桑樹是我國重要的經(jīng)濟林木,因其含有較強的抗逆性而成為植物生態(tài)科學研究的重要材料。桑樹抗逆基因的篩選與研究可為桑樹抗性育種提供基因資源。在已鑒定的植物抗性基因中,滲調(diào)蛋白（osmotins,OSMs）在植物遭受逆境脅迫時具有重要的調(diào)節(jié)作用,但桑樹OSM的功能研究尚未見報道。磷脂酶（Phospholipases）作為生物體內(nèi)負責生物合成和磷脂代謝的一類酶,其與植物的抗逆性也有密切聯(lián)系。Ma PLA1-Ⅱδ基因是磷脂酶家族中重要的一類,其發(fā)現(xiàn)和研究起步較晚,桑樹Ma PLA1-Ⅱδ的研究尚未見報道。因此,桑樹滲調(diào)蛋白與植物磷脂酶的進一步研究對促進桑樹抗逆分子機制研究具有重要意義。本研究以生長45 d的豐馳桑（Morus alba.）幼苗為材料,克隆了桑樹Ma PLA1-Ⅱδ的4個成員以及桑樹滲調(diào)蛋白基因MaOSM,進行了基因的組織表達模式分析、干旱應答脅迫分析,并將以上基因轉(zhuǎn)化擬南芥,獲得過表達擬南芥植株,并以野生型擬南芥為對照,從表型、生理生化、基因表達等多個層面上進行了抗旱性分析,得到以下結(jié)果:（1）MaOSM及Ma PLA1-Ⅱδ基因家族中的各成員在桑樹葉,芽,根,花中均有表達,且均在... 

【文章來源】：西北農(nóng)林科技大學陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

磷脂酶作用位點示意圖(GuanqunCetal.2013)

苧?字??Hirofumietal.2002)，在自然界分布廣泛，已在眾多的動植物組織細胞及微生物中發(fā)現(xiàn)具有PLA1的活性。目前已經(jīng)純化和克隆了的磷脂酶A1的種類較少，是磷脂酶家族中功能研究最少的一類，其中包括大鼠血小板的磷脂酰絲氨酸（PS）特異性PLA1（PS-PLA1），囊泡毒液的PLA1，以及磷脂酸（PA）優(yōu)先型PLA1（PA-PLA1）(Hirofumietal.2002)。植物中PLA1的研究發(fā)現(xiàn)更晚，目前已知的相關基因研究較少，基因組數(shù)據(jù)已經(jīng)鑒定出在擬南芥的PLA1家族中有12種亞型，這些蛋白質(zhì)可以根據(jù)其結(jié)構(gòu)與序列的相似性分為3大類（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ），（如圖1-2）。圖1-2擬南芥PLA1家族的系統(tǒng)發(fā)育樹(RyuSB2004)Figure1-2.PhylogenetictreeoftheArabidopsisPLA1family(Ryu2004)

第二章MaOSM的克隆及功能研究13離心60s后丟棄廢液，再空離心2min后。換取新離心管，加入50μL的無菌水于膜中央，靜置1min后12000×g離心1min后得到質(zhì)粒。2.1.1.9雙酶切驗證提取的pMD18-T載體質(zhì)粒與表達載體PCAMBIA1301-eGFP（如圖2-1）分別用酶KpnⅠ與XbaⅠ進行雙酶切，反應體系如下：試劑用量質(zhì)粒/空載質(zhì)粒15μL1×Buffer4μLBSA2μLXbaⅠ1μLKpnⅠ1μL無菌水27μLTotal50μL37℃反應4h后進行瓊脂糖凝膠電泳，對酶切后的線性載體進行膠回收。圖2-1.表達載體PCAMBIA1301-eGFP圖示Figure2-1ExpressionvectorPCAMBIA1301-eGFPdiagram2.1.1.10過表達載體的構(gòu)建將空載與目的基因的回收產(chǎn)物用T4DNA連接酶連接，反應體系如下：試劑用量空載回收產(chǎn)物0.5μL目的基因回收產(chǎn)物3.5μLT4DNALigase0.5μL10×Buffer0.5μLTotal5μL體系配置完成后放入4℃反應12h，產(chǎn)物直接用于下一步轉(zhuǎn)化。參照3.1.6的步驟將構(gòu)建的載體轉(zhuǎn)入大腸桿菌并送生工生物工程股份有限公司測序，參照3.1.7擴搖陽

【參考文獻】：
期刊論文
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