GhWRKY48與GhWRKY33基因調控棉花對大麗輪枝菌的抗性反應
發(fā)布時間：2020-12-23 21:56
WRKY轉錄因子是植物中最大的轉錄因子家族之一,在植物防御反應中發(fā)揮著轉錄調節(jié)作用,在此過程中WRKY往往作為正調節(jié)或負調節(jié)因子參與植物的防衛(wèi)反應。目前,棉花（Gossypium spp.）抗病相關WRKY轉錄因子的抗病作用機制的研究相對較少。本論文針對兩個作用相反的WRKY基因GhWRKY48和GhWRKY33的抗病功能進行鑒定和分析,初步闡明了它們協(xié)調棉花對黃萎病抗性的分子機制,取得的主要研究結果如下:1.從陸地棉（Gossypium hirsutum L.）品種“中棉所35”中克隆分離了兩個WRKY轉錄因子基因,分別命名為GhWRKY48和GhWRKY33。GhWRKY48編碼序列全長為882 bp,編碼293個氨基酸殘基,預測分子量和等電點分別為32.68KDa和6.10;GhWRKY33編碼序列全長為1533 bp,編碼510個氨基酸殘基,預測分子量和等電點分別為55.94 KDa和7.15。用實時熒光定量聚合酶鏈式反應（Quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR）分析組織特異性表達,結果表明GhWRKY4...
【文章來源】：甘肅農業(yè)大學甘肅省
【文章頁數】：61 頁
【學位級別】：碩士
【部分圖文】：
棉花根、莖和葉總RNA瓊脂糖凝膠電泳圖
24圖 2 GhWRKY48 基因的 PCR 產物、編碼序列、推導的氨基酸序列和系統(tǒng)進化樹分析Fig.2 PCR amplification, coding sequence and deduced amino acids of GhWRKY48 andphylogenetic tree analysis of WRKY48 from cotton and other plant speciesA. GhWRKY48 基因的 PCR 擴增產物；B. GhWRKY48 編碼序列及推導的氨基酸序列；翻譯起始密碼子（ATG）與翻譯終止密碼子（TAG）分別用藍色和紫色標記；C. GhWRKY48 蛋白與其它植物 WRKY48 蛋白的系統(tǒng)進化樹分析A．PCR amplification of GhWRKY48 gene; B. Coding sequence and deduced amino acids ofGhWRKY48; The translation start codon (ATG) and stop codon (TAG) were marked in blue andpurple, respectively; C. Phylogenetic tree analysis on GhWRKY48 protein and WRKY48 proteinof other plants.在 NCBI 中，針對 WRKY48 蛋白進行搜索，主要獲得 4 種植物 WRKY48的氨基酸序列：擬南芥 AtWRKY48 (Arabidopsis thaliana，NP_199763.1)、白菜BrWRKY48 (Brassica rapa，P_001288867.1)、大豆 GmWRKY48 (Glycine max，NP_001237221.2)、煙草 NaWRKY48 (Nicotiana attenuata，XP_019262610.1)。并
將它們與棉花 GhWRKY48 構建系統(tǒng)進化樹，由圖 2C 可以看出，GhWRKY48 與煙草 WRKY48 蛋白具有較近的親緣關系。3.1.3 GhWRKY48 基因組織和激素處理表達分析提取棉花根、莖和葉的總 RNA，反轉錄成 cDNA，用 qRT-PCR 方法檢測GhWRKY48 在這些組織中的表達情況，結果表明其在根、莖和葉中均表達，莖中為優(yōu)勢表達（圖 3A）。利用 qRT-PCR 檢測 SA 和 JA 對 GhWRKY48 轉錄水平的影響，結果表明 SA和 JA 均能誘導 GhWRKY48 表達。JA 處理后，在 1.5 h GhWRKY48 表達量達到最大，但在 3 h 表達量為最低，12 h 表達量達到第二個高峰值，總體呈現雙峰趨勢（圖 3B）。SA 處理后，也是在 1.5 h GhWRKY48 表達量達到最大值，此后逐漸下降，除了 12 h 表達量小于對照，其它時間點的表達量均明顯高于對照（圖 3C）。結果說明 GhWRKY48 基因對這兩種激素都存在著應答響應。
【參考文獻】：
期刊論文
[1]棉花冠菌素不敏感因子GhCOI1基因分離和對大麗輪枝菌的抗性分析[J]. 范強,王樂,謝彩玲,張寧,司懷軍,吳家和. 華北農學報. 2017(01)
[2]棉花黃萎病研究進展[J]. 林玲,張昕,鄧晟. 棉花學報. 2014(03)
[3]不同棉花品種抗黃萎病性與其組織結構的關系[J]. 麥吾蘭江·麥麥提,顧愛星,曲延英,孜拉吉古麗·庫地熱提,李丹. 新疆農業(yè)科學. 2013(11)
[4]棉花黃萎病菌的侵染過程[J]. 趙鳳軒,戴小楓. 基因組學與應用生物學. 2009(04)
[5]高品質抗黃萎病棉花新種質的培育[J]. 肖松華,劉劍光,吳巧娟,林玲,狄佳春,許乃銀,陳旭升. 中國棉花. 2007(01)
