芽孢桿菌代謝產(chǎn)生的脂肽類物質(zhì)具有抗菌、抗腫瘤、抗病毒等多種生物活性,但芽孢桿菌脂肽產(chǎn)量普遍較低,探索高產(chǎn)量的培養(yǎng)條件是開發(fā)利用的重點,而快速的產(chǎn)量評價方法則可大大提高條件探索的效率。本論文在前人成功篩選出一株對山核桃干腐病病原菌葡萄座腔菌B.dothidea有明顯抑制效果的芽孢桿菌WK1的基礎(chǔ)上,開展了解淀粉芽孢桿菌WK1最佳發(fā)酵時間、評價其產(chǎn)量的新方法探索,應(yīng)用液相電噴霧質(zhì)譜法對主要代謝產(chǎn)物成分進行鑒定,應(yīng)用HPLC評價不同培養(yǎng)基、不同初始pH以及不同接種量對脂肽抗生素產(chǎn)量影響,以其獲得最佳發(fā)酵條件。獲得以下初步結(jié)果:最好的發(fā)酵時間的探索。芽孢桿菌WK1作為芽孢桿菌屬,對山核桃干腐病病原菌葡萄座腔菌B.dothidea有明顯的抑制效果。通過48、60、72小時等3個不同時間的搖瓶發(fā)酵得到抗生素代謝產(chǎn)物,制作含有抗菌物質(zhì)的固體培養(yǎng)基,將葡萄座腔菌B.dothidea的病原菌的單細(xì)胞接種到所有含有抗生素的培養(yǎng)基中均無法生長,而以病原菌餅接種到含有抗生素的培養(yǎng)基中,則可以觀察到抑制率抑制效果的差別,最好的發(fā)酵時間為72h。一種快速評價芽孢桿菌脂肽產(chǎn)量以及底物碳利用效率的新方法。以解淀粉芽孢... 

【文章來源】：浙江農(nóng)林大學(xué)浙江省

【文章頁數(shù)】：59 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

不同時間PDA培養(yǎng)基內(nèi)病原菌生長狀況

解淀粉芽孢桿菌 WK1 產(chǎn)脂肽產(chǎn)量評價新方法及其培養(yǎng)條件優(yōu)化果與分析 不同初始 pH 隨發(fā)酵時間的動態(tài)變化肽類物質(zhì)是解淀粉芽孢桿菌 WK1 的代謝產(chǎn)物，一般而言，隨著微生物類物質(zhì)不斷積累，微生物繁殖越多則代謝產(chǎn)量越多。pH5 處理產(chǎn)量低的為酸性環(huán)境不利于 WK1 生長。整個發(fā)酵過程中初始 pH 為 5 的處理其低于 6（圖 4.1），而 pH6 和 7 的處理其發(fā)酵液 pH 在前 24 h 急速下回升，到 48-56 h 恢復(fù)到初始水平、之后繼續(xù)上升，最后達到 8.14。不桿菌產(chǎn)脂肽最適 pH 數(shù)值不同，張雷等[78]對解淀粉芽孢桿菌菌株 15-優(yōu)化過程中發(fā)現(xiàn) pH7 時該菌株產(chǎn)脂肽量以及培養(yǎng)液 OD600值達到最大對解淀粉芽孢桿菌菌株 SC1150 發(fā)酵條件優(yōu)化時發(fā)現(xiàn)最適 pH 值為 6.5合的初始 pH 值對微生物的培養(yǎng)就顯得尤為重要。

