柑橘黃龍病（Citrus Huanglongbing,HLB）嚴(yán)重威脅世界柑橘產(chǎn)業(yè)的發(fā)展,對(duì)其造成巨大經(jīng)濟(jì)損失。HLB具有一定的潛伏期,從病原菌感染到引起黃化癥狀需要一定的時(shí)間,因此建立一種高效、靈敏、快速的檢測(cè)方法,應(yīng)用于柑橘產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展非常必要。細(xì)菌分泌蛋白是細(xì)菌產(chǎn)生的一種效應(yīng)因子,在細(xì)菌的致病過(guò)程中起重要作用。本研究從柑橘黃龍病菌亞洲株系基因組中分析了病原菌分泌蛋白系統(tǒng)及相關(guān)分泌蛋白的10個(gè)基因,通過(guò)熒光定量RT-PCR（RT-qPCR）方法,篩選獲得RNA含量較高的2個(gè)蛋白基因。開(kāi)展了分泌蛋白基因表達(dá)量和亞細(xì)胞定位研究,為研究該蛋白參與的HLB致病機(jī)理奠定基礎(chǔ);同時(shí)對(duì)這2個(gè)分泌蛋白基因進(jìn)行原核表達(dá),免疫小鼠制備了特異抗血清,為408和PAP蛋白功能研究和開(kāi)發(fā)HLB的蛋白檢測(cè)產(chǎn)品提供基礎(chǔ)。具體結(jié)果如下:（1）以海南瓊中、瓊海感染HLB的綠橙為材料,提取總DNA和RNA,制備DNA和cDNA。根據(jù)柑橘黃龍病菌亞洲株系基因組中分析的病原菌分泌蛋白系統(tǒng)及相關(guān)分泌蛋白的6個(gè)基因,設(shè)計(jì)熒光定量PCR（RT-qPCR）引物,對(duì)HLB樣品的6個(gè)基因mRNA表達(dá)量進(jìn)行定量檢測(cè)。結(jié)果表明:瓊海和... 

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

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圖３綠橙樣品總ＲＡＮ的提取??

圖２綠橙樣品總ＤＮＡ的提ｈｅ?ｅｘｔｒａｃｔ?ｔｏｔａｌ?ＤＮＡ?ｆｒｏｍ?Ｇｒｅｒ；?１：瓊海綠橙總ＤＮＡ提取；２ｌ?ＤＮＡ?ｆｒｏｍ?Ｇｒｅｅｎ?Ｏｒａｎｇｅ?ｏｆ?ＱＯｒａｎｅ?ｏｆｉｏｎｚｈｏｎ

３．?１．２高分泌蛋白基因４促和以／７的定量篩選??熒光定量ＰＣＲ結(jié)果分析表明瓊海和瓊中６種分泌蛋白基因和內(nèi)參基因１６ＳｒＲＮＡ??的擴(kuò)增曲線（圖４）均為單峰，表明擴(kuò)增片段唯一，沒(méi)有非特異性擴(kuò)增產(chǎn)生。ｑＲＴ－ＰＣＲ??的擴(kuò)增結(jié)果表明，６個(gè)基因均擴(kuò)增較弱，其中４洲和烈／３基因有擴(kuò)增曲線，Ｃｔ值在??１５？３５之間，其余基因沒(méi)有明顯的擴(kuò)增曲線或擴(kuò)增較弱，Ｃｔ超過(guò)３５?（Ｃｔ?＞３５，表示??很低的擴(kuò)增量或擴(kuò)增不特異）。進(jìn)－步的分析表明，在瓊海樣品中仰基因的表達(dá)水??平比別戶(hù)基因表達(dá)水平高２．４３；在瓊中樣品中，４洲基因的表達(dá)水平比烈戶(hù)基因表??達(dá)水平高９．４５比瓊海樣品中４財(cái)基因的表達(dá)水平還要高（圖５）。綜合ＲＴ－ｑＰＣＲ的結(jié)??果分析，我們從６種柑橘黃龍病菌分泌蛋白基因中篩選出２個(gè)相對(duì)含量較高的基因，??即祁＜９和州尸。??Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ?Ｃｕｒｖｅ??６１９?－ｊ?Ａ??ｅ｜?１??－８１?Ｔ?ｒ——Ｔ?—Ｔ?！?Ｔ?Ｔ?—Ｔ?－?ｒ?－?Ｔ－?－Ｔ－—Ｔ?ｒ?￣Ｔ＇一Ｉ?１?１?Ｔ?Ｔ?１??５５?５７?５９?６１?６３?６５?６７?６９?７１?７３?７５?７７?７９?８１?８３?８５?８７?８９?９１?９３?９５??Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ?（Ｘ／）??圖４?６種分泌蛋白基因和內(nèi)參１６Ｓ?ｒＲＮＡ基因焚光定

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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