【目的】研究建立可以準(zhǔn)確檢測(cè)小菜蛾血清中痕量β-蛻皮激素的超效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（UPLC-MS/MS）分析法�！痉椒ā啃〔硕暄濡�-蛻皮激素樣品用乙腈提取并進(jìn)行蛋白沉淀,以C18色譜柱分離,經(jīng)UPLC-MS/MS檢測(cè),以蕓苔素內(nèi)酯為內(nèi)標(biāo)物,內(nèi)標(biāo)法定量�！窘Y(jié)果】結(jié)果表明,在0.5-50μg/L濃度范圍內(nèi)β-蛻皮激素線性相關(guān)系數(shù)R²=0.9998;在0.5、10和50μg/L3個(gè)添加水平下的平均回收率在91.9%-104.9%之間,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSDS,n=5）在3.2%-9.2%之間;方法的定量限為0.5μg/L。【結(jié)論】該方法具有操作簡(jiǎn)單、靈敏度高,穩(wěn)定性好,應(yīng)用性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn),可為昆蟲血清中的β-蛻皮激素檢測(cè)提供科學(xué)準(zhǔn)確的方法。 

【文章來源】：應(yīng)用昆蟲學(xué)報(bào). 2020,57(02)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

20E的分子離子峰（A）及其碎片離子（B）和蕓苔素內(nèi)酯分子離子峰（C）及其碎片離子（D)

配制濃度為0.5、1.0、5.0、10.0、50.0μg/L的20E系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，向1 mL不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液中加入0.1 mL的500μg/L蕓苔素內(nèi)酯標(biāo)準(zhǔn)溶液，以峰面積比值為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明，在0.5-50μg/L范圍內(nèi)，20E的線性方程為y=0.168 9х-0.018 5，相關(guān)系數(shù)（R2=0.999 8）符合檢測(cè)要求（圖3）。2.3 樣品的前處理、回收率、精密度和定量限

蛻皮激素（Molting hormone,MH）是一種存在于無脊椎動(dòng)物中的類固醇激素，在昆蟲體內(nèi)主要是指20-羥基蛻皮酮（20-hydroxyecdysone,20E），常稱之為β-蛻皮激素，化學(xué)式為C27H44O7（結(jié)構(gòu)式見圖1），它于1954年由Butenandt和Karlson在家蠶蛹中首次分離提取獲得（邱明華，2005）。β-蛻皮激素在調(diào)節(jié)昆蟲蛻皮、繁殖、變態(tài)等方面發(fā)揮著重要作用（Xia et al.,2014），昆蟲可通過調(diào)節(jié)體內(nèi)蛻皮激素水平來調(diào)控自身的生命活動(dòng)從而適應(yīng)環(huán)境。在昆蟲不同發(fā)育時(shí)期，蟲體的激素水平也有所不同，其對(duì)昆蟲自身生長(zhǎng)發(fā)育的作用也不同。蛻皮激素水平高時(shí)會(huì)誘導(dǎo)昆蟲早熟、蛻皮。不同的昆蟲對(duì)外源蛻皮激素的敏感度也有差異，家蠶Bombyx mori對(duì)外源蛻皮激素的敏感度很高，而斜紋夜蛾Spodoptera litura卻能夠耐受高濃度的外源蛻皮激素對(duì)它的影響（沈關(guān)望等，2014；孫幫勇，2018）。目前，蛻皮激素的檢測(cè)方法主要有分光光度法（SP）（阮美娟和石艷賓，2006）、高效毛細(xì)管電泳法（HPCE）（周梅仙等，2005）、液相色譜法（HPLC）（葉濱等，2016）和液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（UPLC-MS/MS)(Zhou et al.,2011）等。其中，SP和HPCE的靈敏度低，使用較少；HPLC應(yīng)用較多，但是靈敏度偏低，主要用于分析植物樣品或者蛻皮激素含量較高的動(dòng)物樣品，無法滿足昆蟲血清中痕量蛻皮激素的檢測(cè)。UPLC-MS/MS具有抗干擾性強(qiáng)、靈敏度高等特點(diǎn)，但對(duì)昆蟲體內(nèi)痕量蛻皮激素研究?jī)H見于家蠶血液中β-蛻皮激素的檢測(cè)（唐博志等，2015）。小菜蛾P(guān)lutella xylostella，因其抗藥性強(qiáng)、生活周期短，已成為世界范圍危害十字花科蔬菜最嚴(yán)重的害蟲之一。β-蛻皮激素作為蛻皮激素最重要的表現(xiàn)形式，其在調(diào)控昆蟲的生長(zhǎng)發(fā)育、細(xì)胞分化及變態(tài)生殖過程中的關(guān)鍵作用。有研究發(fā)現(xiàn)，蛻皮激素可能通過調(diào)節(jié)自身生長(zhǎng)發(fā)育，從而與昆蟲抗藥性存在一定的關(guān)系（姚洪渭等，2002;Retnakaran et al.,2003；劉星，2016）。為了進(jìn)一步研究蛻皮激素在小菜蛾變態(tài)、生殖中的作用，建立一種檢測(cè)小菜蛾血清中痕量蛻皮激素的分析方法尤為重要。因此，本文研究采用UPLC-MS/MS方法，對(duì)小菜蛾血清中的β-蛻皮激素的含量進(jìn)行檢測(cè)，有助于從生長(zhǎng)發(fā)育的角度開展抗藥性治理，為制定新型害蟲防治策略提供理論依據(jù)。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[8]昆蟲蛻皮物質(zhì),在生命活動(dòng)中扮演什么角色?[J]. 邱明華.  自然雜志. 2005(03)
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碩士論文
[1]斜紋夜蛾對(duì)高濃度蛻皮激素耐受機(jī)制研究[D]. 孫幫勇.重慶大學(xué) 2018
[2]朱砂葉螨甲氰菊酯抗性和敏感品系生殖力差異及其相關(guān)機(jī)制[D]. 劉星.西南大學(xué) 2016
[3]防治藥劑對(duì)小菜蛾內(nèi)分泌干擾效應(yīng)研究[D]. 劉文靜.福建農(nóng)林大學(xué) 2009



本文編號(hào)：3145251