萊氏野村菌（Nomuraea rileyi=Metarhizium rileyi）是一種分布廣泛的蟲生真菌,因其在自然環(huán)境中可以感染多種鱗翅目的害蟲,可以作為潛在的生物殺蟲劑而逐漸受到關(guān)注。但是萊氏野村菌分生孢子的產(chǎn)孢需要一定的光照溫度等苛刻條件,且不耐儲(chǔ)存,這對(duì)于以分生孢子作為殺蟲制劑有效成分的真菌來(lái)說(shuō),是制約其工業(yè)化生產(chǎn)的重要因素。本實(shí)驗(yàn)室經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期的研究成功實(shí)現(xiàn)了萊氏野村菌微菌核的人工誘導(dǎo),微菌核具有生產(chǎn)成本低、耐高溫、耐儲(chǔ)存、可持續(xù)侵染等特點(diǎn),因此可以作為分生孢子的有效替代品用于殺蟲制劑的生產(chǎn)。本實(shí)驗(yàn)室在2012年采用比較轉(zhuǎn)錄組技術(shù)研究微菌核形成的分子機(jī)理,發(fā)現(xiàn)在微菌核發(fā)育過(guò)程中伴隨著活性氧（Reactive oxygen species,ROS）的產(chǎn)生。而已有研究表明真菌在應(yīng)對(duì)外部滲透和氧脅迫壓力時(shí),兩個(gè)跨膜蛋白Sholp和Sln1p發(fā)揮重要的感受作用,這兩個(gè)蛋白分別將信號(hào)傳遞給高滲透壓甘油信號(hào)途徑（High osmolarity glycerol,HOG）。另一方面,前期研究表明,萊氏野村菌Nrsho1和Nrsln1基因在調(diào)控微菌核的發(fā)育方面發(fā)揮著重要功能。鑒于此,本文以萊氏... 

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【部分圖文】：

煙曲霉(Aspergiddusfumigatus)HOG通路示意圖(根據(jù)Ma,2013重新繪制)

24的農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化h-Nrssk1 和 Pzp-Ptrpc-Hph-Nrpbs2 質(zhì)�？寺u菌培養(yǎng)的菌液中進(jìn)行質(zhì)粒的提劑盒進(jìn)行提取，操作步驟略。桿菌轉(zhuǎn)化p-Ptrpc-Hph-Nrssk1 和 Pzp-Ptrpc-Hph-Nr化，操作步驟為：態(tài)細(xì)胞 AGL-1 從保存的-80°C 冰箱中

3 結(jié)果與分析3.1 Nrssk1 和 Nrpbs2 基因克隆與生物信息學(xué)分析3.1.1 Nrssk1 和 Nrpbs2 基因克隆根據(jù) EST 序列設(shè)計(jì)基因特異引物，以萊氏野村菌基因組 DNA 為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，測(cè)序后獲得Nrssk1和Nrpbs2基因的部分序列，經(jīng)多次擴(kuò)增及測(cè)序拼接，獲得了足夠長(zhǎng)度的 DNA 序列，通過(guò) ORF Finder 在線軟件對(duì) Nrssk1 和 Nrpbs2 基因ORF 進(jìn)行預(yù)測(cè)，結(jié)果顯示 Nrssk1 開放閱讀框長(zhǎng) 2929bp，編碼 929 個(gè)氨基酸，在距離起始密碼子 139bp 和 2634bp 處有兩個(gè)內(nèi)含子，分別長(zhǎng) 125bp 和 82bp。Nrpbs2基因開放閱讀框長(zhǎng) 2038bp，編碼 649 個(gè)氨基酸，在距離其起始密碼子 1554bp 處有一個(gè)長(zhǎng) 85bp 的內(nèi)含子。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]極細(xì)鏈格孢菌HOG1、PBS2基因克隆及功能初步分析[D]. 馮飛.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2007

碩士論文
[1]萊氏野村菌的發(fā)酵工藝與田間應(yīng)用潛力評(píng)測(cè)[D]. 周立峰.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
[2]菜氏野村菌致病性和生物學(xué)特性的研究[D]. 李鋒.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2002



本文編號(hào)：3059679