家蠶2齡不眠蠶突變關鍵基因的功能分析
發(fā)布時間：2020-12-08 12:31
家蠶（Bombyx mori）是一種重要的經濟昆蟲,屬于鱗翅目完全變態(tài)昆蟲,常作為鱗翅目昆蟲的模式生物用于相關基礎研究。家蠶入眠蛻皮是其生長、發(fā)育、變態(tài)的重要生理過程之一,是在其長期進化中形成的遺傳特性。本課題研究對象是一種2齡不眠蠶(non-molting in the 2nd instar,nm2)突變體,突變體大多數表現為2齡末期不入眠、不蛻皮、極少進食,維持此狀態(tài)一周左右后相繼死亡。前期研究已經確定BmCPG10是引起nm2突變的主效基因。本研究在前期的研究基礎上,利用CRISPR/Cas9技術、數字基因表達譜（Digital Gene Expression,DGE）以及雙向電泳技術對BmCPG10基因及相關基因的功能進行更為系統(tǒng)、詳細的分析,以闡述該突變體發(fā)生的分子機制。主要研究結果如下:第一,利用CRISPR/Cas9編輯技術對BmCPG10基因的功能進行分析。在BmCPG10基因的1號外顯子上選取合適的靶位點體外合成sgRNA,與Cas9蛋白混合注射到家蠶的早期胚胎中,經檢測,有2頭蠶在靶位點均出現4個堿基的缺失,其中一頭蠶在2齡末期死亡,另一頭為雄...
【文章來源】：江蘇科技大學江蘇省
【文章頁數】：92 頁
【學位級別】：碩士
【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略詞
第1章 緒論
1.1 選題背景和選題意義
1.2 昆蟲眠性的調控
1.2.1 蛻皮激素相關基因對眠性的影響
1.2.2 保幼激素相關基因對眠性的影響
1.2.3 神經肽基因對眠性的影響
1.3 主要研究內容
1.3.1 CRISPR/Cas9 技術編輯Bm CPG10 基因
1.3.2 數字基因表達譜DGE分析差異基因
1.3.3 前胸腺中差異蛋白的2-DE分析
1.4 技術路線圖
第2章 基于CRISPR/Cas9 技術分析Bm CPG10 基因的功能
2.1 前言
2.2 材料與方法
2.2.1 實驗材料
2.2.2 實驗儀器
2.2.3 實驗試劑
2.2.4 實驗方法
2.3 結果與分析
2.3.1 CRISPR/Cas9 系統(tǒng)瞬時表達載體構建
2.3.2 細胞水平檢測驗證編輯情況
2.3.3 家蠶個體水平驗證編輯情況
2.3.4 BmCPG10 在編輯蠶中的上調表達
2.4 討論
2.5 小結
第3章 家蠶突變體nm2 將眠期頭部的DGE分析
3.1 前言
3.2 材料與方法
3.2.1 實驗材料
3.2.2 實驗儀器
3.2.3 實驗試劑
3.2.4 實驗方法
3.2.5 實驗引物
3.3 結果與分析
3.3.1 DGE數據基本情況
3.3.2 DGE數據分析
3.3.3 差異表達基因分析
3.3.4 qRT-PCR驗證測序數據準確性
3.3.5 Bm CPG10在nm2 中上調表達
3.3.6 DGE部分差異表達基因分析
3.3.7 保幼激素合成相關差異表達基因分析
3.3.8 蛻皮激素合成相關差異表達基因分析
3.3.9 幾丁質合成相關差異表達基因分析
3.3.10 表皮蛋白基因差異表達分析
3.3.11 核受體基因差異表達分析
3.4 討論
3.5 小結
第4章 家蠶表皮蛋白Bm CPR41在nm2 中顯著上調表達
4.1 前言
4.2 材料與方法
4.2.1 實驗材料
4.2.2 實驗儀器
4.2.3 實驗試劑及溶液配制
4.2.4 實驗方法
4.2.5 實驗引物
4.3 結果與分析
W的2-DE分析"> 4.3.1 野生型及nm2 突變體家蠶PGW的2-DE分析
4.3.2 表達差異蛋白點的質譜鑒定
4.3.3 Bm CPR41 基因在nm2 突變體和野生型家蠶中轉錄水平的表達差異
4.3.4 Bm CPR41 基因的組織表達譜
4.3.5 Bm CPR41 在編輯蠶中的表達情況
4.3.6 BmCP-like在編輯蠶中的表達情況
4.4 討論
4.5 小結
結論
參考文獻
攻讀碩士學位期間發(fā)表的學術論文
致謝
【參考文獻】：
期刊論文
[1]CRISPR/Cas9介導的基因組編輯技術及應用研究進展[J]. 孫玉章,孫明軍,代永聯,尹仁福,丁壯. 中國動物檢疫. 2016(12)
[2]家蠶2齡不眠蠶突變體的發(fā)現及遺傳特性分析[J]. 趙巧玲,吳凡,夏定國,裘智勇,沈興家. 蠶業(yè)科學. 2015(03)
[3]家蠶二化性品種(品系)轉基因用蠶卵的預處理技術研究[J]. 唐順明,沈興家,趙巧玲,章揚,張國政,郭錫杰. 蠶業(yè)科學. 2009(04)
[4]昆蟲蛻皮的激素調控網絡[J]. 郭恩恩,李勝,曹陽. 蠶業(yè)科學. 2008(02)
