為了保證農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中農(nóng)作物的產(chǎn)量和人類食物的供給,農(nóng)藥的使用不可避免。其中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥在我國的使用量遠(yuǎn)高于其他農(nóng)藥品種,由此引發(fā)的農(nóng)產(chǎn)品中的殘留問題和引發(fā)的食物中毒情況也較為突出,所以農(nóng)藥殘留檢測已成為世界各國農(nóng)藥管理和食品安全監(jiān)管中的必要環(huán)節(jié)。由于常規(guī)實(shí)驗(yàn)室檢測時,前處理時間長,有毒試劑消耗量大,所需的儀器設(shè)備價格昂貴,需要有專業(yè)人員操作,只能在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)抽樣檢測,并不屬于快速檢測技術(shù)。因此,在食品安全監(jiān)管中仍然對于農(nóng)藥殘留快速檢測方法有著迫切需求。本研究將麥麩酯酶固定化,確定了麥麩酯酶的最佳固定化條件,研究了固定化酶的酶學(xué)性質(zhì),基于比色法原理研制了一種方便的農(nóng)藥殘留速測卡,能夠滿足對農(nóng)副產(chǎn)品進(jìn)行快速定性檢測的要求。主要研究結(jié)果如下:1.以麥麩中的植物酯酶為酶源,通過交聯(lián)、吸附方法比較,選擇物理吸附法將其固定于玻璃纖維素膜上,以酶活回收率為指標(biāo),探索其固定化的最佳條件。根據(jù)固定化條件的單因素試驗(yàn),利用Box-Behnken設(shè)計(jì),進(jìn)一步探索了緩沖液pH值、固定化時間、固定化溫度3個因素及交互作用對麥麩酯酶固定化效果的影響,確定的最佳固定化條件為:磷酸鹽緩沖液pH值7.0,固定化... 

【文章來源】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)四川省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
1 文獻(xiàn)綜述
    1.1 農(nóng)藥殘留問題
    1.2 農(nóng)殘檢測技術(shù)發(fā)展
        1.2.1 農(nóng)藥殘留理化檢測技術(shù)
        1.2.2 農(nóng)藥殘留快速檢測技術(shù)
    1.3 農(nóng)藥殘留酶抑制檢測法
        1.3.1 酶抑制檢測法檢測原理
        1.3.2 游離酶抑制檢測技術(shù)
    1.4 酯酶的固定化研究進(jìn)展
        1.4.1 吸附法
        1.4.2 結(jié)合法
        1.4.3 包埋法
        1.4.4 交聯(lián)法
    1.5 立題意義及研究內(nèi)容
        1.5.1 立題意義
        1.5.2 研究內(nèi)容
        1.5.3 技術(shù)路線
2 材料與方法
    2.1 材料、試劑與儀器
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料與試劑
        2.1.2 儀器設(shè)備
    2.2 試劑配制
        2.2.1 固藍(lán)B鹽溶液的配制
        2.2.2 α-乙酸奈酯溶液的配制
        2.2.3 農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)液的配制
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 麥麩酯酶固定化研究
        2.3.2 固定化麥麩酯酶的酶學(xué)性質(zhì)研究
        2.3.3 農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)液對固定化麥麩酯酶的抑制研究
        2.3.4 農(nóng)殘速測卡的研制及應(yīng)用
    2.4 數(shù)據(jù)處理
3 結(jié)果與分析
    3.1 麥麩酯酶固定化條件優(yōu)化
        3.1.1 各因素對麥麩酯酶固定化效率的影響分析
        3.1.2 響應(yīng)面法優(yōu)化麥麩酯酶固定化條件
    3.2 固定化麥麩酯酶酶學(xué)性質(zhì)
        3.2.1 固定化麥麩酯酶最適反應(yīng)pH
        3.2.2 固定化麥麩酯酶最適反應(yīng)溫度
        3.2.3 固定化麥麩酯酶的酸堿穩(wěn)定性
        3.2.4 固定化麥麩酯酶的熱穩(wěn)定性
        3.2.5 固定化麥麩酯酶的米氏常數(shù)（Km）及最大反應(yīng)速度（Vmax）
        3.2.6 固定化麥麩酯酶的表面特性
        3.2.7 固定化麥麩酯酶的穩(wěn)定性
    3.3 固定化麥麩酯酶用于檢測農(nóng)藥標(biāo)品
        3.3.1 農(nóng)藥抑制時間
        3.3.2 固定化麥麩酯酶對不同農(nóng)藥敏感性
        3.3.3 固定化麥麩酯酶對不同農(nóng)藥的最低檢測限
        3.3.4 丙酮濃度對固定化麥麩酯酶活性的影響
    3.4 農(nóng)藥殘留檢測速測卡的設(shè)計(jì)和研制
        3.4.1 速測卡制作條件的優(yōu)化
        3.4.2 農(nóng)藥標(biāo)品檢測
        3.4.3 農(nóng)殘速測卡方法驗(yàn)證
        3.4.4 實(shí)際樣品檢測
        3.4.5 速測卡有效期
4 討論
    4.1 麥麩酯酶的固定化條件
        4.1.1 固定化酶源的選擇
        4.1.2 固定化方法的選擇
        4.1.3 影響固定化酶效率的主要因素
    4.2 固定化酶酶學(xué)性質(zhì)變化
    4.3 固定化酶檢測農(nóng)藥殘留
    4.4 農(nóng)藥殘留速測卡
5 結(jié)論
    5.1 麥麩酯酶的最佳固定化條件
    5.2 固定化麥麩酯酶的酶學(xué)性質(zhì)
    5.3 固定化麥麩酯酶對農(nóng)藥的敏感性及最低檢測限
    5.4 農(nóng)藥殘留速測卡
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文及取得的其他成果



本文編號：3161018