革蘭氏陰性細(xì)菌可以產(chǎn)生一種用于菌群活動的信號分子,即N-�；呓z氨酸內(nèi)酯（N-acyL-homoserine Lactones,AHLs）。近年來各項研究表明AHLs不僅能被革蘭氏陰性細(xì)菌感知,同樣也被植物感應(yīng),引發(fā)植物一系列生理生化活動。3-碳基己酯酰基高絲氨酸內(nèi)酯（N-3-OxohexanoyL-DL-homoserine Lactone,3OC6-HSL）是植物許多病原菌產(chǎn)生的群體感應(yīng)信號分子AHL中的一種,前期研究實驗證明3OC6-HSL可以增強植物的抗鹽能力及促進植物主根生長,可以在農(nóng)作物增產(chǎn)抗病方面發(fā)揮重要的作用。實驗室前期研究使用生物素和氚標(biāo)記的信號分子,利用酶聯(lián)免疫法、放射性配基法對AHL與GCR2蛋白的相互作用進行受體動力學(xué)分析,也分析了3OC6-HSL與GCR2結(jié)合的特異性、飽和性、可逆性和競爭性,發(fā)現(xiàn)GCR2作為潛在的G蛋白偶聯(lián)受體與信號分子3OC6-HSL存在一定程度的結(jié)合作用。因此,證明GCR2與信號分子3OC6-HSL是否存在真正意義上的結(jié)合以及發(fā)生結(jié)合后3OC6-HSL的信號如何傳遞轉(zhuǎn)導(dǎo)是本次研究的重點。在本次研究中,使用微量熱泳動技術(shù)（MST）證明植物蛋... 

【文章來源】：河北工業(yè)大學(xué)天津市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

蛋白電泳鑒定誘導(dǎo)表達(dá)GCR2蛋白Fig.2.1SDS-PAGEanalysisofpurifiedandconcentratedproteinGCR2

protein Ladder；上清：超聲后離心的上清液；流：結(jié)合鎳柱后流出的菌液W3：Washing buffer 洗下的雜蛋白；E1-E5：Elution buffer 洗下的目的蛋圖 2.2 GCR2 純化后的 SDS-PAGE 檢測Fig. 2.2 SDS-PAGE analysis of purified GCR2菌液上清(上清)、結(jié)合鎳柱后流出液(流)、雜蛋白洗脫液(W1、液(E1-E4)分別進行 SDS-PAGE(圖 2.2)。并對蛋白洗脫液(E 檢測，其中 Western Blot 用 GCR2 一抗進行檢測(圖 2.3)。將 G導(dǎo)表達(dá)純化（圖 2.3），利用超慮離心管濃縮洗脫下的 GCR2Drop 2000 檢測濃度為 0.5 mg/mL，并進行 SDS-PAGE 檢測。濃縮過程中降解，可用于微量熱泳動檢測。

Marker GCR2rotein Ladder；1：純化濃縮后2 濃縮后的 SDS-PAGE 和 wesestern blot analysis of purified CR2 與 AHLs 結(jié)合的受結(jié)合到蛋白 GCR2。微量同時非標(biāo)記的各信號分子間的結(jié)合反應(yīng)后，將樣品

【參考文獻(xiàn)】：
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碩士論文
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[4]基于分子對接技術(shù)的小分子—蛋白質(zhì)相互作用研究[D]. 趙琦.江南大學(xué) 2009



本文編號：3113581