農(nóng)藥殘留受到各國(guó)政府與消費(fèi)者關(guān)注,其檢測(cè)技術(shù)已受到越來(lái)越多的重視。因此,建立有效的農(nóng)藥殘留檢測(cè)方法,特別是靈敏、準(zhǔn)確、快速、簡(jiǎn)便的檢測(cè)方法,對(duì)保護(hù)生態(tài)環(huán)境、消費(fèi)者健康具有重要意義。本研究以間接競(jìng)爭(zhēng)免疫分析為基礎(chǔ),結(jié)合膠體金和寡核苷酸鏈信號(hào)放大技術(shù),熒光標(biāo)記寡核苷酸鏈探針提供檢測(cè)信號(hào),先后建立了針對(duì)三唑磷農(nóng)藥單殘留和三唑磷、對(duì)硫磷、毒死蜱農(nóng)藥多殘留檢測(cè)的寡核苷酸信號(hào)放大免疫分析方法。主要內(nèi)容如下:采用檸檬酸鈉還原法,合成了粒徑均一、形狀規(guī)則、分散性良好、濃度約為9.9 nM的膠體金。將農(nóng)藥單克隆抗體和熒光標(biāo)記的寡核苷酸鏈標(biāo)記在膠體金表面,對(duì)標(biāo)記過(guò)程的穩(wěn)定劑濃度、老化時(shí)間、抗體濃度、寡核苷酸序列等條件進(jìn)行優(yōu)化,得到寡核苷酸熒光探針。利用間接競(jìng)爭(zhēng)模式,建立了基于寡核苷酸信號(hào)放大的三唑磷農(nóng)藥熒光免疫分析方法,并對(duì)方法的分析條件如探針與半抗原的工作濃度、二硫蘇糖醇（DTT）工作條件、甲醇濃度等進(jìn)行了優(yōu)化。方法在0.01–20μg L^–1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,檢出限為6 ng L^–1。利用本方法進(jìn)行了水、大米、黃瓜、甘藍(lán)和蘋果基質(zhì)添加回收試驗(yàn)。方法的平均回... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁(yè)數(shù)】：70 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

酶催化與其他放大技術(shù)結(jié)合的電化學(xué)免疫分析方法

中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文 第一章 引言物素標(biāo)記的 AP 通過(guò)親和素與夾心結(jié)構(gòu)相結(jié)合，形成第一級(jí)信號(hào)放大，在 AP 酶催化作用下，電活性對(duì)氨基苯基磷酸酯（PAPP）底物迅速水解成電活性對(duì)氨基苯酚（PAP），在電極表面氧化成對(duì)醌亞胺（PQI）。在心肌黃酶（DI）存在下，PQI 分解為 PAP，導(dǎo)致 PAP 的可逆循環(huán)，形成第二級(jí)信號(hào)放大。然后，DI 的氧化狀態(tài)通過(guò)其天然底物煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）再生成其還原天然狀態(tài)，形成第三級(jí)信號(hào)放大。在以上幾種信號(hào)放大作用下，該放法對(duì)人 IgG 的檢出限低至 3.5×10–5g mL–1。

圖 1.4 幾種基于納米材料信號(hào)放大技術(shù)的傳感器Fig. 1.4 Sensors based on signal amplification of nanoparticles鏈酸鏈進(jìn)行信號(hào)放大時(shí)，一般需要結(jié)合納米材料比表面積大的特米顆粒上，通過(guò)在鏈的另一端標(biāo)記熒光、酶等信號(hào)分子或者將合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)、生物芯片銀染、循環(huán)放大等技術(shù)實(shí)現(xiàn)信號(hào)放大環(huán)境污染物等的高靈敏度檢測(cè)（Chen et al, 2018; Rasheed et a等將巰基修飾的短鏈 DNA 和檢測(cè)抗體標(biāo)記在膠體金表面，通獲抗體與抗原結(jié)合形成三明治夾心結(jié)構(gòu)，結(jié)合 RCA 循環(huán)實(shí)現(xiàn) al, 2010）。

【參考文獻(xiàn)】：
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博士論文
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