昆蟲(chóng)病原線蟲(chóng)（Entomopathogenicnematodes,EPN）指以昆蟲(chóng)為寄主的致病性線蟲(chóng),其致病性源自于其腸道內(nèi)所攜帶的共生菌,二者呈互惠共生關(guān)系。目前已發(fā)現(xiàn)的昆蟲(chóng)病原線蟲(chóng)有3大類(lèi),分別是小桿科（Rhabditidae）擬異小桿屬（Heterorhabditidoides）、異小桿科（Heterorhabditidae）和斯氏線蟲(chóng)科（Steinernematidae）。本研究試材崇明擬異小桿（Heterorhabditidoides chongmingensis）線蟲(chóng)為本實(shí)驗(yàn)室在上海崇明島分離到的EPN新種,其與嗜線蟲(chóng)沙雷氏菌（Serratia nematodiphila）共生。前期研究運(yùn)用Solexa高通量測(cè)序技術(shù)對(duì)崇明擬異小桿線蟲(chóng)的模式品系DZ0503CMFT（DZ）與其自身共生菌DZ0503SBS1T（S1）和非自身共生菌DR186（186）構(gòu)建形成的單菌線蟲(chóng)組合DZ-S1和DZ-186的小RNA文庫(kù)進(jìn)行測(cè)序,兩文庫(kù)中新型miRNA的表達(dá)量具有顯著差異。本研究選取顯著上調(diào)的n-miR-10和n-miR-9進(jìn)行研究,獲得以下主要研究結(jié)果:擴(kuò)增差異表達(dá)的n-miR-9和n... 

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－１昆蟲(chóng)病原線蟲(chóng)生活史??Ｆｉｇ?１－１．?Ｔｈｅ?Ｌｉｆｅ?Ｃｙｃｌｅ?ｏｆ?Ｅｎｔｏｍｏｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ?Ｎｅｍａｔｏｄｅｓ?（Ｄｉｈｏｎｇ?Ｌｕ，?ｅｔ?ａｌ，?２０１６）??

運(yùn)蛋白ｅｘｐｏｒｔｉｎ－５的作用下，從細(xì)胞核中運(yùn)輸?shù)郊?xì)胞質(zhì)，被另一個(gè)??ＲＮａｓｅ?ＩＩＩ酶Ｄｉｃｅｒ?qū)⑶绑w加工成２卜２４個(gè)核苷酸的雙鏈ｍｉＲＮＡ。然后將注定成為成熟??序列的那條鏈與Ａｒｇｏｎａｕｔｅ蛋白相結(jié)合，并與其他蛋白質(zhì)一起形成ｍｉＲＮＡ誘導(dǎo)沉默??復(fù)合物（ＲＮＡ－ｉｎｄｕｃｅｄ?ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ?ｃｏｍｐｌｅｘ，?ＲＩＳＣ）。ＲＩＳＣ?上的?ｍｉＲＮＡ?使用不完美的堿??基互補(bǔ)配對(duì)與特異性的ｍＲＮＡ相結(jié)合，引發(fā)ｒｎＲＮＡ不穩(wěn)定或翻譯抑制來(lái)調(diào)控ｍＲＮＡ??在生物體中的表達(dá)。（圖１－２）??｜?＼?ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ?ｏｆ?ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ?ｍＲＮＡ?ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ??ｐｒｉ－ｍｉＲＮＡ?＼?７??ｍ７Ｇ—＾?Ｉ?ｍ７ＧＺ＾、?’?ＡＡＡ??ｌ?？?ｍａｔｕｒｅ?ｍｉＲＮＡ??Ｉ?，??—？?ａｍ〇Ｔ??ｐｒｅ－ｍｉＲＮＡ?Ｔｍｆ＞ｎ?’?ＢＢ??ｓｔａｒ／?ｐａｓｓｅｎｇｅｒ??Ｊ?ｓｔｒａｎｄ?ｍｉＲＮＡ??ｎｕｃｌｅｕｓ?／?ｃｙｔｏｐｌａｓｍ??圖１－２?ｍｉＲＮＡ生物合成過(guò)程??Ｆｉｇ?１－２．?Ｔｈｅ?Ｐｒｏｃｅｓｓ?ｏｆ?ｍｉＲＮＡ?Ｂｉｏｇｅｎｅｓｉｓ?（Ｆｉｎｎｅｇａｎ?Ｅ?Ｆ，?Ｐａｓｑｕｉｎｅｌｌｉ?ＡＥ．?２０１３）??大多數(shù)核轉(zhuǎn)運(yùn)受體都是使用輔因子Ｒａｎ－ＧＴＰ將ＲＮＡ導(dǎo)出細(xì)胞核，一旦細(xì)胞質(zhì)中??的ＧＴＰ水解成ＧＤＰ就可以釋放ＲＮＡ至細(xì)胞質(zhì)［１１５］。ｅｘｐｏｒｔｍ－５在體內(nèi)和體外均依賴(lài)??Ｒａｎ－ＧＴＰ的方式，以高親和力結(jié)合ｐｒｅ－ｍｉＲＮＡ。ｅｘｐｏｒｔｉｎ－５的喪失則會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞質(zhì)中??ｐｒｅ－ｍｉＲＮＡ的減少，因此體內(nèi)ｍｉＲＮＡ水平也會(huì)隨

