番茄（Solanum lycopersicum）是一種營(yíng)養(yǎng)豐富、種植廣泛的茄科植物,深受人們的喜愛(ài)。由致病疫霉（Phytophthora infestans）侵染引起的晚疫病常導(dǎo)致番茄的大面積減產(chǎn),造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失,通常的化學(xué)防治會(huì)帶來(lái)環(huán)境污染等問(wèn)題。因此,亟需探尋有效的防治手段。利用生物技術(shù)挖掘番茄抗晚疫病的關(guān)鍵因子,明確它們作用的分子機(jī)制并進(jìn)行抗病品種培育尤為重要。近年來(lái),隨著測(cè)序技術(shù)的發(fā)展,人們發(fā)現(xiàn)長(zhǎng)非編碼RNA（long non-coding RNAs,lncRNAs）可以作為調(diào)控因子參與許多生物過(guò)程,包括植物抗病等。因此,本研究從實(shí)驗(yàn)室前期構(gòu)建的番茄與致病疫霉互作轉(zhuǎn)錄組中篩選出一條明顯差異表達(dá)的lncRNA——lncRNA39026,推測(cè)其可能在番茄抗晚疫病中的作用非凡,進(jìn)而開(kāi)展了一系列研究工作,明確了它的功能。首先,為了探究lncRNA39026的作用方式,在獲得lncRNA39026序列后分析其內(nèi)源靶標(biāo)模擬（endogenous target mimicry,eTM）位點(diǎn),發(fā)現(xiàn)lncRNA39026上存在miR168a的eTM位點(diǎn),推測(cè)lncRNA39026能夠通過(guò)吸附... 

【文章來(lái)源】：大連理工大學(xué)遼寧省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
引言
1 文獻(xiàn)綜述
    1.1 番茄與晚疫病
    1.2 lncRNAs與miRNAs在植物抗病中的研究進(jìn)展
        1.2.1 lncRNAs及其參與的植物抗病過(guò)程概述
        1.2.2 miRNAs及其參與的抗病過(guò)程概述
        1.2.3 lncRNAs與miRNAs的相互作用
        1.2.4 植物中l(wèi)ncRNAs的功能研究策略
        1.2.5 響應(yīng)番茄晚疫病的主要lncRNAs與miRNAs
    1.3 研究的目的與意義
    1.4 本研究的主要內(nèi)容
2 lncRNA39026的克隆及過(guò)表達(dá)和沉默載體的構(gòu)建
    2.1 材料、試劑和儀器
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 番茄和晚疫病菌的培養(yǎng)及接種
        2.2.2 總RNA的提取和反轉(zhuǎn)錄
        2.2.3 lncRNA39026的克隆及eTM位點(diǎn)分析
        2.2.4 lncRNA39026的表達(dá)特性分析
        2.2.5 pBI121-lncRNA39026過(guò)表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.2.6 VIGS-lncRNA39026沉默載體的構(gòu)建
        2.2.7 數(shù)據(jù)處理
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 RNA樣品的質(zhì)量分析
        2.3.2 克隆的lncRNA39026及驗(yàn)證
        2.3.3 lncRNA39026序列上的eTM位點(diǎn)分析
        2.3.4 病菌侵染后lncRNA39026、miR168a、SlAGO1的表達(dá)特性
        2.3.5 pBI121-lncRNA39026過(guò)表達(dá)載體的獲得
        2.3.6 VIGS-lncRNA39026沉默載體的獲得
    2.4 討論
    2.5 小結(jié)
3 過(guò)表達(dá)和沉默lncRNA39026對(duì)番茄抗病性的影響
    3.1 材料、試劑和儀器
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 農(nóng)桿菌工程菌的制備
        3.2.2 lncRNA39026的瞬時(shí)過(guò)表達(dá)
        3.2.3 lncRNA39026的沉默
        3.2.4 植株的抗病性分析
        3.2.5 番茄葉片組織化學(xué)染色
        3.2.6 lncRNA39026的穩(wěn)定過(guò)表達(dá)
        3.2.7 數(shù)據(jù)處理
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 農(nóng)桿菌工程菌的獲得
        3.3.2 瞬時(shí)過(guò)表達(dá)lncRNA39026后番茄的抗病表現(xiàn)
        3.3.3 沉默lncRNA39026后番茄的抗病表現(xiàn)
        3.3.4 穩(wěn)定過(guò)表達(dá)lncRNA39026番茄材料及其特性
    3.4 討論
    3.5 小結(jié)
4 異源過(guò)表達(dá)lncRNA39026對(duì)煙草抗病性的影響
    4.1 材料、試劑和儀器
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 煙草的種植、枯萎病菌的培養(yǎng)及孢子懸浮液的制備
        4.2.2 lncRNA39026在煙草中的瞬時(shí)過(guò)表達(dá)
        4.2.3 煙草的遺傳轉(zhuǎn)化及陽(yáng)性植株的篩選
        4.2.4 過(guò)表達(dá)lncRNA39026煙草的分子鑒定
        4.2.5 過(guò)表達(dá)lncRNA39026煙草的抗病性檢測(cè)
        4.2.6 煙草中相關(guān)抗病基因的檢測(cè)
        4.2.7 組織化學(xué)染色
        4.2.8 數(shù)據(jù)處理
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 瞬時(shí)過(guò)表達(dá)lncRNA39026后煙草的抗病表現(xiàn)
        4.3.2 過(guò)表達(dá)lncRNA39026煙草的獲得
        4.3.3 穩(wěn)定過(guò)表達(dá)lncRNA39026后煙草的抗病表現(xiàn)
    4.4 討論
    4.5 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄A 六種培養(yǎng)基的配制
附錄B lncRNA39026及miR168a成熟體的序列
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文情況
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Plant lncRNAs are enriched in and move systemically through the phloem in response to phosphate deficiency[J]. Zhaoliang Zhang,Yi Zheng,Byung-Kook Ham,Shupei Zhang,Zhangjun Fei,William J.Lucas.  Journal of Integrative Plant Biology. 2019(04)
[2]Non-coding RNAs and Their Roles in Stress Response in Plants[J]. Jingjing Wang,Xianwen Meng,Oxana B.Dobrovolskaya,Yuriy L.Orlov,Ming Chen.  Genomics,Proteomics & Bioinformatics. 2017(05)
[3]A long noncoding RNA involved in rice reproductive development by negatively regulating osa-miR160[J]. Meng Wang,Hua-Jun Wu,Jun Fang,Chengcai Chu,Xiu-Jie Wang.  Science Bulletin. 2017(07)
[4]Long Non-coding RNAs and Their Biological Roles in Plants[J]. Xue Liu,Lili Hao,Dayong Li,Lihuang Zhu,Songnian Hu.  Genomics,Proteomics & Bioinformatics. 2015(03)

碩士論文
[1]番茄TPR基因?qū)δ婢趁{迫響應(yīng)及SlTPR4互作蛋白研究[D]. 鄭洋洋.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2019
[2]miR482b/c在番茄抗晚疫病中的功能研究[D]. 賀曉麗.大連理工大學(xué) 2018
[3]miR1918在番茄與致病疫霉互作中的特性及功能分析[D]. 王煒晨.大連理工大學(xué) 2015
[4]番茄抗晚疫病（Phytophythora infestans）Ph-2和Ph-3基因的抗性機(jī)制研究[D]. 李濤.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2014
[5]番茄VIGS體系構(gòu)建及在番茄白粉病抗性研究上的應(yīng)用[D]. 馬紅珍.河南大學(xué) 2010



本文編號(hào)：3137898