【目的】將疊氮溴化丙啶（PMA）與實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)（qPCR）相結(jié)合,建立一種快速檢測(cè)梨火疫病菌活菌的方法,為病害的檢疫和早期診斷,開展病原學(xué)、流行規(guī)律研究及制定科學(xué)防控措施嚴(yán)防病害入侵提供技術(shù)支持�！痉椒ā恳岳婊鹨卟【‥rwinia amylovora）質(zhì)粒pEA29設(shè)計(jì)特異性引物EaP29F1/EaP29R1,通過優(yōu)化PMA的質(zhì)量濃度和曝光時(shí)間,確定區(qū)分梨火疫病菌死活菌的PMA預(yù)處理最優(yōu)反應(yīng)條件,再以活菌DNA為模板進(jìn)行qPCR的特異性擴(kuò)增。設(shè)置不同比例死活菌混合體系,驗(yàn)證PMA-qPCR反應(yīng)的可靠性�！窘Y(jié)果】當(dāng)梨火疫病菌濃度為1×10⁸CFU·mL^-1、PMA濃度為25μmol·L^-1、曝光時(shí)間為10 min時(shí),能完全抑制死菌的擴(kuò)增,僅以活菌體DNA為靶標(biāo)進(jìn)行選擇性擴(kuò)增。當(dāng)活菌比例為10%～100%時(shí)(濃度為6.0×10⁷～6.0×10⁸CFU·mL^-1),PMA-qPCR測(cè)得的活菌數(shù)與理論活菌數(shù)值均在同一個(gè)數(shù)量級(jí),二者存在良好的線性關(guān)系（R... 

【文章來源】：果樹學(xué)報(bào). 2020,37(09)北大核心

【文章頁數(shù)】：9 頁

【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 供試材料
        1.1.1 供試菌株和培養(yǎng)基
        1.1.2 供試植物
        1.1.3 主要試劑和設(shè)備
    1.2 梨火疫病菌死菌和活菌菌懸液的制備
    1.3 梨火疫病菌q PCR檢測(cè)引物及特異性驗(yàn)證
    1.4 PMA處理反應(yīng)條件的優(yōu)化
        1.4.1 PMA濃度的優(yōu)化
        1.4.2 PMA曝光時(shí)間的優(yōu)化
    1.5 PMA-q PCR對(duì)E.amylovora死活菌混合液的檢測(cè)
    1.6 PMA-q PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立和靈敏度檢測(cè)
    1.7 果樹枝條病樣的PMA-q PCR檢測(cè)
    1.8 數(shù)據(jù)分析
2 結(jié)果與分析
    2.1 利用梨火疫病菌q PCR檢測(cè)引物對(duì)Ea P29F1/Ea P29R1的特異性驗(yàn)證
    2.2 PMA處理反應(yīng)條件的優(yōu)化
        2.2.1 抑制E.amylovora死菌擴(kuò)增的最佳PMA濃度
        2.2.2 PMA曝光時(shí)間的的優(yōu)化
    2.3 PMA-q PCR檢測(cè)E.amylovora的標(biāo)準(zhǔn)曲線及靈敏度
    2.4 PMA-q PCR對(duì)E.a死活菌混合液的檢測(cè)
    2.5 果樹枝條樣品中E.a的PMA-q PCR檢測(cè)
3 討論



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