WRKY轉(zhuǎn)錄因子是植物中最大的轉(zhuǎn)錄因子家族之一,在植物防御反應(yīng)中發(fā)揮著轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)作用,在此過程中WRKY往往作為正調(diào)節(jié)或負(fù)調(diào)節(jié)因子參與植物的防衛(wèi)反應(yīng)。目前,棉花（Gossypium spp.）抗病相關(guān)WRKY轉(zhuǎn)錄因子的抗病作用機(jī)制的研究相對(duì)較少。本論文針對(duì)兩個(gè)作用相反的WRKY基因GhWRKY48和GhWRKY33的抗病功能進(jìn)行鑒定和分析,初步闡明了它們協(xié)調(diào)棉花對(duì)黃萎病抗性的分子機(jī)制,取得的主要研究結(jié)果如下:1.從陸地棉（Gossypium hirsutum L.）品種“中棉所35”中克隆分離了兩個(gè)WRKY轉(zhuǎn)錄因子基因,分別命名為GhWRKY48和GhWRKY33。GhWRKY48編碼序列全長為882 bp,編碼293個(gè)氨基酸殘基,預(yù)測(cè)分子量和等電點(diǎn)分別為32.68KDa和6.10;GhWRKY33編碼序列全長為1533 bp,編碼510個(gè)氨基酸殘基,預(yù)測(cè)分子量和等電點(diǎn)分別為55.94 KDa和7.15。用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR）分析組織特異性表達(dá),結(jié)果表明GhWRKY4... 

【文章來源】：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)甘肅省

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

棉花根、莖和葉總RNA瓊脂糖凝膠電泳圖

24圖 2 GhWRKY48 基因的 PCR 產(chǎn)物、編碼序列、推導(dǎo)的氨基酸序列和系統(tǒng)進(jìn)化樹分析Fig.2 PCR amplification, coding sequence and deduced amino acids of GhWRKY48 andphylogenetic tree analysis of WRKY48 from cotton and other plant speciesA. GhWRKY48 基因的 PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物；B. GhWRKY48 編碼序列及推導(dǎo)的氨基酸序列；翻譯起始密碼子（ATG）與翻譯終止密碼子（TAG）分別用藍(lán)色和紫色標(biāo)記；C. GhWRKY48 蛋白與其它植物 WRKY48 蛋白的系統(tǒng)進(jìn)化樹分析A．PCR amplification of GhWRKY48 gene; B. Coding sequence and deduced amino acids ofGhWRKY48; The translation start codon (ATG) and stop codon (TAG) were marked in blue andpurple, respectively; C. Phylogenetic tree analysis on GhWRKY48 protein and WRKY48 proteinof other plants.在 NCBI 中，針對(duì) WRKY48 蛋白進(jìn)行搜索，主要獲得 4 種植物 WRKY48的氨基酸序列：擬南芥 AtWRKY48 (Arabidopsis thaliana，NP_199763.1)、白菜BrWRKY48 (Brassica rapa，P_001288867.1)、大豆 GmWRKY48 (Glycine max，NP_001237221.2)、煙草 NaWRKY48 (Nicotiana attenuata，XP_019262610.1)。并

將它們與棉花 GhWRKY48 構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹，由圖 2C 可以看出，GhWRKY48 與煙草 WRKY48 蛋白具有較近的親緣關(guān)系。3.1.3 GhWRKY48 基因組織和激素處理表達(dá)分析提取棉花根、莖和葉的總 RNA，反轉(zhuǎn)錄成 cDNA，用 qRT-PCR 方法檢測(cè)GhWRKY48 在這些組織中的表達(dá)情況，結(jié)果表明其在根、莖和葉中均表達(dá)，莖中為優(yōu)勢(shì)表達(dá)（圖 3A）。利用 qRT-PCR 檢測(cè) SA 和 JA 對(duì) GhWRKY48 轉(zhuǎn)錄水平的影響，結(jié)果表明 SA和 JA 均能誘導(dǎo) GhWRKY48 表達(dá)。JA 處理后，在 1.5 h GhWRKY48 表達(dá)量達(dá)到最大，但在 3 h 表達(dá)量為最低，12 h 表達(dá)量達(dá)到第二個(gè)高峰值，總體呈現(xiàn)雙峰趨勢(shì)（圖 3B）。SA 處理后，也是在 1.5 h GhWRKY48 表達(dá)量達(dá)到最大值，此后逐漸下降，除了 12 h 表達(dá)量小于對(duì)照，其它時(shí)間點(diǎn)的表達(dá)量均明顯高于對(duì)照（圖 3C）。結(jié)果說明 GhWRKY48 基因?qū)@兩種激素都存在著應(yīng)答響應(yīng)。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
[1]miR164-GhNAC100和GhWRKY22參與棉花抗黃萎病的機(jī)制分析[D]. 雷煜.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué) 2018



本文編號(hào)：2934423