蘇云金芽胞桿菌（Bacillus thuringensis,Bt）是一種對多種害蟲具有特異性毒殺作用的革蘭氏陽性菌,研究Bt對天牛的殺蟲活性有助于開辟天牛綠色防控新途徑,是利用生物防治方法防治農(nóng)林害蟲的重要的手段。為深入發(fā)掘蘇云金芽胞桿菌在防治林業(yè)害蟲上的應(yīng)用,利用Bt菌Cry8類基因編碼的6種蛋白和營養(yǎng)期產(chǎn)生的兩種分泌蛋白Vip1和Vip2,對光肩星天牛（Anoplophora glabripennis Motsch.）和雙條杉天牛（Semanotus bifasiatus Matsch.）的幼蟲通過室內(nèi)生物活性測定實驗,從中篩選出對這兩種試蟲有活性的Bt蛋白,并根據(jù)中腸切片的電鏡觀察和轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)比較分析,對殺蟲機(jī)理進(jìn)行了初步的探索。研究結(jié)果如下:1、通過對雙條杉天牛人工飼料的篩選和室內(nèi)人工飼料飼養(yǎng),成功建立了人工飼養(yǎng)雙條杉天牛的實驗種群,本研究的結(jié)果也為天�？破渌炫５娜斯わ暳系拈_發(fā)提供借鑒。2、篩選出一種對光肩星天牛具有高活力的Bt蛋白—Cry8Ha1,生測結(jié)果顯示,經(jīng)胰凝乳蛋白酶消化的Cry8Ha1蛋白對光肩星天牛具有較高的活性,最高致死率可達(dá)95%;通過篩選,Cry8Ha1對... 

【文章來源】：北京林業(yè)大學(xué)北京市 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
主要縮略詞和符號表
1 引言
    1.1 國內(nèi)外研究述評
        1.1.1 兩種蛀干天牛在林業(yè)上的危害
        1.1.2 天牛的防治
        1.1.3 天牛飼料的研究進(jìn)展
        1.1.4 蘇云金芽胞桿菌的研究進(jìn)展及趨勢
        1.1.5 轉(zhuǎn)錄組測序在昆蟲領(lǐng)域研究現(xiàn)狀
    1.2 本論文研究的目的與意義
    1.3 研究內(nèi)容
    技術(shù)路線
2 材料和方法
    2.1 供試?yán)ハx
    2.2 實驗材料
        2.2.1 人工飼料的配制
        2.2.2 菌株與基因
        2.2.3 培養(yǎng)基和抗生素
        2.2.4 SDS-PAGE相關(guān)溶液
        2.2.5 試劑及配制方法
        2.2.6 主要實驗儀器
        2.2.7 酶類與生化試劑
    2.3 實驗方法
        2.3.1 雙條杉天牛飼料篩選
        2.3.2 Bt中Cry蛋白的提取
        2.3.3 Bt中Vip蛋白的提取
        2.3.4 SDS-PAGE分析
        2.3.5 蛋白定量
        2.3.6 天牛生物活性測定方法
        2.3.7 光肩星天牛中腸電鏡觀察
        2.3.8 光肩星天牛幼蟲中腸RNA的提取
        2.3.9 第1鏈cDNA的合成
        2.3.10 轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)分析
3 結(jié)果分析
    3.1 雙條杉天牛人工飼料篩選結(jié)果分析
        3.1.1 第1次正交實驗結(jié)果分析
        3.1.2 第2次正交試驗結(jié)果與分析
        3.1.3 優(yōu)化飼料配方驗證
    3.2 Bt蛋白的定量分析
    3.3 Cry8類蛋白胰凝乳蛋白酶消化條件建立
    3.4 Bt蛋白對雙條杉天牛生物活性測定結(jié)果
        3.4.1 Bt蛋白對雙條杉天牛幼蟲死亡率影響
        3.4.2 Bt蛋白對雙條杉天牛幼蟲體重的影響
    3.5 對光肩星天牛具有活性的Bt蛋白篩選和殺蟲機(jī)理研究
        3.5.1 Bt蛋白對光肩星天牛生物活性測定結(jié)果
        3.5.2 光肩星天牛中腸透射電鏡觀察
        3.5.3 光肩星天牛中腸總RNA提取結(jié)果分析
        3.5.4 光肩星天牛中腸轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果分析
        3.5.5 差異表達(dá)分析
4 結(jié)論
5 討論
參考文獻(xiàn)
個人簡介
導(dǎo)師簡介
第二導(dǎo)師簡介
獲得成果目錄
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]光肩星天牛的發(fā)生及防治[J]. 馬躍.  農(nóng)業(yè)與技術(shù). 2017(07)
[2]雙條杉天牛發(fā)生規(guī)律調(diào)查及防治藥劑篩選試驗[J]. 孟慶蘭,王曉翠,劉陽,侯雙霞,苗興軍.  現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技. 2016(22)
[3]鱗翅目昆蟲人工飼養(yǎng)技術(shù)研究進(jìn)展[J]. 戴長庚,歐陽芳,陳湘燕,胡陽.  南方農(nóng)業(yè)學(xué)報. 2016(05)
[4]2015年全球生物技術(shù)/轉(zhuǎn)基因作物商業(yè)化發(fā)展態(tài)勢[J]. Clive James.  中國生物工程雜志. 2016(04)
[5]遼寧地區(qū)林業(yè)有害生物雙條杉天牛風(fēng)險分析[J]. 王鳳英,于秀杰,蘇建明.  安徽農(nóng)業(yè)科學(xué). 2016(06)
[6]光肩星天牛防控技術(shù)研究進(jìn)展[J]. 遇文婧,趙紅盈.  中國農(nóng)學(xué)通報. 2016(10)
[7]中國設(shè)施蔬菜害蟲天敵昆蟲應(yīng)用研究進(jìn)展[J]. 張帆,李姝,肖達(dá),趙靜,王然,郭曉軍,王甦.  中國農(nóng)業(yè)科學(xué). 2015(17)
[8]稻縱卷葉螟人工飼料中防霉劑對曲霉的抑制效果[J]. 張樹坤,王業(yè)成,蘇建亞,任秀貝.  南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報. 2014(02)
[9]基于新一代測序技術(shù)的昆蟲轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究進(jìn)展[J]. 張棋麟,袁明龍.  昆蟲學(xué)報. 2013(12)
[10]我國林業(yè)檢疫性和危險性有害生物新名單的特點[J]. 李娟,崔永三,宋玉雙,程相稱.  中國森林病蟲. 2013(05)

博士論文
[1]對金龜甲科、葉甲科害蟲高毒力蘇云金芽胞桿菌殺蟲基因及工程菌的研究[D]. 閆貴欣.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2009
[2]防護(hù)林楊樹天牛災(zāi)害的生態(tài)調(diào)控理論與技術(shù)研究[D]. 駱有慶.北京林業(yè)大學(xué) 2005

碩士論文
[1]中華稻蝗若蟲和成蟲轉(zhuǎn)錄組的比較研究及線粒體轉(zhuǎn)錄組作圖[D]. 呂紅娟.陜西師范大學(xué) 2012
[2]雙條杉天牛無公害防治技術(shù)研究[D]. 王宏琦.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2008
[3]北京園林雙條杉天牛綜合防治技術(shù)的研究[D]. 劉育儉.中國農(nóng)業(yè)大學(xué) 2005



本文編號：3172156