發(fā)布時(shí)間：2021-05-06 12:37

　　桑樹產(chǎn)生的次生代謝物黃酮、酚類和生物堿等物質(zhì),具有多種生理藥理活性,建立桑樹細(xì)胞體外高效生產(chǎn)次生代謝產(chǎn)物的方法與技術(shù),有益于實(shí)現(xiàn)對桑樹藥用活性成分的規(guī)�；_發(fā)利用。近年發(fā)展起來的植物組織培養(yǎng)生產(chǎn)次生代謝物的方法,具有不受環(huán)境限制,細(xì)胞增殖速度快的特點(diǎn),已經(jīng)用于植物次生代謝產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn)。在植物細(xì)胞懸浮培養(yǎng)過程中可以通過添加外源誘導(dǎo)物來激活細(xì)胞代謝過程中酶的活性,從而能夠增加次生代謝物的產(chǎn)量,甚至可以誘導(dǎo)出新的化合物。因此,本文在建立桑懸浮細(xì)胞培養(yǎng)體系的基礎(chǔ)上,向桑懸浮細(xì)胞系中添加不同濃度的外源誘導(dǎo)子,以促進(jìn)桑懸浮細(xì)胞次生代謝物的累積。主要研究結(jié)果如下:以桑品種育-711的葉片作為外植體誘導(dǎo)愈傷組織及初步建立懸浮細(xì)胞系。桑懸浮細(xì)胞在MS液體培養(yǎng)基中添加1.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L 2,4-D+0.1 mg/L NAA的培養(yǎng)條件下生長曲線呈“S”型,活細(xì)胞數(shù)量在懸浮培養(yǎng)第16 d時(shí)達(dá)到峰值。培養(yǎng)16 d后,由于培養(yǎng)基中的營養(yǎng)物質(zhì)消耗以及有毒代謝物的積累導(dǎo)致活細(xì)胞數(shù)目減少,進(jìn)入生長減緩期。因此,為保持細(xì)胞旺盛的分裂能力和細(xì)胞活性,桑懸浮細(xì)胞培養(yǎng)的繼代時(shí)間為16 d左右較合適... 

