在全球范圍內(nèi)大豆疫霉引起的大豆根腐病是一種極為嚴(yán)重的病害,在我國每年都會造成極大的經(jīng)濟(jì)損失。大環(huán)內(nèi)酯類抗生素勃利霉素對大豆疫霉具有非常高的抑制活性,可能成為一種新型、高效的生物農(nóng)藥。前期研究顯示,勃利霉素可以通過與大豆疫霉的蘇氨酰-t RNA合成酶形成復(fù)合體抑制蛋白的合成,本研究旨在探索勃利霉素抗大豆疫霉病的其他途徑。利用生物信息學(xué)方法分析大豆疫霉細(xì)胞周期蛋白依賴性蛋白激酶psCdc2基因,其與勃利霉素抑制酵母的細(xì)胞周期作用靶標(biāo)Cdc28基因高度同源,通過基因工程技術(shù)分別在大腸桿菌和酵母中克隆psCdc2,體外表達(dá)、純化獲得蛋白,利用熒光光譜分析了勃利霉素與psCdc2在體外的相互作用,并利用dsRNA介導(dǎo)psCdc2基因沉默技術(shù)研究了該基因的突變對大豆疫霉的影響。結(jié)果如下:（1）大豆疫霉細(xì)胞周期蛋白依賴性蛋白激酶psCdc2生物信息學(xué)分析結(jié)果顯示,該蛋白由20種氨基酸組成,蛋白分子量為35,478Da,等電點為8.56,是穩(wěn)定存在的蛋白,無信號肽,為α/β型蛋白。在大豆疫霉基因組內(nèi)找到了與酵母Cdc28基因存在相互作用10個蛋白同源的大豆疫霉的蛋白,蛋白的一致性百分比在26%-46%... 

【文章來源】：黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)黑龍江省

【文章頁數(shù)】：80 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

細(xì)胞周期蛋白依賴性蛋白激酶psCdc2基因與pET-32a質(zhì)粒重組示意圖

胞周期蛋白依賴性蛋白激酶 psCdc2 基因與 pPIC9K 質(zhì)粒重組轉(zhuǎn)化示2-2 The map of construction and transformation of vector pPIC9K-psCdc2胞周期蛋白依賴性蛋白激酶 psCdc2 在畢赤酵母中表達(dá)9K 載體引物：TGGTTCCAATTGACAAGC 3'AATGGCATTCTGACATCC 3'粒 DNA 的制備表達(dá)載體 pPIC9K-psCdc2 的大腸桿菌，并大量提取質(zhì)粒。利酶切，使其線性化。酶切體系如下：表 2-18 pPIC9K-psCdc2 質(zhì)粒酶切體系able 2-18 Enzyme digestion reaction system of pPIC9K-psCdc2 plasm組份 體積（μL）

478 Da，等電點為8.56。該蛋白在大腸桿菌體內(nèi)的半衰期大于10 h，酵母體內(nèi)的半衰期大于20 h，屬于穩(wěn)定存在蛋白。蛋白的脂肪族系數(shù)為92.72，ProtScale程序的親疏水性分析表明其親水性略強（見圖3-1）。信號肽分析程序signal P分析結(jié)果顯示該蛋白質(zhì)無信號肽（見圖3-2）。圖 3-1 大豆疫霉細(xì)胞周期蛋白依賴性蛋白激酶 psCdc2 親疏水性預(yù)測結(jié)果Fig 3-1 The hydrophobicity or hydrophilicity scales of psCdc2

【參考文獻(xiàn)】：
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本文編號：2942413