番茄（Solanum lycopersicum）是一種營養(yǎng)豐富、種植廣泛的茄科植物,深受人們的喜愛。由致病疫霉（Phytophthora infestans）侵染引起的晚疫病常導(dǎo)致番茄的大面積減產(chǎn),造成巨大的經(jīng)濟損失,通常的化學(xué)防治會帶來環(huán)境污染等問題。因此,亟需探尋有效的防治手段。利用生物技術(shù)挖掘番茄抗晚疫病的關(guān)鍵因子,明確它們作用的分子機制并進行抗病品種培育尤為重要。近年來,隨著測序技術(shù)的發(fā)展,人們發(fā)現(xiàn)長非編碼RNA（long non-coding RNAs,lncRNAs）可以作為調(diào)控因子參與許多生物過程,包括植物抗病等。因此,本研究從實驗室前期構(gòu)建的番茄與致病疫霉互作轉(zhuǎn)錄組中篩選出一條明顯差異表達的lncRNA——lncRNA39026,推測其可能在番茄抗晚疫病中的作用非凡,進而開展了一系列研究工作,明確了它的功能。首先,為了探究lncRNA39026的作用方式,在獲得lncRNA39026序列后分析其內(nèi)源靶標(biāo)模擬（endogenous target mimicry,eTM）位點,發(fā)現(xiàn)lncRNA39026上存在miR168a的eTM位點,推測lncRNA39026能夠通過吸附... 

【文章來源】：大連理工大學(xué)遼寧省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
引言
1 文獻綜述
    1.1 番茄與晚疫病
    1.2 lncRNAs與miRNAs在植物抗病中的研究進展
        1.2.1 lncRNAs及其參與的植物抗病過程概述
        1.2.2 miRNAs及其參與的抗病過程概述
        1.2.3 lncRNAs與miRNAs的相互作用
        1.2.4 植物中l(wèi)ncRNAs的功能研究策略
        1.2.5 響應(yīng)番茄晚疫病的主要lncRNAs與miRNAs
    1.3 研究的目的與意義
    1.4 本研究的主要內(nèi)容
2 lncRNA39026的克隆及過表達和沉默載體的構(gòu)建
    2.1 材料、試劑和儀器
    2.2 實驗方法
        2.2.1 番茄和晚疫病菌的培養(yǎng)及接種
        2.2.2 總RNA的提取和反轉(zhuǎn)錄
        2.2.3 lncRNA39026的克隆及eTM位點分析
        2.2.4 lncRNA39026的表達特性分析
        2.2.5 pBI121-lncRNA39026過表達載體的構(gòu)建
        2.2.6 VIGS-lncRNA39026沉默載體的構(gòu)建
        2.2.7 數(shù)據(jù)處理
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 RNA樣品的質(zhì)量分析
        2.3.2 克隆的lncRNA39026及驗證
        2.3.3 lncRNA39026序列上的eTM位點分析
        2.3.4 病菌侵染后lncRNA39026、miR168a、SlAGO1的表達特性
        2.3.5 pBI121-lncRNA39026過表達載體的獲得
        2.3.6 VIGS-lncRNA39026沉默載體的獲得
    2.4 討論
    2.5 小結(jié)
3 過表達和沉默lncRNA39026對番茄抗病性的影響
    3.1 材料、試劑和儀器
    3.2 實驗方法
        3.2.1 農(nóng)桿菌工程菌的制備
        3.2.2 lncRNA39026的瞬時過表達
        3.2.3 lncRNA39026的沉默
        3.2.4 植株的抗病性分析
        3.2.5 番茄葉片組織化學(xué)染色
        3.2.6 lncRNA39026的穩(wěn)定過表達
        3.2.7 數(shù)據(jù)處理
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 農(nóng)桿菌工程菌的獲得
        3.3.2 瞬時過表達lncRNA39026后番茄的抗病表現(xiàn)
        3.3.3 沉默lncRNA39026后番茄的抗病表現(xiàn)
        3.3.4 穩(wěn)定過表達lncRNA39026番茄材料及其特性
    3.4 討論
    3.5 小結(jié)
4 異源過表達lncRNA39026對煙草抗病性的影響
    4.1 材料、試劑和儀器
    4.2 實驗方法
        4.2.1 煙草的種植、枯萎病菌的培養(yǎng)及孢子懸浮液的制備
        4.2.2 lncRNA39026在煙草中的瞬時過表達
        4.2.3 煙草的遺傳轉(zhuǎn)化及陽性植株的篩選
        4.2.4 過表達lncRNA39026煙草的分子鑒定
        4.2.5 過表達lncRNA39026煙草的抗病性檢測
        4.2.6 煙草中相關(guān)抗病基因的檢測
        4.2.7 組織化學(xué)染色
        4.2.8 數(shù)據(jù)處理
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 瞬時過表達lncRNA39026后煙草的抗病表現(xiàn)
        4.3.2 過表達lncRNA39026煙草的獲得
        4.3.3 穩(wěn)定過表達lncRNA39026后煙草的抗病表現(xiàn)
    4.4 討論
    4.5 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻
附錄A 六種培養(yǎng)基的配制
附錄B lncRNA39026及miR168a成熟體的序列
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文情況
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]Plant lncRNAs are enriched in and move systemically through the phloem in response to phosphate deficiency[J]. Zhaoliang Zhang,Yi Zheng,Byung-Kook Ham,Shupei Zhang,Zhangjun Fei,William J.Lucas.  Journal of Integrative Plant Biology. 2019(04)
[2]Non-coding RNAs and Their Roles in Stress Response in Plants[J]. Jingjing Wang,Xianwen Meng,Oxana B.Dobrovolskaya,Yuriy L.Orlov,Ming Chen.  Genomics,Proteomics & Bioinformatics. 2017(05)
[3]A long noncoding RNA involved in rice reproductive development by negatively regulating osa-miR160[J]. Meng Wang,Hua-Jun Wu,Jun Fang,Chengcai Chu,Xiu-Jie Wang.  Science Bulletin. 2017(07)
[4]Long Non-coding RNAs and Their Biological Roles in Plants[J]. Xue Liu,Lili Hao,Dayong Li,Lihuang Zhu,Songnian Hu.  Genomics,Proteomics & Bioinformatics. 2015(03)

碩士論文
[1]番茄TPR基因?qū)δ婢趁{迫響應(yīng)及SlTPR4互作蛋白研究[D]. 鄭洋洋.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2019
[2]miR482b/c在番茄抗晚疫病中的功能研究[D]. 賀曉麗.大連理工大學(xué) 2018
[3]miR1918在番茄與致病疫霉互作中的特性及功能分析[D]. 王煒晨.大連理工大學(xué) 2015
[4]番茄抗晚疫�。≒hytophythora infestans）Ph-2和Ph-3基因的抗性機制研究[D]. 李濤.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2014
[5]番茄VIGS體系構(gòu)建及在番茄白粉病抗性研究上的應(yīng)用[D]. 馬紅珍.河南大學(xué) 2010



本文編號：3137898