桑樹是一種種質(zhì)資源豐富、倍性復(fù)雜多變的木本植物,具有重要經(jīng)濟(jì)價(jià)值和生態(tài)價(jià)值,桑屬植物的C值等基礎(chǔ)科學(xué)數(shù)據(jù)仍然有所缺乏,而多倍體育種作為提高桑樹利用價(jià)值的重要途徑,研究多倍化后桑樹基因表達(dá)變化有重要意義。本試驗(yàn)中,首先對(duì)桑樹倍性、核DNA含量的流式細(xì)胞術(shù)測定方法進(jìn)行了優(yōu)化,對(duì)部分桑樹種質(zhì)資源進(jìn)行了染色體倍性和核DNA含量測定。同時(shí)利用轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)（RNA-seq）,基于測序樣品細(xì)胞數(shù)和外源內(nèi)標(biāo)RNAs表達(dá)水平,初步以基因在每個(gè)細(xì)胞中的表達(dá)水平比較分析桑樹同源多倍體與二倍體基因表達(dá)差異。本試驗(yàn)的主要內(nèi)容和結(jié)論如下:1.桑樹染色體倍性、核DNA含量測定的流式細(xì)胞術(shù)方法優(yōu)化優(yōu)化得到的最佳方法為:采集0.2 g幼葉置于預(yù)冷的平面玻璃上,加入MgSO₄解離液,用雙面刀片快速切碎,轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)皿中靜置3⁵ min,用300目細(xì)胞篩網(wǎng)過濾至1.5 mL離心管中,得到500μL單細(xì)胞核懸浮液,加入碘化丙啶（PI）溶液和RNase A溶液,4℃、避光染色30 min,用300目細(xì)胞篩網(wǎng)過濾后上機(jī)檢測。初步建立的適合桑樹測定的流式細(xì)胞術(shù)應(yīng)用方法效果最佳,具有細(xì)胞碎... 

【文章來源】：西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

使用不同解離液制備樣品的峰值直方圖

2.3.1.3離心漂洗次數(shù)選擇將陜桑305的新鮮幼葉制備的細(xì)胞核懸浮液分別進(jìn)行不離心（圖2-3A）、離心漂洗1次（圖2-3B）和離心漂洗2次（圖2-3C）處理后，均可得到明確、清晰且集中的粒子團(tuán)，直方圖中主峰明晰，因此離心漂洗對(duì)桑葉單細(xì)胞核懸浮液的質(zhì)量無明顯影響。2.3.1.4新鮮幼葉與冷凍儲(chǔ)存幼葉的比較圖2-3不同離心漂洗次數(shù)制備樣品的峰值直方圖A：不離心漂洗；B：離心漂洗一次；C：離心漂洗兩次Fig.2-3HistogramofpeakvaluesofsamplesusingdifferentcentrifugationtimesA:Uncentrifugation;B:Oncecentrifugation;C:TwicecentrifugationABC圖2-2使用不同機(jī)械解離方法制備樣品的峰值直方圖A:平面玻璃上切碎法；B:玻璃培養(yǎng)皿上切碎法；C:玻璃研磨器研磨法；D：液氮研磨法Fig.2-2HistogramofpeakvaluesofsamplesusingdifferentmechanicaldissociationsA:Choppingonplainglass;B:Choppingonglassdish;C:Grindinginglasspestle;D:GrindinginmortarwithliquidnitrogenACBD15

2.3.1.3離心漂洗次數(shù)選擇將陜桑305的新鮮幼葉制備的細(xì)胞核懸浮液分別進(jìn)行不離心（圖2-3A）、離心漂洗1次（圖2-3B）和離心漂洗2次（圖2-3C）處理后，均可得到明確、清晰且集中的粒子團(tuán)，直方圖中主峰明晰，因此離心漂洗對(duì)桑葉單細(xì)胞核懸浮液的質(zhì)量無明顯影響。2.3.1.4新鮮幼葉與冷凍儲(chǔ)存幼葉的比較圖2-3不同離心漂洗次數(shù)制備樣品的峰值直方圖A：不離心漂洗；B：離心漂洗一次；C：離心漂洗兩次Fig.2-3HistogramofpeakvaluesofsamplesusingdifferentcentrifugationtimesA:Uncentrifugation;B:Oncecentrifugation;C:TwicecentrifugationABC圖2-2使用不同機(jī)械解離方法制備樣品的峰值直方圖A:平面玻璃上切碎法；B:玻璃培養(yǎng)皿上切碎法；C:玻璃研磨器研磨法；D：液氮研磨法Fig.2-2HistogramofpeakvaluesofsamplesusingdifferentmechanicaldissociationsA:Choppingonplainglass;B:Choppingonglassdish;C:Grindinginglasspestle;D:GrindinginmortarwithliquidnitrogenACBD15


本文編號(hào)：3132810