【文章來源】：江蘇科技大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：89 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 緒論
    1.1 懸浮細(xì)胞培養(yǎng)
        1.1.1 懸浮細(xì)胞培養(yǎng)概述
        1.1.2 植物懸浮細(xì)胞培養(yǎng)的現(xiàn)狀
        1.1.3 植物細(xì)胞培養(yǎng)生產(chǎn)次生代謝產(chǎn)物的分類與合成途徑
        1.1.4 植物細(xì)胞培養(yǎng)生產(chǎn)次生代謝物的調(diào)控
    1.2 桑樹
        1.2.1 桑的概述
        1.2.2 桑懸浮細(xì)胞及其次生代謝產(chǎn)物
        1.2.3 桑懸浮細(xì)胞研究現(xiàn)狀
    1.3 誘導(dǎo)子
        1.3.1 誘導(dǎo)子概述
        1.3.2 誘導(dǎo)機(jī)理
    1.4 研究目的與主要內(nèi)容
        1.4.1 研究目的與意義
        1.4.2 研究內(nèi)容與技術(shù)路線
第2章 桑懸浮細(xì)胞培養(yǎng)體系的建立及其表征
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 桑懸浮細(xì)胞培養(yǎng)基的配制
        2.2.2 桑愈傷組織的誘導(dǎo)
        2.2.3 MS液體培養(yǎng)基中不同激素配比對桑懸浮細(xì)胞生長的測定
        2.2.4 桑懸浮細(xì)胞生長曲線的繪制
        2.2.5 桑懸浮細(xì)胞生長過程的細(xì)胞學(xué)觀察
        2.2.6 SEM分析桑懸浮細(xì)胞生長過程的表面狀態(tài)
        2.2.7 統(tǒng)計(jì)分析
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 MS液體培養(yǎng)基中不同激素配比對桑懸浮細(xì)胞生長的影響
        2.3.2 桑懸浮細(xì)胞生長曲線的繪制
        2.3.3 桑懸浮細(xì)胞生長過程的細(xì)胞學(xué)觀察
        2.3.4 SEM分析桑懸浮細(xì)胞生長過程的表面狀態(tài)
    2.4 本章小結(jié)
第3章 誘導(dǎo)子對桑懸浮細(xì)胞次生代謝物累積的影響
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        3.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 不同誘導(dǎo)子的制備及對桑懸浮細(xì)胞的誘導(dǎo)
        3.2.2 桑懸浮細(xì)胞次生代謝產(chǎn)物積累的測定
        3.2.3 桑懸浮細(xì)胞超氧化物歧化酶活性的測定
        3.2.4 SEM分析不同濃度COR誘導(dǎo)的桑懸浮細(xì)胞表征
        3.2.5 統(tǒng)計(jì)分析
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 冠菌素、β-環(huán)糊精、殼聚糖對桑懸浮細(xì)胞生物量積累的影響
        3.3.2 冠菌素對桑懸浮細(xì)胞次生代謝產(chǎn)物積累的影響
        3.3.3 β-環(huán)糊精對桑懸浮細(xì)胞次生代謝產(chǎn)物積累的影響
        3.3.4 殼聚糖對桑懸浮細(xì)胞次生代謝產(chǎn)物積累的影響
        3.3.5 冠菌素、β-環(huán)糊精、殼聚糖對桑懸浮細(xì)胞超氧化物歧化酶活性影響
        3.3.6 SEM分析COR誘導(dǎo)的桑懸浮細(xì)胞表征
    3.4 討論
    3.5 本章小結(jié)
第4章 復(fù)合誘導(dǎo)對桑懸浮細(xì)胞次生代謝累積的影響
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        4.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 誘導(dǎo)子的制備及對桑懸浮細(xì)胞的誘導(dǎo)
        4.2.2 桑懸浮細(xì)胞生物量積累的測定
        4.2.3 桑懸浮細(xì)胞次生代謝產(chǎn)物積累的測定
        4.2.4 桑懸浮細(xì)胞超氧化物歧化酶活性的測定
        4.2.5 統(tǒng)計(jì)分析
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 復(fù)合誘導(dǎo)對桑懸浮細(xì)胞生物量積累的影響
        4.3.2 復(fù)合誘導(dǎo)對桑懸浮細(xì)胞次生代謝產(chǎn)物積累的影響
        4.3.3 復(fù)合誘導(dǎo)對桑懸浮細(xì)胞超氧化物歧化酶活性影響
    4.4 討論
    4.5 本章小結(jié)
第5章 黃酮生物合成相關(guān)基因的鑒定與分析
    5.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器
        5.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        5.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        5.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
    5.2 實(shí)驗(yàn)方法
        5.2.1 供試桑懸浮細(xì)胞的制備
        5.2.2 轉(zhuǎn)錄組測序?qū)嶒?yàn)流程
        5.2.3 測序原始數(shù)據(jù)以及質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)
        5.2.4 cDNA文庫測序
    5.3 結(jié)果與分析
        5.3.1 Denovo拼接
        5.3.2 基因表達(dá)差異性統(tǒng)計(jì)
        5.3.3 Unigene與nr數(shù)據(jù)庫比對
        5.3.4 Unigene與SWISSPROT數(shù)據(jù)庫比對
        5.3.5 Unigene與KOG分類
        5.3.6 Unigene與GO注釋
        5.3.7 Unigene與KEGG注釋
        5.3.8 黃酮代謝相關(guān)的差異表達(dá)基因鑒定
    5.4 討論
    5.5 本章小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]含三唑氮雜環(huán)結(jié)構(gòu)的黃酮類外源抗氧化劑的合成與分析[J]. 鐘遠(yuǎn)平,唐潮聲,余萍,段志芳.  化學(xué)世界. 2018(01)
[2]煙草懸浮細(xì)胞系的構(gòu)建[J]. 孔瓊,袁盛勇,肖亞楠,楊文超,陳俊梅,蔣雙番,史艷春,楊升.  江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué). 2018(01)
[3]UPLC-MS/MS法測定藥桑不同部位中1-脫氧野尻霉素的含量[J]. 孫蓮,張暉,馬曉麗.  化學(xué)研究與應(yīng)用. 2017(03)
[4]桑樹黃烷酮-3-羥化酶基因的克隆及在35份桑種質(zhì)資源植株葉片中的表達(dá)差異[J]. 尚亞君,錢嬌,倪紅梅,方榮俊,潘剛,趙衛(wèi)國,張林,劉利.  蠶業(yè)科學(xué). 2016(05)
[5]紅豆杉高產(chǎn)懸浮細(xì)胞系建立及其紫杉醇誘導(dǎo)的研究進(jìn)展[J]. 王沐蘭,楊生超,郁步竹,李唯奇.  廣西植物. 2016(09)
[6]植物細(xì)胞懸浮培養(yǎng)中次生代謝產(chǎn)物積累的研究進(jìn)展[J]. 陳月華,朱艷,張翔,秦民堅(jiān).  中國野生植物資源. 2016(03)
[7]桑樹愈傷組織誘導(dǎo)及懸浮細(xì)胞系的建立[J]. 王超,姚晨輝,朱林琳,高敏,趙永亮,王海燕,王俊,吳福安.  蠶業(yè)科學(xué). 2016(01)
[8]不同誘導(dǎo)子對黃芪懸浮培養(yǎng)細(xì)胞中黃芪多糖積累的影響[J]. 楊靜,孫皓.  安徽農(nóng)業(yè)科學(xué). 2014(26)
[9]多胺介導(dǎo)真菌誘導(dǎo)子促進(jìn)白樺三萜積累的初步研究[J]. 劉英甜,王曉東,周文洋,詹亞光,范桂枝.  中草藥. 2014(05)
[10]曼地亞紅豆杉細(xì)胞懸浮培養(yǎng)體系的建立[J]. 趙繼鵬,楊淑慎.  西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2014(01)

