由灰葡萄孢菌（Botrytis cinerea）引起的灰霉病是世界十大病害之一,可引起以番茄、葡萄、草莓等為主的至少200多種植物發(fā)病。由于灰葡萄孢菌繁殖速度快,變異性強(qiáng),轉(zhuǎn)座子活躍,目前該病仍以化學(xué)防治為主。但用于防治灰霉病的大多數(shù)藥劑都已產(chǎn)生抗藥性,甚至失效�？┚孀鳛橐环N新型殺菌劑,作用機(jī)制獨(dú)特,對防治灰霉病有特效,在許多國家均已登記使用,但在我國尚處于早期階段,近幾年逐漸開始用于灰霉病的防治。已有報(bào)道咯菌腈作用位點(diǎn)為Ⅲ型組氨酸激酶,作用機(jī)制與HOG途徑相關(guān),但其毒理學(xué)研究尚不透徹。本文通過構(gòu)建灰葡萄孢菌HOG途徑兩個(gè)分支上游元件組氨酸激酶Sln1和細(xì)胞膜感應(yīng)蛋白Sho1的敲除突變體、回復(fù)突變體及雙敲突變體,研究它們生物學(xué)功能、二者之間互作關(guān)系。具體研究結(jié)果如下:本文構(gòu)建了BcSho1 敲除突變體、完全回復(fù)突變體及不含跨膜結(jié)構(gòu)域的部分回復(fù)突變體,發(fā)現(xiàn)該蛋白定位于菌體細(xì)胞膜和隔膜上;若去掉該基因跨膜結(jié)構(gòu)域,則游離于細(xì)胞質(zhì)中。BcSho1基因敲除導(dǎo)致菌體較出發(fā)菌株對咯菌腈敏感性略有下降,但與其回復(fù)突變體之間差異不顯著;該基因參與調(diào)控灰葡萄孢菌對氧化脅迫、細(xì)胞壁脅迫因子敏感性,但與致病... 

【文章來源】：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：90 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
符號及縮略說明表
第一章 綜述
    1 灰霉病及防治研究現(xiàn)狀
        1.1 灰葡萄孢菌概況
        1.2 灰葡萄孢菌生活史及病害循環(huán)
        1.3 發(fā)病因素
        1.4 灰霉病防治研究現(xiàn)狀
            1.4.1 抗病育種防治現(xiàn)狀
            1.4.2 生物防治現(xiàn)狀
            1.4.3 農(nóng)業(yè)防治現(xiàn)狀
            1.4.4 化學(xué)防治現(xiàn)狀
    2 苯基吡咯類殺菌劑研究現(xiàn)狀
        2.1 拌種咯簡介
        2.2 咯菌腈及其研究進(jìn)展
            2.2.1 咯菌腈的理化性質(zhì)
            2.2.2 咯菌腈的研究進(jìn)展
    3 HOG途徑關(guān)鍵元件Sln1和Sho1的研究進(jìn)展
        3.1 組氨酸磷酸轉(zhuǎn)移激酶（Ⅵ型）Sln1研究進(jìn)展
        3.2 細(xì)胞膜感應(yīng)蛋白Sho1研究進(jìn)展
    4 本論文研究目的和意義
    參考文獻(xiàn)
第二章 灰葡萄孢菌細(xì)胞膜感應(yīng)蛋白BcSho1生物學(xué)功能研究
    1 材料與方法
        1.1 供試菌株及質(zhì)粒
        1.2 供試試劑及培養(yǎng)基
        1.3 DNA和RNA的提取
        1.4 灰葡萄孢菌BcSho1基因序列鑒定及系統(tǒng)進(jìn)化分析
        1.5 BcSho1基因敲除及GFP回復(fù)標(biāo)記
            1.5.1 BcSho1基因敲除載體的構(gòu)建
            1.5.2 BcSho1基因GFP回復(fù)標(biāo)記載體構(gòu)建
            1.5.3 灰葡萄孢菌原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化
            1.5.4 敲除突變體的驗(yàn)證
            1.5.5 回復(fù)突變體的驗(yàn)證
        1.6 BcSho1基因敲除突變體表型測定
            1.6.1 突變體對咯菌腈的敏感性測定
            1.6.2 突變體對腐霉利的敏感性測定
            1.6.3 致病力測定
            1.6.4 產(chǎn)菌核能力測定
            1.6.5 基因敲除突變體對不同溫度敏感性測定
            1.6.6 突變體對不同環(huán)境脅迫因子敏感性測定
            1.6.7 突變體菌絲生長量對堿性環(huán)境敏感性測定
            1.6.8 突變體菌絲甘油含量測定
            1.6.9 突變體對不同氮源敏感性測定
    2 結(jié)果與分析
        2.1 灰葡萄孢菌中BcSho1基因序列鑒定與分析
        2.2 灰葡萄孢菌BcSho1基因敲除突變體和BcSho1基因去掉跨膜區(qū)回復(fù)突變體的生物學(xué)特征
            2.2.1 BcSho1基因敲除突變體獲得
            2.2.2 BcSho1基因敲除及回復(fù)突變體形態(tài)
