西方蜜蜂(Apis mellifera)19 kDa血淋巴蛋白HP19的表達(dá)與功能研究
發(fā)布時間:2021-04-11 08:16
昆蟲血淋巴19kDa蛋白(HP19)主要負(fù)責(zé)調(diào)控昆蟲的變態(tài)發(fā)育。蜜蜂是社會性昆蟲,蜂群內(nèi)三種大小、重量、發(fā)育歷期及生物學(xué)功能完全不同的工蜂、雄蜂和蜂王組成,且在其基因組內(nèi)發(fā)現(xiàn)了hp19基因,這為研究hp19對蜜蜂發(fā)育及其調(diào)控機制提供了很好的材料。基因的功能與其在生物體內(nèi)的時空表達(dá)特性密切相關(guān),為探究hp19在西方蜜蜂Apis mellifera三型蜂體內(nèi)的表達(dá)和功能,本研究利用實時熒光定量PCR技術(shù)對hp19在西方蜜蜂工蜂,雄蜂,蜂王各個發(fā)育階段的轉(zhuǎn)錄水平進行測定。測定的結(jié)果顯示,hp19基因在工蜂3齡幼蟲階段高表達(dá),表達(dá)量為參照基因的103-104倍,5齡幼蟲階段顯著降低到參照的10-102倍,末齡幼蟲表達(dá)量最低,與參照基因處在同一水平。雄蜂在末齡幼蟲階段表達(dá)量也由3齡幼蟲參照基因的104-105倍降至最低的102倍。蜂王在幼蟲期表達(dá)量穩(wěn)定保持在參照的102倍,封蓋后逐漸上升,至化蛹前達(dá)到104-105倍。羽化...
【文章來源】:福建農(nóng)林大學(xué)福建省
【文章頁數(shù)】:58 頁
【學(xué)位級別】:碩士
【文章目錄】:
摘要
Abstract
第一章 血淋巴蛋白HP19的研究概述
1 昆蟲儲存蛋白hexamerin
2 昆蟲血淋巴蛋白HP19
2.1 HP19對昆蟲變態(tài)發(fā)育的調(diào)控作用
2.2 非基因水平下的激素調(diào)節(jié)作用
3 實時熒光定量PCR(FQ-PCR)技術(shù)
4 RNAi技術(shù)及應(yīng)用
4.1 RNAi的作用機制
4.2 RNAi在昆蟲及蜜蜂研究中的應(yīng)用
5 本實驗的研究意義及擬解決的問題
第二章 西方蜜蜂體內(nèi)hp19的表達(dá)
1 材料和方法
1.1 實驗材料
1.2 試驗方法
2 實驗結(jié)果與分析
2.1 hp19定量引物驗證
2.2 擴增效率及特異性
2.3 hp19在意大利蜜蜂體內(nèi)的表達(dá)
3 結(jié)論與討論
第三章 不同發(fā)育時期西方蜜蜂脂肪體細(xì)胞膜蛋白磷酸化程度
1 材料和方法
1.1 實驗材料
1.2 試驗方法
2 結(jié)果與分析
2.1 膜蛋白SDS-PAGE電泳結(jié)果
2.2 膜蛋白磷酸化測定結(jié)果
3 結(jié)論與討論
第四章 合成dsRNA干擾西方蜜蜂hp19基因的表達(dá)
1 材料與方法
1.1 實驗材料
1.2 試驗方法
2 結(jié)果與分析
2.1 hp19干擾引物驗證
2.2 純化的hp19和egfp dsRNA凝膠電泳
2.3 dsRNA注射工蜂幼蟲與實驗室條件下的飼養(yǎng)
2.4 半定量驗證注射干擾結(jié)果
3 結(jié)論與討論
第五章 總結(jié)與展望
參考文獻
附錄
致謝
【參考文獻】:
期刊論文
[1]王漿主蛋白MRJP7基因在意大利蜜蜂體內(nèi)的表達(dá)[J]. 李曉燕,梁慶環(huán),楊文靜,梁勤,李江紅. 環(huán)境昆蟲學(xué)報. 2016(02)
[2]RNA干擾沉默KAT基因?qū)γ鄯浜铣?0-HDA的影響[J]. 劉麗,楊曉慧,王瑞明. 中國生物工程雜志. 2016(04)
[3]草魚銅鋅超氧化物歧化酶全長cDNA的克隆與組織表達(dá)[J]. 鄭清梅,溫茹淑,韓春艷,鐘艷梅,侯雨文. 基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué). 2014(06)
[4]西方蜜蜂不同級型王漿主蛋白MRJP8基因的表達(dá)差異[J]. 李江紅,梁慶環(huán),陳大福,梁勤. 昆蟲學(xué)報. 2014(01)
[5]昆蟲RNAi技術(shù)與方法[J]. 田宏剛,劉同先,張文慶. 應(yīng)用昆蟲學(xué)報. 2013(05)
[6]在發(fā)育性變化相關(guān)基因表達(dá)特性檢測中內(nèi)參基因的有效性和實時定量PCR解析方法的適用性[J]. 胡艷,宋遲,徐文娟,章雙杰,李慧芳. 基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué). 2013(02)
[7]中華蜜蜂與意大利蜜蜂雄蜂胚胎發(fā)育差異蛋白質(zhì)組與磷酸化蛋白質(zhì)組分析[J]. 周天娥,房宇,馮毛,韓賓,張?zhí)m,李榮麗,李建科. 中國農(nóng)業(yè)科學(xué). 2013(02)
[8]PK-15細(xì)胞膜蛋白提取方法的比較及豬瘟病毒膜表面受體的初步鑒定[J]. 周斌,劉曉東,王鳳鵑,劉珂,陳溥言. 畜牧與獸醫(yī). 2011(05)
[9]實時熒光定量PCR技術(shù)研究進展及其應(yīng)用[J]. 陳旭,齊鳳坤,康立功,李景富. 東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報. 2010(08)
