由新月彎孢霉（Curvularia lunata）侵染引起的玉米彎孢葉斑病是常見且重要的玉米真菌病害。目前,對于該病原菌的致病機(jī)理已有了初步的研究,前期工作已證明MAPK信號傳遞通路在該病原菌的致病性方面起到重要作用,并且主要通過毒素、黑色素侵染寄主,但關(guān)于MAPK信號通路與毒素、黑色素合成途徑之間關(guān)系缺少深入研究。由于病原真菌毒素、黑色素代謝通路的合成過程中與輔酶類物質(zhì)（乙酰輔酶A、丙二酰輔酶A）有密切關(guān)系,但在彎孢葉斑病菌中尚不清楚兩者在毒素和色素合成及其與MAPK調(diào)控的關(guān)系。由此本文首先研究玉米彎孢葉斑病菌MAPK通路中與釀酒酵母中參與調(diào)控滲透壓的Hog1同源的基因Chl1的功能,同時(shí)克隆并分析玉米彎孢葉斑病菌中乙酰輔酶A基因ClMfp的功能,在此基礎(chǔ)上研究玉米彎孢葉斑病菌中MAPK信號通路基因與毒素、黑色素及兩者合成的前體物質(zhì)--乙酰輔酶A、丙二酰輔酶A之間可能存在的調(diào)控關(guān)系。1明確MAPK基因Clh1對病菌致病因子作用的影響通過Blast從玉米彎孢葉斑病菌全基因組序列中獲得與釀酒酵母Hog1基因同源性最高的基因序列及其上下游序列,該基因全長2.782kb,cDNA全長1.13... 

【文章來源】：上海交通大學(xué)上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

玉米彎孢葉斑病菌Clh1基因質(zhì)粒構(gòu)建流程

上海交通大學(xué)碩士學(xué)位論文 中混入 2×100%乙醇和 1/10×的 3M CH3COONa 于-20℃保存，半小時(shí)后于12000rpm 15min 去除上清，再用 75%乙醇洗兩次，13000rpm 5min 去除上清，將沉淀吸干水分后混入 20μL 的 ddH2O 中，跑膠分離條帶。用 ddH2O 沖洗電泳后的凝膠 2 次，加入 0.25mol/L 的 HCl 溶液靜置 15min 脫嘌呤，再用 ddH2O 沖洗2 次。隨后加入變性液（1.5M NaCl 和 0.5M NaOH），慢搖 30min，ddH2O 沖洗2 次，重復(fù)一次。然后加入中和液（含 1.5M NaCl 和 1M Trisbase ,調(diào)至 pH7.5），慢搖 30min，ddH2O 沖洗 2 次，重復(fù)一次。將尼龍膜裁剪成有凝膠尺寸相同的大小進(jìn)行轉(zhuǎn)膜[112]，膜轉(zhuǎn)好后置于兩張濾紙之間，烘箱調(diào)至 80℃，將膜放入靜置 2h，隨后于 4℃保存。標(biāo)記，雜交，洗膜，壓光片依據(jù) Gene Images CDP-Star Detection kit (Amersham, UK)中的操作手冊進(jìn)行。 CX-3 和△Clh1 的 DNA 用兩個(gè)快切酶 Hind III 和 EcoR I 檢測。兩個(gè)探針見圖 2-2。

上海交通大學(xué)碩士學(xué)位論文 CG GAT TTG GAT TTT CTC AAT GACC CAT GGC ATG AAG ATG GGC GCT CTG TCA TTT GGA TTA GCA CTCA TGA CGC GAT TGG GGG CAT GAT TAT GTT GTC AAA CAA TGC GGC GTT CGC CGT GGC GGT CCA AGC CCA AAT CGG CCT AGT CCC AAC GGG TGC TCT TCG TCA CCG CCT AGG ACC TAA GCC CGG CCC CC AAA CCT GAC CGC CGT GCG ATTG GCG ACG CTT CAT CCT CTT GG CGG TAA GCG GCT CTG GCT GCAC ATT GCT AAC TAC AAT GCT AGG CTT GGA GCA GAA GAG GGA AAC TGG TCC CTC CTG CCT TTT ATCC TCG ACC GAA GAC TAC TCG TCC TCG ACT GAA CCT GCG ACC TGC

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3090276