            2.2.3 BcSho1基因與灰葡萄孢菌對咯菌腈抗藥性相關(guān)
            2.2.4 BcSho1基因與灰葡萄孢菌對腐霉利敏感性相關(guān)
            2.2.5 BcSho1基因與灰葡萄孢菌對草莓葉和蘋果的致病性無關(guān)
            2.2.6 BcSho1基因調(diào)控菌體對不同環(huán)境脅迫因子的敏感性
            2.2.7 BcSho1基因調(diào)控灰葡萄孢菌對堿性環(huán)境忍耐力
            2.2.8 BcSho1基因與菌絲甘油合成相關(guān)
            2.2.9 BcSho1基因與菌體溫度敏感性相關(guān)
            2.2.10 BcSho1基因與菌體對不同氮源的利用能力相關(guān)
            2.2.11 灰葡萄孢菌BcSho1基因GFP標(biāo)記定位
    3 討論
    參考文獻(xiàn)
第三章 灰葡萄孢菌BcSln1生物學(xué)功能及與BcSho1協(xié)同作用研究
    1 材料與方法
        1.1 供試菌株及質(zhì)粒
        1.2 供試藥劑培養(yǎng)基
        1.3 DNA和RNA的提取
        1.4 灰葡萄孢菌BcSln1基因序列分析
        1.5 灰葡萄孢菌BcSln1基因敲除
            1.5.1 BcSln1基因敲除載體的構(gòu)建
            1.5.2 BcSln1敲除突變體的驗(yàn)證
        1.6 灰葡萄孢菌BcSln1和BcSho1基因雙敲除
            1.6.1 BcSho1雙敲除載體的構(gòu)建
            1.6.2 BcSln1和BcSho1雙敲除突變體的驗(yàn)證
        1.7 BcSln1基因敲除突變體、BcSln1和BcSho1雙敲除體表型測定
            1.7.1 BcSln1敲除突變體對咯菌腈的敏感性測定
            1.7.2 BcSln1敲除突變體對腐霉利的敏感性測定
            1.7.3 致病力測定
            1.7.4 產(chǎn)菌核能力測定
            1.7.5 基因敲除突變體對不同溫度敏感性測定
            1.7.6 突變體對不同環(huán)境脅迫因子敏感性測定
            1.7.7 突變體菌絲生長量對不同pH敏感性測定
            1.7.8 突變體菌絲甘油含量測定
            1.7.9 突變體對不同氮源敏感性測定
    2 結(jié)果與分析
        2.1 灰葡萄孢菌中BcSln1基因序列鑒定與分析
        2.2 灰葡萄孢菌BcSln1基因敲除突變體及BcSln1和BcSho1基因雙敲除的生物學(xué)特征
            2.2.1 BcSln1基因敲除突變體獲得
            2.2.2 BcSln1和BcSho1雙基因敲除突變體獲得
            2.2.3 BcSln1基因敲除及BcSln1和BcSho1雙敲除突變體形態(tài)
            2.2.4 BcSln1基因與灰葡萄孢菌對咯菌腈敏感性相關(guān)
            2.2.5 BcSln1基因與灰葡萄孢菌對腐霉利敏感性無關(guān)
            2.2.6 BcSln1基因與灰葡萄孢菌菌核的形成相關(guān)
            2.2.7 BcSln1基因與灰葡萄孢菌對草莓葉和蘋果的致病性無關(guān)
            2.2.8 BcSln1基因調(diào)控菌體對不同環(huán)境脅迫因子的敏感性
            2.2.9 BcSln1基因影響灰葡萄孢菌對堿性環(huán)境忍耐力
            2.2.10 BcSln1基因與菌絲甘油合成相關(guān)
            2.2.11 BcSln1基因與菌體溫度敏感性無關(guān)
            2.2.12 BcSln1基因與菌體對不同氮源利用能力相關(guān)
    3 討論
    參考文獻(xiàn)
全文小結(jié)
附錄
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[6]8種殺菌劑對番茄灰霉病菌多重抗藥性菌株生物活性測定[J]. 喬廣行,林秀敏,黃金寶,周瑩,李興紅.  農(nóng)藥. 2013(01)
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碩士論文
[1]番茄灰霉病菌對咯菌腈和氟啶胺的抗性風(fēng)險(xiǎn)研究[D]. 紀(jì)軍建.河北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[2]氟咯菌腈及其類似物的合成研究[D]. 孟凡偉.黑龍江大學(xué) 2012
[3]山東省灰霉病菌對常用殺菌劑敏感性監(jiān)測及微孔板法檢測技術(shù)研究[D]. 楊曉楠.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012



本文編號：3151830