昆蟲病原線蟲（Entomopathogenicnematodes,EPN）指以昆蟲為寄主的致病性線蟲,其致病性源自于其腸道內(nèi)所攜帶的共生菌,二者呈互惠共生關(guān)系。目前已發(fā)現(xiàn)的昆蟲病原線蟲有3大類,分別是小桿科（Rhabditidae）擬異小桿屬（Heterorhabditidoides）、異小桿科（Heterorhabditidae）和斯氏線蟲科（Steinernematidae）。本研究試材崇明擬異小桿（Heterorhabditidoides chongmingensis）線蟲為本實驗室在上海崇明島分離到的EPN新種,其與嗜線蟲沙雷氏菌（Serratia nematodiphila）共生。前期研究運用Solexa高通量測序技術(shù)對崇明擬異小桿線蟲的模式品系DZ0503CMFT（DZ）與其自身共生菌DZ0503SBS1T（S1）和非自身共生菌DR186（186）構(gòu)建形成的單菌線蟲組合DZ-S1和DZ-186的小RNA文庫進行測序,兩文庫中新型miRNA的表達量具有顯著差異。本研究選取顯著上調(diào)的n-miR-10和n-miR-9進行研究,獲得以下主要研究結(jié)果:擴增差異表達的n-miR-9和n... 

【文章來源】：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：100 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－１昆蟲病原線蟲生活史??Ｆｉｇ?１－１．?Ｔｈｅ?Ｌｉｆｅ?Ｃｙｃｌｅ?ｏｆ?Ｅｎｔｏｍｏｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ?Ｎｅｍａｔｏｄｅｓ?（Ｄｉｈｏｎｇ?Ｌｕ，?ｅｔ?ａｌ，?２０１６）??

運蛋白ｅｘｐｏｒｔｉｎ－５的作用下，從細胞核中運輸?shù)郊毎|(zhì)，被另一個??ＲＮａｓｅ?ＩＩＩ酶Ｄｉｃｅｒ?qū)⑶绑w加工成２卜２４個核苷酸的雙鏈ｍｉＲＮＡ。然后將注定成為成熟??序列的那條鏈與Ａｒｇｏｎａｕｔｅ蛋白相結(jié)合，并與其他蛋白質(zhì)一起形成ｍｉＲＮＡ誘導(dǎo)沉默??復(fù)合物（ＲＮＡ－ｉｎｄｕｃｅｄ?ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ?ｃｏｍｐｌｅｘ，?ＲＩＳＣ）。ＲＩＳＣ?上的?ｍｉＲＮＡ?使用不完美的堿??基互補配對與特異性的ｍＲＮＡ相結(jié)合，引發(fā)ｒｎＲＮＡ不穩(wěn)定或翻譯抑制來調(diào)控ｍＲＮＡ??在生物體中的表達。（圖１－２）??｜?＼?ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ?ｏｆ?ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ?ｍＲＮＡ?ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ??ｐｒｉ－ｍｉＲＮＡ?＼?７??ｍ７Ｇ—＾?Ｉ?ｍ７ＧＺ＾、?’?ＡＡＡ??ｌ?？?ｍａｔｕｒｅ?ｍｉＲＮＡ??Ｉ?，??—？?ａｍ〇Ｔ??ｐｒｅ－ｍｉＲＮＡ?Ｔｍｆ＞ｎ?’?ＢＢ??ｓｔａｒ／?ｐａｓｓｅｎｇｅｒ??Ｊ?ｓｔｒａｎｄ?ｍｉＲＮＡ??ｎｕｃｌｅｕｓ?／?ｃｙｔｏｐｌａｓｍ??圖１－２?ｍｉＲＮＡ生物合成過程??Ｆｉｇ?１－２．?Ｔｈｅ?Ｐｒｏｃｅｓｓ?ｏｆ?ｍｉＲＮＡ?Ｂｉｏｇｅｎｅｓｉｓ?（Ｆｉｎｎｅｇａｎ?Ｅ?Ｆ，?Ｐａｓｑｕｉｎｅｌｌｉ?ＡＥ．?２０１３）??大多數(shù)核轉(zhuǎn)運受體都是使用輔因子Ｒａｎ－ＧＴＰ將ＲＮＡ導(dǎo)出細胞核，一旦細胞質(zhì)中??的ＧＴＰ水解成ＧＤＰ就可以釋放ＲＮＡ至細胞質(zhì)［１１５］。ｅｘｐｏｒｔｍ－５在體內(nèi)和體外均依賴??Ｒａｎ－ＧＴＰ的方式，以高親和力結(jié)合ｐｒｅ－ｍｉＲＮＡ。ｅｘｐｏｒｔｉｎ－５的喪失則會導(dǎo)致細胞質(zhì)中??ｐｒｅ－ｍｉＲＮＡ的減少，因此體內(nèi)ｍｉＲＮＡ水平也會隨

?第二章ｍｉＲＮＡ過表達載體的構(gòu)建以及定量檢測???２結(jié)果與分析??２．１?ｎ－ｍｉＲ－９與ｎ－ｍｉＲ－１０前體的擴增??２．１．１?ＤＺ線蟲總ＲＮＡ白勺提取??提取的ＤＺ線蟲總ＲＮＡ，�。�?ｐｉ走１％瓊脂糖凝膠電泳，結(jié)果如圖２－１。在凝膠??電泳圖上可以看到有４條明顯的條帶，其中最上面的條帶為基因組ＤＮＡ，可在反轉(zhuǎn)??錄前加入ＤＮＡ酶處理。其余的３條帶從點樣孔從上往下依次是２８Ｓ，?１８Ｓ和５Ｓ，其??中２８Ｓ和１８Ｓ的條帶非常清晰，而５Ｓ的帶比較弱，且２８Ｓ的條帶的亮度是１８Ｓ條帶??亮度的２倍左右，說明提取到的ＲＮＡ完整性保持的比較好，沒有被降解，１號樣和２??號樣用于反轉(zhuǎn)錄使用。??２?１?Ｍ??ｍｉ??ＬＸｍ??ｍｌ??圖２－１?ＤＺ線蟲總ＲＮＡ的凝膠電泳??Ｆｉｇ．?２－１?Ｇｅｌ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ｏｆ?ＲＮＡ?ｅｘｔｒａｃｔｅｄ?ｆｒｏｍ?ＤＺ??２．１．２?ＤＺ線蟲總ＲＮＡ白勺檢測??表２－７?ＤＺ線蟲總ＲＮＡ檢測結(jié)果??Ｔａｂｌｅ?２－７?Ｔｈｅ?ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ?ｒｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?ｔｏｔａｌ?ＲＮＡ??ＲＮＡ?濃度（ｎｇ／（ｉｌ）?ＡｊＷＡａｃｉ?＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿??１?號樣?３０７２．０?２．０４??２?號樣?４１８４．４?２．１０??２３??

【參考文獻】：
碩士論文
[1]基于高通量測序的崇明擬異小桿線蟲與共生菌共生相關(guān)microRNAs的鑒定及作用機制[D]. 李朋朋.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015
[2]擬異小桿類昆蟲病原線蟲與其共生菌共生�；浴⒎�(wěn)定性及其致病性研究[D]. 王瑩.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013



本文編號：3122198