桑樹(shù)是我國(guó)重要的經(jīng)濟(jì)林木,因其含有較強(qiáng)的抗逆性而成為植物生態(tài)科學(xué)研究的重要材料。桑樹(shù)抗逆基因的篩選與研究可為桑樹(shù)抗性育種提供基因資源。在已鑒定的植物抗性基因中,滲調(diào)蛋白（osmotins,OSMs）在植物遭受逆境脅迫時(shí)具有重要的調(diào)節(jié)作用,但桑樹(shù)OSM的功能研究尚未見(jiàn)報(bào)道。磷脂酶（Phospholipases）作為生物體內(nèi)負(fù)責(zé)生物合成和磷脂代謝的一類酶,其與植物的抗逆性也有密切聯(lián)系。Ma PLA1-Ⅱδ基因是磷脂酶家族中重要的一類,其發(fā)現(xiàn)和研究起步較晚,桑樹(shù)Ma PLA1-Ⅱδ的研究尚未見(jiàn)報(bào)道。因此,桑樹(shù)滲調(diào)蛋白與植物磷脂酶的進(jìn)一步研究對(duì)促進(jìn)桑樹(shù)抗逆分子機(jī)制研究具有重要意義。本研究以生長(zhǎng)45 d的豐馳桑（Morus alba.）幼苗為材料,克隆了桑樹(shù)Ma PLA1-Ⅱδ的4個(gè)成員以及桑樹(shù)滲調(diào)蛋白基因MaOSM,進(jìn)行了基因的組織表達(dá)模式分析、干旱應(yīng)答脅迫分析,并將以上基因轉(zhuǎn)化擬南芥,獲得過(guò)表達(dá)擬南芥植株,并以野生型擬南芥為對(duì)照,從表型、生理生化、基因表達(dá)等多個(gè)層面上進(jìn)行了抗旱性分析,得到以下結(jié)果:（1）MaOSM及Ma PLA1-Ⅱδ基因家族中的各成員在桑樹(shù)葉,芽,根,花中均有表達(dá),且均在... 

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

磷脂酶作用位點(diǎn)示意圖(GuanqunCetal.2013)

苧?字??Hirofumietal.2002)，在自然界分布廣泛，已在眾多的動(dòng)植物組織細(xì)胞及微生物中發(fā)現(xiàn)具有PLA1的活性。目前已經(jīng)純化和克隆了的磷脂酶A1的種類較少，是磷脂酶家族中功能研究最少的一類，其中包括大鼠血小板的磷脂酰絲氨酸（PS）特異性PLA1（PS-PLA1），囊泡毒液的PLA1，以及磷脂酸（PA）優(yōu)先型PLA1（PA-PLA1）(Hirofumietal.2002)。植物中PLA1的研究發(fā)現(xiàn)更晚，目前已知的相關(guān)基因研究較少，基因組數(shù)據(jù)已經(jīng)鑒定出在擬南芥的PLA1家族中有12種亞型，這些蛋白質(zhì)可以根據(jù)其結(jié)構(gòu)與序列的相似性分為3大類（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ），（如圖1-2）。圖1-2擬南芥PLA1家族的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)(RyuSB2004)Figure1-2.PhylogenetictreeoftheArabidopsisPLA1family(Ryu2004)

第二章MaOSM的克隆及功能研究13離心60s后丟棄廢液，再空離心2min后。換取新離心管，加入50μL的無(wú)菌水于膜中央，靜置1min后12000×g離心1min后得到質(zhì)粒。2.1.1.9雙酶切驗(yàn)證提取的pMD18-T載體質(zhì)粒與表達(dá)載體PCAMBIA1301-eGFP（如圖2-1）分別用酶KpnⅠ與XbaⅠ進(jìn)行雙酶切，反應(yīng)體系如下：試劑用量質(zhì)粒/空載質(zhì)粒15μL1×Buffer4μLBSA2μLXbaⅠ1μLKpnⅠ1μL無(wú)菌水27μLTotal50μL37℃反應(yīng)4h后進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，對(duì)酶切后的線性載體進(jìn)行膠回收。圖2-1.表達(dá)載體PCAMBIA1301-eGFP圖示Figure2-1ExpressionvectorPCAMBIA1301-eGFPdiagram2.1.1.10過(guò)表達(dá)載體的構(gòu)建將空載與目的基因的回收產(chǎn)物用T4DNA連接酶連接，反應(yīng)體系如下：試劑用量空載回收產(chǎn)物0.5μL目的基因回收產(chǎn)物3.5μLT4DNALigase0.5μL10×Buffer0.5μLTotal5μL體系配置完成后放入4℃反應(yīng)12h，產(chǎn)物直接用于下一步轉(zhuǎn)化。參照3.1.6的步驟將構(gòu)建的載體轉(zhuǎn)入大腸桿菌并送生工生物工程股份有限公司測(cè)序，參照3.1.7擴(kuò)搖陽(yáng)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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