4 檢測芽孢桿菌脂肽物質(zhì)產(chǎn)量的新方法探索在 72 h 后脂肽類物質(zhì)的產(chǎn)量依次為 pH6> pH7> pH5（圖 4.3）同處理脂肽類物質(zhì)產(chǎn)量差異規(guī)律與差減法一致（圖 4.3），但5、 pH6 和 pH7 的差減法結(jié)果分別比重量法高 36.93%、1因為 TOC 能檢測到溶液有機碳的微小變化，這可能是導(dǎo)致重原因，因此差減法相比重量法更加靈敏。兩種方法的結(jié)果存在 pH5 時重量法較低，導(dǎo)致相關(guān)系數(shù)只有 0.5632(n=9)。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]抗菌海洋解淀粉芽孢桿菌GM-1-2菌株搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)基和發(fā)酵條件優(yōu)化[J]. 汪晶晶,曹雪梅,李歡,暴增海,馬桂珍,賈杰,王淑芳,羅志會.  江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué). 2018(08)
[2]內(nèi)生解淀粉芽孢桿菌BEB17脂肽類和聚酮類化合物的抑菌活性分析[J]. 桑建偉,楊揚,陳奕鵬,蔡吉苗,陸翠梅,黃貴修.  植物病理學(xué)報. 2018(03)
[3]解淀粉芽孢桿菌（Bacillus amyloliquefaciens）XZ-1發(fā)酵條件的優(yōu)化[J]. 楊冬靜,趙永強,孫厚俊,張成玲,徐振,謝逸萍.  江西農(nóng)業(yè)學(xué)報. 2017(10)
[4]解淀粉芽孢桿菌（Bacillus amyloliquefaciens）HAB-7的培養(yǎng)基優(yōu)化及抑菌活性[J]. 劉文波,熊燕紅,秦春秀,靳鵬飛,謝清標(biāo),鄭服叢,繆衛(wèi)國.  中國植保導(dǎo)刊. 2017(06)
[5]枯草芽孢桿菌產(chǎn)脂肽的發(fā)酵條件優(yōu)化[J]. 張楠楠,徐丹,尹婷,徐學(xué)明.  安徽農(nóng)業(yè)科學(xué). 2017(15)
[6]枯草芽孢桿菌B43對香蕉枯萎病菌抑菌活性及其活性成分分析[J]. 李晨楚,張榮意,康迅,靳鵬飛,譚志瓊.  中國南方果樹. 2017(03)
[7]解淀粉芽孢桿菌植物亞種CGMCC 11640對山核桃干腐病菌的抑制機制[J]. 程敏,徐秋芳.  浙江農(nóng)林大學(xué)學(xué)報. 2017(02)
[8]解淀粉芽孢桿菌CM3培養(yǎng)基及發(fā)酵條件優(yōu)化[J]. 陳哲,梁宏,黃靜,趙佳.  山西農(nóng)業(yè)科學(xué). 2016(11)
[9]海洋芽孢桿菌B-9987中抗MDR菌活性成分研究[J]. 張君,任鵬飛,田黎,李花月,李文利.  中國海洋藥物. 2016(05)
[10]響應(yīng)面法對解淀粉芽孢桿菌（Bacillus amyloliquefaciens）12-7產(chǎn)抗菌蛋白條件的優(yōu)化[J]. 王全,王占利,高同國,李術(shù)娜.  棉花學(xué)報. 2016(03)

博士論文
[1]解淀粉芽孢桿菌NJN-6拮抗物質(zhì)的分離鑒定及對土壤微生物區(qū)系的影響研究[D]. 袁軍.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[2]產(chǎn)抗菌脂肽GD菌株篩選及脂肽分離、鑒定與應(yīng)用研究[D]. 莊國宏.揚州大學(xué) 2014
[3]芽孢桿菌及其脂肽類化合物防治植物病害和促進植物生長的研究[D]. 王帥.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2009

碩士論文
[1]山核桃干腐病抑制菌的篩選鑒定及抑制機理的探究[D]. 程敏.浙江農(nóng)林大學(xué) 2016
[2]解淀粉芽孢桿菌15-1-1發(fā)酵條件優(yōu)化及對辣椒根腐病防治效果初探[D]. 張雷.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014
[3]解淀粉芽孢桿菌SWB16脂肽類代謝產(chǎn)物對球孢白僵菌的拮抗作用及發(fā)酵條件的初步優(yōu)化[D]. 趙東洋.西南大學(xué) 2014
[4]菌株N5對番茄的促生及其防控番茄青枯病的作用[D]. 王洪梅.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013
[5]芽胞桿菌發(fā)酵液中抗菌脂肽的定量檢測方法及應(yīng)用[D]. 艾嘉.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2008
[6]棉花生防芽孢桿菌A57、A178的抑菌機理、拮抗活性物質(zhì)及防病、促生作用[D]. 陳莉.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué) 2007
[7]山葵黑根病菌拮抗菌的篩選、鑒定及防治研究[D]. 陳靜鴻.四川大學(xué) 2007
[8]一株枯草芽孢桿菌抗植物病原真菌活性物質(zhì)的研究[D]. 魯小城.浙江大學(xué) 2006



本文編號：3007494