番木瓜環(huán)斑病毒（Papaya ringspot virus,PRSV）屬于馬鈴薯Y病毒屬（Potyvirus）,根據(jù)寄主范圍可以分為P（PRSV-P）和W（PRSV-W）兩個株系。PRSV-W主要侵染西葫蘆、甜瓜等葫蘆科作物,可引起葉片卷曲、畸形、花葉和泡斑,植株矮化等癥狀,造成果實畸形或在表面形成水漬狀環(huán)斑,降低了產(chǎn)量和品質(zhì),嚴重時甚至絕產(chǎn)。目前PRSV在中國、波蘭、印度、巴西等地均有發(fā)生,是危害葫蘆科作物生產(chǎn)的重要病毒。本研究獲得并分析了PRSV山東分離物（PRSV-SD）的全基因組序列,構(gòu)建了PRSV-SD全長侵染性cDNA克隆,篩選出PRSV弱毒突變體并驗證了其交叉保護效果。從山東濟南采集到葉片表現(xiàn)畸形、花葉,果實表面環(huán)斑的西葫蘆樣品,經(jīng)檢測其中含PRSV。通過RT-PCR分段擴增其全基因組片段并進行序列測定,結(jié)果表明,除了3′-端poly（A）尾以外,PRSV-SD基因組全長10337核苷酸（nt）,5′-和3′-NCR分別為90 nt和206 nt,開放閱讀框編碼3346個氨基酸。PRSV-SD與另外18個PRSV分離物的全基因組核苷酸一致率為82.0%⁸

【文章來源】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：83 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

植物RNA病毒侵染性克隆的兩種方法比較(NagyováandSubr,2007)

京市六一儀器廠 DYY-8C 型）、凝膠成像儀（SageCreation）、手持式長波紫外燈（UVPmodelB100A）、離心機（Eppendorf5417R）、水浴鍋（寧波江南儀器廠 SDC-6）、恒溫搖床（Honour HNY-2102C）、超微量分光光度計（Analytikjena Scandrop）、超凈工作臺（蘇凈安泰 SW-CJ-1BU）、酶聯(lián)免疫測定儀（BioRadModel550）、高壓滅菌鍋（Yamato SM830）、全自動化學(xué)發(fā)光儀（ChampChemi）等。2.2 實驗方法2.2.1 序列測定與分析2.2.1.1 擴增策略與引物設(shè)計比對 GneBank 中多個 PRSV 分離物的核苷酸序列，選取保守區(qū)段設(shè)計引物，分4段擴增5′-端以外的基因組序列。然后根據(jù)已得到的近5′-端序列設(shè)計5′-RACE引物。擴增策略按照圖 2-1 進行，相鄰片段之間有 200bp 左右的重疊。

圖 2-2 PRSV 山東分離物全長 cDNA 克隆構(gòu)建策略Fig. 2-2 Strategy for constructing the full-length cDNA clone of PRS表 2-2 構(gòu)建 PRSV 山東分離物全長 cDNA 克隆所用引物ble 2-2 Primers used in constructing the full-length cDNA clone of PR Nucleotide sequence （5′ to 3′）AAAAAAAATAAAACATCTCAACACAACAC CCGATTCTTAGTGCAATTCCCT TCATACAGAGAAGGGTATCCAAGAA CTCTCATTCCAAGAGGCTCGAATAG F TGCACTAAGAATCGGCCCCGGGAATTCTAAGAGG TGTTTTATTTTTTTTCTCTCCAAATGAAATGAACTTCC

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3050892