博士論文
[1]紅花黃酮類化合物生物合成途徑關(guān)鍵酶基因的克隆與功能驗(yàn)證[D]. 劉飛.第二軍醫(yī)大學(xué) 2014
[2]棉花懸浮細(xì)胞系的建立及其培養(yǎng)細(xì)胞的程序性死亡的觀察研究[D]. 夏啟中.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2005

碩士論文
[1]殼聚糖羥基肉桂酸衍生物的制備及其抑菌活性的研究[D]. 楊采風(fēng).江蘇科技大學(xué) 2016
[2]貫葉連翹懸浮細(xì)胞培養(yǎng)生產(chǎn)黃酮類物質(zhì)的研究[D]. 王璟.華東理工大學(xué) 2015
[3]桑丁香假單胞菌穩(wěn)產(chǎn)冠菌素關(guān)鍵技術(shù)的研究[D]. 李剛.江蘇科技大學(xué) 2014
[4]桑細(xì)胞培養(yǎng)物的化學(xué)成分與植物懸浮細(xì)胞對芳香酚類化合物的生物轉(zhuǎn)化研究[D]. 陶小宇.北京中醫(yī)藥大學(xué) 2013
[5]曼地亞紅豆杉懸浮培養(yǎng)細(xì)胞產(chǎn)紫杉醇條件優(yōu)化研究[D]. 趙繼鵬.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2013
[6]桑樹原生質(zhì)體分離及融合的研究[D]. 羿德磊.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[7]葡萄細(xì)胞培養(yǎng)及其次生代謝產(chǎn)物白藜蘆醇的代謝調(diào)控[D]. 張真.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué) 2008
[8]黑曲霉提取物與水楊酸對長春花懸浮細(xì)胞生長及生物堿代謝作用的研究[D]. 姜發(fā)軍.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2004



本文編號：3171933