及球孢白僵菌高毒力重組菌株的獲得[D]. 湯強(qiáng).安徽農(nóng)業(yè)大學(xué) 2009

碩士論文
[1]玫煙色棒束孢對煙粉虱的侵染及對生殖的影響[D]. 高天妮.華南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
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[3]利用酵母雙雜交系統(tǒng)篩選家蠶BR-C轉(zhuǎn)錄因子的相互作用蛋白[D]. 王永虎.西南大學(xué) 2013
[4]小菜蛾對氯蟲苯甲酰胺的抗性風(fēng)險評估及分子機(jī)理[D]. 宮維.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013
[5]家蠶絲氨酸蛋白酶抑制劑Serpin5多克隆抗體制備及組織表達(dá)分析[D]. 李國勝.蘇州大學(xué) 2013
[6]應(yīng)用酵母雙雜交系統(tǒng)篩選與CITED1相互作用蛋白[D]. 林振.南方醫(yī)科大學(xué) 2013



本文編號：3179599