水稻白葉枯病菌Xanthomns oryzae pv.oryzae（Xoo）與細菌性條斑病菌X.oryzae pv.oryzicola（Xoc）是植物病原黃單胞菌的重要類群,也是水稻上的主要病原細菌。這類病菌依賴各種效應子發(fā)揮致病作用,其中,類似轉錄激活子的效應子transcription activator-like effectors（TALEs）在寄主植物中有特定的靶標基因,通過調(diào)控靶標基因表達,影響病菌致病性或寄主抗病性。Xoc和Xoo侵染途徑與危害癥狀均有不同,這種差別可能與TALE基因種類及其作用機制的不同有關。前人研究證明Xoo的TALE可誘導水稻感病基因SWEET表達,促進SWEET蛋白質(zhì)產(chǎn)生,SWEET幫助病菌獲取養(yǎng)分,完成定殖和擴展并發(fā)揮致病作用,類似作用機制在Xoc中還未發(fā)現(xiàn)。本研究試圖通過鑒定Xoc的轉座子插入突變體,分析TALE基因突變對致病性的影響,為進一步研究TALE靶標基因奠定基礎。本實驗室以前通過Tn5轉座子插入Xoc菌株GD41基因組DNA的方法,產(chǎn)生了一個突變體庫,本研究從中初步篩選出了一個影響致病性的陽性克隆,含該克隆的菌株記為GD21突變體。對... 

【文章來源】：南京農(nóng)業(yè)大學江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：81 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－３?Ｉ?ＡＷ？突變體ＧＤ２丨㈧Ｕ突變基因鑒定??Ｆｉｇｕｒｅ?１－３?｜?Ｉｄｅｎｔｉｆ?

獲得真正需耍的含基因的陽性克隆。通過菌落原位雜交分析菌株Ｍ／ｘｗ??文庫克隆中的家族基因，培養(yǎng)ｔｏ／ｘｄ基因組文庫中的克隆，將其轉移到硝酸纖??維素濾膜上進行菌落原位雜交分析顯色后，呈現(xiàn)出的藍紫色斑點為陽性克�。▓D２－１）。??將篩選出的克隆在纖維素膜上劃線培養(yǎng)，再次進行菌落原位雜交，排除假陽性克隆。??ｒ—?圖２－１?Ｉ?ＡＷ■野生型菌株ＧＤ４１菌落用地高辛??．．標記的／？■／探針原位雜交??？?？?？?．?＼?ｆ?＞．?’?Ｆｉｇｕｒｅ?２－１?｜?Ｘｏｃ?ＷＴ?ｓｔｒａｉｎ?ＧＤ４１?Ｃｏｌｏｎｙ?ｉｎ??”?？?？?－?．．．?；?－?＊?？?ｓｉｔｕ?ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ?ｗｉｔｈ?ＤＩＧ－ｌａｂｅｌｅｄ??ｉ?＾＾ｙ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ?ｐｒｏｂｅ??２．２?ＧＤ４１基因組文庫中補／ｚ２Ａ克隆的篩選??將上述從文庫中篩選的含有的所有陽性克隆分別提取質(zhì)粒ＤＮＡ，用分Ｍ??進行酶切（圖２－２），?Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印跡，用辦７／Ｉ－２ｋｂ探針進行雜交。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ雜交檢測??基因信號帶，從中鑒定到含有辦Ｍ－２ｋｂ的克隆，分別標記為Ｅ４、Ｅ８、Ｅ５２、Ａ５７（圖??２－３）。鑒定出來的這４個克隆在后續(xù)的實驗工作中，將分別用來回補ＧＤ２〗突變體，??通過致病性測定

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【參考文獻】：
期刊論文
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