[5]昆蟲蛻皮的分子機理及應用[J]. 趙小凡. 昆蟲知識. 2007(03)
[6]動物體內膽固醇的生物合成[J]. М.И.Прохора,С.Ю.Туманоа,顧煥斌. 生理科學進展. 1965(02)
博士論文
[1]家蠶新突變體二齡不眠蠶基因的定位克隆及功能研究[D]. 吳凡.江蘇科技大學 2016
[2]桔小實蠅幾丁質和保幼激素合成與代謝中重要基因的研究[D]. 楊文佳.西南大學 2014
碩士論文
[1]家蠶PTTH基因轉錄調控及相關神經肽的發(fā)育表達[D]. 于淼.合肥工業(yè)大學 2010
本文編號：2905088
【文章來源】：江蘇科技大學江蘇省
【文章頁數】：92 頁
【學位級別】：碩士
【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略詞
第1章 緒論
1.1 選題背景和選題意義
1.2 昆蟲眠性的調控
1.2.1 蛻皮激素相關基因對眠性的影響
1.2.2 保幼激素相關基因對眠性的影響
1.2.3 神經肽基因對眠性的影響
1.3 主要研究內容
1.3.1 CRISPR/Cas9 技術編輯Bm CPG10 基因
1.3.2 數字基因表達譜DGE分析差異基因
1.3.3 前胸腺中差異蛋白的2-DE分析
1.4 技術路線圖
第2章 基于CRISPR/Cas9 技術分析Bm CPG10 基因的功能
2.1 前言
2.2 材料與方法
2.2.1 實驗材料
2.2.2 實驗儀器
2.2.3 實驗試劑
2.2.4 實驗方法
2.3 結果與分析
2.3.1 CRISPR/Cas9 系統(tǒng)瞬時表達載體構建
2.3.2 細胞水平檢測驗證編輯情況
2.3.3 家蠶個體水平驗證編輯情況
2.3.4 BmCPG10 在編輯蠶中的上調表達
2.4 討論
2.5 小結
第3章 家蠶突變體nm2 將眠期頭部的DGE分析
3.1 前言
3.2 材料與方法
3.2.1 實驗材料
3.2.2 實驗儀器
3.2.3 實驗試劑
3.2.4 實驗方法
3.2.5 實驗引物
3.3 結果與分析
3.3.1 DGE數據基本情況
3.3.2 DGE數據分析
3.3.3 差異表達基因分析
3.3.4 qRT-PCR驗證測序數據準確性
3.3.5 Bm CPG10在nm2 中上調表達
3.3.6 DGE部分差異表達基因分析
3.3.7 保幼激素合成相關差異表達基因分析
3.3.8 蛻皮激素合成相關差異表達基因分析
3.3.9 幾丁質合成相關差異表達基因分析
3.3.10 表皮蛋白基因差異表達分析
3.3.11 核受體基因差異表達分析
3.4 討論
3.5 小結
第4章 家蠶表皮蛋白Bm CPR41在nm2 中顯著上調表達
4.1 前言
4.2 材料與方法
4.2.1 實驗材料
4.2.2 實驗儀器
4.2.3 實驗試劑及溶液配制
4.2.4 實驗方法
4.2.5 實驗引物
4.3 結果與分析
W的2-DE分析"> 4.3.1 野生型及nm2 突變體家蠶PGW的2-DE分析
4.3.2 表達差異蛋白點的質譜鑒定
4.3.3 Bm CPR41 基因在nm2 突變體和野生型家蠶中轉錄水平的表達差異
4.3.4 Bm CPR41 基因的組織表達譜
4.3.5 Bm CPR41 在編輯蠶中的表達情況
4.3.6 BmCP-like在編輯蠶中的表達情況
4.4 討論
4.5 小結
結論
參考文獻
攻讀碩士學位期間發(fā)表的學術論文
致謝
【參考文獻】：
期刊論文
[1]CRISPR/Cas9介導的基因組編輯技術及應用研究進展[J]. 孫玉章,孫明軍,代永聯,尹仁福,丁壯. 中國動物檢疫. 2016(12)
[2]家蠶2齡不眠蠶突變體的發(fā)現及遺傳特性分析[J]. 趙巧玲,吳凡,夏定國,裘智勇,沈興家. 蠶業(yè)科學. 2015(03)
[3]家蠶二化性品種(品系)轉基因用蠶卵的預處理技術研究[J]. 唐順明,沈興家,趙巧玲,章揚,張國政,郭錫杰. 蠶業(yè)科學. 2009(04)
[4]昆蟲蛻皮的激素調控網絡[J]. 郭恩恩,李勝,曹陽. 蠶業(yè)科學. 2008(02)
[5]昆蟲蛻皮的分子機理及應用[J]. 趙小凡. 昆蟲知識. 2007(03)
[6]動物體內膽固醇的生物合成[J]. М.И.Прохора,С.Ю.Туманоа,顧煥斌. 生理科學進展. 1965(02)
博士論文
[1]家蠶新突變體二齡不眠蠶基因的定位克隆及功能研究[D]. 吳凡.江蘇科技大學 2016
[2]桔小實蠅幾丁質和保幼激素合成與代謝中重要基因的研究[D]. 楊文佳.西南大學 2014
碩士論文
[1]家蠶PTTH基因轉錄調控及相關神經肽的發(fā)育表達[D]. 于淼.合肥工業(yè)大學 2010
本文編號：2905088
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