[6]陸地棉植株組織結構和生化代謝與黃萎病抗性的關系[J]. 蔣玉蓉,房衛(wèi)平,祝水金,季道藩. 作物學報. 2005(03)
[7]棉花黃萎病菌分泌的糖蛋白毒素與其致病力的關系[J]. 甘莉,呂金殿,汪沛洪. 中國農業(yè)科學. 1995(02)
[8]棉花黃萎病病葉解剖[J]. 李正理,李榮敖. Journal of Integrative Plant Biology. 1980(01)
碩士論文
[1]miR164-GhNAC100和GhWRKY22參與棉花抗黃萎病的機制分析[D]. 雷煜.甘肅農業(yè)大學 2018
本文編號：2934423
【文章來源】：甘肅農業(yè)大學甘肅省
【文章頁數】：61 頁
【學位級別】：碩士
【部分圖文】：
棉花根、莖和葉總RNA瓊脂糖凝膠電泳圖
24圖 2 GhWRKY48 基因的 PCR 產物、編碼序列、推導的氨基酸序列和系統(tǒng)進化樹分析Fig.2 PCR amplification, coding sequence and deduced amino acids of GhWRKY48 andphylogenetic tree analysis of WRKY48 from cotton and other plant speciesA. GhWRKY48 基因的 PCR 擴增產物；B. GhWRKY48 編碼序列及推導的氨基酸序列；翻譯起始密碼子（ATG）與翻譯終止密碼子（TAG）分別用藍色和紫色標記；C. GhWRKY48 蛋白與其它植物 WRKY48 蛋白的系統(tǒng)進化樹分析A．PCR amplification of GhWRKY48 gene; B. Coding sequence and deduced amino acids ofGhWRKY48; The translation start codon (ATG) and stop codon (TAG) were marked in blue andpurple, respectively; C. Phylogenetic tree analysis on GhWRKY48 protein and WRKY48 proteinof other plants.在 NCBI 中，針對 WRKY48 蛋白進行搜索，主要獲得 4 種植物 WRKY48的氨基酸序列：擬南芥 AtWRKY48 (Arabidopsis thaliana，NP_199763.1)、白菜BrWRKY48 (Brassica rapa，P_001288867.1)、大豆 GmWRKY48 (Glycine max，NP_001237221.2)、煙草 NaWRKY48 (Nicotiana attenuata，XP_019262610.1)。并
將它們與棉花 GhWRKY48 構建系統(tǒng)進化樹，由圖 2C 可以看出，GhWRKY48 與煙草 WRKY48 蛋白具有較近的親緣關系。3.1.3 GhWRKY48 基因組織和激素處理表達分析提取棉花根、莖和葉的總 RNA，反轉錄成 cDNA，用 qRT-PCR 方法檢測GhWRKY48 在這些組織中的表達情況，結果表明其在根、莖和葉中均表達，莖中為優(yōu)勢表達（圖 3A）。利用 qRT-PCR 檢測 SA 和 JA 對 GhWRKY48 轉錄水平的影響，結果表明 SA和 JA 均能誘導 GhWRKY48 表達。JA 處理后，在 1.5 h GhWRKY48 表達量達到最大，但在 3 h 表達量為最低，12 h 表達量達到第二個高峰值，總體呈現雙峰趨勢（圖 3B）。SA 處理后，也是在 1.5 h GhWRKY48 表達量達到最大值，此后逐漸下降，除了 12 h 表達量小于對照，其它時間點的表達量均明顯高于對照（圖 3C）。結果說明 GhWRKY48 基因對這兩種激素都存在著應答響應。
【參考文獻】：
期刊論文
[1]棉花冠菌素不敏感因子GhCOI1基因分離和對大麗輪枝菌的抗性分析[J]. 范強,王樂,謝彩玲,張寧,司懷軍,吳家和. 華北農學報. 2017(01)
[2]棉花黃萎病研究進展[J]. 林玲,張昕,鄧晟. 棉花學報. 2014(03)
[3]不同棉花品種抗黃萎病性與其組織結構的關系[J]. 麥吾蘭江·麥麥提,顧愛星,曲延英,孜拉吉古麗·庫地熱提,李丹. 新疆農業(yè)科學. 2013(11)
[4]棉花黃萎病菌的侵染過程[J]. 趙鳳軒,戴小楓. 基因組學與應用生物學. 2009(04)
[5]高品質抗黃萎病棉花新種質的培育[J]. 肖松華,劉劍光,吳巧娟,林玲,狄佳春,許乃銀,陳旭升. 中國棉花. 2007(01)
[6]陸地棉植株組織結構和生化代謝與黃萎病抗性的關系[J]. 蔣玉蓉,房衛(wèi)平,祝水金,季道藩. 作物學報. 2005(03)
[7]棉花黃萎病菌分泌的糖蛋白毒素與其致病力的關系[J]. 甘莉,呂金殿,汪沛洪. 中國農業(yè)科學. 1995(02)
[8]棉花黃萎病病葉解剖[J]. 李正理,李榮敖. Journal of Integrative Plant Biology. 1980(01)
碩士論文
[1]miR164-GhNAC100和GhWRKY22參與棉花抗黃萎病的機制分析[D]. 雷煜.甘肅農業(yè)大學 2018
本文編號：2934423
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