[10]PepT1基因絕對熒光定量PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立[J]. 李慧鋒,李麗,張麗娟,徐玉良,李武峰. 山西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版). 2010(04)
碩士論文
[1]家蠶膜蛋白BmOBP2的分離純化及結(jié)晶條件初探[D]. 劉玲玲.浙江理工大學(xué) 2012
[2]蜜蜂球囊菌侵染蜜蜂幼蟲的生物學(xué)與病理學(xué)研究[D]. 鄭志陽.福建農(nóng)林大學(xué) 2010
本文編號:3130906
【文章來源】:福建農(nóng)林大學(xué)福建省
【文章頁數(shù)】:58 頁
【學(xué)位級別】:碩士
【文章目錄】:
摘要
Abstract
第一章 血淋巴蛋白HP19的研究概述
1 昆蟲儲存蛋白hexamerin
2 昆蟲血淋巴蛋白HP19
2.1 HP19對昆蟲變態(tài)發(fā)育的調(diào)控作用
2.2 非基因水平下的激素調(diào)節(jié)作用
3 實時熒光定量PCR(FQ-PCR)技術(shù)
4 RNAi技術(shù)及應(yīng)用
4.1 RNAi的作用機制
4.2 RNAi在昆蟲及蜜蜂研究中的應(yīng)用
5 本實驗的研究意義及擬解決的問題
第二章 西方蜜蜂體內(nèi)hp19的表達(dá)
1 材料和方法
1.1 實驗材料
1.2 試驗方法
2 實驗結(jié)果與分析
2.1 hp19定量引物驗證
2.2 擴增效率及特異性
2.3 hp19在意大利蜜蜂體內(nèi)的表達(dá)
3 結(jié)論與討論
第三章 不同發(fā)育時期西方蜜蜂脂肪體細(xì)胞膜蛋白磷酸化程度
1 材料和方法
1.1 實驗材料
1.2 試驗方法
2 結(jié)果與分析
2.1 膜蛋白SDS-PAGE電泳結(jié)果
2.2 膜蛋白磷酸化測定結(jié)果
3 結(jié)論與討論
第四章 合成dsRNA干擾西方蜜蜂hp19基因的表達(dá)
1 材料與方法
1.1 實驗材料
1.2 試驗方法
2 結(jié)果與分析
2.1 hp19干擾引物驗證
2.2 純化的hp19和egfp dsRNA凝膠電泳
2.3 dsRNA注射工蜂幼蟲與實驗室條件下的飼養(yǎng)
2.4 半定量驗證注射干擾結(jié)果
3 結(jié)論與討論
第五章 總結(jié)與展望
參考文獻
附錄
致謝
【參考文獻】:
期刊論文
[1]王漿主蛋白MRJP7基因在意大利蜜蜂體內(nèi)的表達(dá)[J]. 李曉燕,梁慶環(huán),楊文靜,梁勤,李江紅. 環(huán)境昆蟲學(xué)報. 2016(02)
[2]RNA干擾沉默KAT基因?qū)γ鄯浜铣?0-HDA的影響[J]. 劉麗,楊曉慧,王瑞明. 中國生物工程雜志. 2016(04)
[3]草魚銅鋅超氧化物歧化酶全長cDNA的克隆與組織表達(dá)[J]. 鄭清梅,溫茹淑,韓春艷,鐘艷梅,侯雨文. 基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué). 2014(06)
[4]西方蜜蜂不同級型王漿主蛋白MRJP8基因的表達(dá)差異[J]. 李江紅,梁慶環(huán),陳大福,梁勤. 昆蟲學(xué)報. 2014(01)
[5]昆蟲RNAi技術(shù)與方法[J]. 田宏剛,劉同先,張文慶. 應(yīng)用昆蟲學(xué)報. 2013(05)
[6]在發(fā)育性變化相關(guān)基因表達(dá)特性檢測中內(nèi)參基因的有效性和實時定量PCR解析方法的適用性[J]. 胡艷,宋遲,徐文娟,章雙杰,李慧芳. 基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué). 2013(02)
[7]中華蜜蜂與意大利蜜蜂雄蜂胚胎發(fā)育差異蛋白質(zhì)組與磷酸化蛋白質(zhì)組分析[J]. 周天娥,房宇,馮毛,韓賓,張?zhí)m,李榮麗,李建科. 中國農(nóng)業(yè)科學(xué). 2013(02)
[8]PK-15細(xì)胞膜蛋白提取方法的比較及豬瘟病毒膜表面受體的初步鑒定[J]. 周斌,劉曉東,王鳳鵑,劉珂,陳溥言. 畜牧與獸醫(yī). 2011(05)
[9]實時熒光定量PCR技術(shù)研究進展及其應(yīng)用[J]. 陳旭,齊鳳坤,康立功,李景富. 東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報. 2010(08)
[10]PepT1基因絕對熒光定量PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立[J]. 李慧鋒,李麗,張麗娟,徐玉良,李武峰. 山西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版). 2010(04)
碩士論文
[1]家蠶膜蛋白BmOBP2的分離純化及結(jié)晶條件初探[D]. 劉玲玲.浙江理工大學(xué) 2012
[2]蜜蜂球囊菌侵染蜜蜂幼蟲的生物學(xué)與病理學(xué)研究[D]. 鄭志陽.福建農(nóng)林大學(xué) 2010
本文編號:3130906
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