?第二章ｍｉＲＮＡ過(guò)表達(dá)載體的構(gòu)建以及定量檢測(cè)???２結(jié)果與分析??２．１?ｎ－ｍｉＲ－９與ｎ－ｍｉＲ－１０前體的擴(kuò)增??２．１．１?ＤＺ線蟲(chóng)總ＲＮＡ白勺提取??提取的ＤＺ線蟲(chóng)總ＲＮＡ，�。�?ｐｉ走１％瓊脂糖凝膠電泳，結(jié)果如圖２－１。在凝膠??電泳圖上可以看到有４條明顯的條帶，其中最上面的條帶為基因組ＤＮＡ，可在反轉(zhuǎn)??錄前加入ＤＮＡ酶處理。其余的３條帶從點(diǎn)樣孔從上往下依次是２８Ｓ，?１８Ｓ和５Ｓ，其??中２８Ｓ和１８Ｓ的條帶非常清晰，而５Ｓ的帶比較弱，且２８Ｓ的條帶的亮度是１８Ｓ條帶??亮度的２倍左右，說(shuō)明提取到的ＲＮＡ完整性保持的比較好，沒(méi)有被降解，１號(hào)樣和２??號(hào)樣用于反轉(zhuǎn)錄使用。??２?１?Ｍ??ｍｉ??ＬＸｍ??ｍｌ??圖２－１?ＤＺ線蟲(chóng)總ＲＮＡ的凝膠電泳??Ｆｉｇ．?２－１?Ｇｅｌ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ｏｆ?ＲＮＡ?ｅｘｔｒａｃｔｅｄ?ｆｒｏｍ?ＤＺ??２．１．２?ＤＺ線蟲(chóng)總ＲＮＡ白勺檢測(cè)??表２－７?ＤＺ線蟲(chóng)總ＲＮＡ檢測(cè)結(jié)果??Ｔａｂｌｅ?２－７?Ｔｈｅ?ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ?ｒｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?ｔｏｔａｌ?ＲＮＡ??ＲＮＡ?濃度（ｎｇ／（ｉｌ）?ＡｊＷＡａｃｉ?＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿??１?號(hào)樣?３０７２．０?２．０４??２?號(hào)樣?４１８４．４?２．１０??２３??

【參考文獻(xiàn)】：
碩士論文
[1]基于高通量測(cè)序的崇明擬異小桿線蟲(chóng)與共生菌共生相關(guān)microRNAs的鑒定及作用機(jī)制[D]. 李朋朋.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015
[2]擬異小桿類(lèi)昆蟲(chóng)病原線蟲(chóng)與其共生菌共生專(zhuān)化性、穩(wěn)定性及其致病性研究[D]. 王瑩.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013



本文編號(hào)：3122198