柑橘綠霉病是引起柑橘產(chǎn)后損失的主要病害之一,每年對我國的柑橘產(chǎn)業(yè)造成巨大的經(jīng)濟損失。由于化學殺菌劑的大量使用,導致指狀青霉產(chǎn)生抗藥性,導致防控效果減弱,植物源天然活性物質(zhì)可克服上述缺陷,具備應用于果蔬采后病害防控的潛力。安托芬是一種植物源生物堿,廣泛存在于蘿藦科植物例如白薇中,可抑制多種病原真菌、細菌的生長,本研究擬分析安托芬對指狀青霉抑霉唑敏感菌株Pds01和抑霉唑抗性菌株Pdw03的抑制效果,比較安托芬對兩種菌株抑菌機理的差異,為柑橘采后病害控制提供理論依據(jù),主要研究結果如下:(1)安托芬對柑橘綠霉病的抑制作用探究安托芬處理對指狀青霉Pds01、Pdw03菌株均有較好的抑制效果,對指狀青霉Pds01、Pdw03菌株的最小抑菌濃度(Minimum Inhibitory Concentration,MIC)均為1.5625μg/mL,最小殺菌濃度(Minimum Fungicidal Concentration,MFC)均為12.5μg/mL。柑橘活體實驗結果表明,1×、10×MFC安托芬浸泡處理均可有效降低由指狀青霉Pds01、Pdw03菌株引起的綠霉病發(fā)病率。接種指狀青霉Pds01菌株的對照組果實腐爛率為100%時,1×、10×MFC安托芬處理組的果實發(fā)病率分別為91±4%和27±1%;接種指狀青霉Pdw03菌株的對照組果實腐爛率達100±0%時,1×、10×MFC安托芬處理組的果實發(fā)病率分別為93±0%、和11±4%。掃描電鏡(SEM)結果顯示,1/2 MIC、MIC安托芬處理120 min后,指狀青霉Pds01、Pdw03菌株菌絲體表面出現(xiàn)粗糙,褶皺,甚至破損現(xiàn)象。(2)安托芬對指狀青霉Pds01、Pdw03菌株抑菌機理的探究CFW細胞壁熒光染色實驗顯示,安托芬未損傷指狀青霉Pds01菌株的細胞壁;PI染色實驗結果表明安托芬處理破壞指狀青霉Pds01菌株的細胞膜;處理30 min時,菌絲體的膜結構物質(zhì)脂質(zhì)和麥角固醇含量降低,暗示細胞膜結構受損;但菌絲體胞內(nèi)丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)的含量不變,表明安托芬不能誘導指狀青霉Pds01發(fā)生膜脂過氧化反應;安托芬處理導致指狀青霉Pds01菌株的線粒體膜電位(MMP)降低,暗示此時線粒體功能已受損;此外,30 min時,1/2 MIC和MIC安托芬處理組的胞內(nèi)ATP含量均為2.39±0.13μg/g,顯著低于對照組5.22±0.45μg/g(P0.05),說明安托芬處理導致指狀青霉Pds01菌株的能量代謝失衡;安托芬處理組的溶解氧下降速率減緩表明菌絲體的呼吸代謝受到抑制。與三種典型抑制劑的疊加率表明,安托芬可能影響指狀青霉Pds01菌株的三羧酸循環(huán)途徑;進一步探究發(fā)現(xiàn)細胞膜損傷發(fā)生在30 min之后而線粒體膜損傷發(fā)生在20 min,說明細胞膜的損傷晚于線粒體膜損傷。CFW細胞壁熒光染色實驗證明安托芬未損傷指狀青霉Pdw03菌株的細胞壁;PI染色實驗結果表明安托芬處理破壞指狀青霉Pdw03菌株的細胞膜;而處理30min時,菌絲體的膜結構物質(zhì)脂質(zhì)含量降低而麥角固醇含量不變,說明可能麥角固醇合成途徑不受損;但菌絲體胞內(nèi)丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)的含量急劇增加,表明安托芬誘導指狀青霉Pdw0發(fā)生膜脂過氧化反應;安托芬處理30min后,指狀青霉Pdw03菌株的線粒體膜電位(MMP)降低,表明此時線粒體功能已受損;且安托芬處理組胞內(nèi)ATP含量降低,總能荷降低,說明安托芬處理導致指狀青霉Pdw03菌株能量代謝失衡;進一步探究發(fā)現(xiàn)細胞膜損傷發(fā)生在20 min時,而線粒體膜損傷發(fā)生在30 min后,說明細胞膜的損傷早于線粒體膜損傷。綜上所述,安托芬對指狀青霉Pds01和Pdw03菌株均有很好的抑制作用,但抑菌機理有差異。指狀青霉Pds01菌株的線粒體膜損傷在前,細胞膜損傷在后,而Pdw03菌株相反。本研究可為柑橘采后綠霉病的防控提供理論依據(jù)。
【學位單位】：湘潭大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：S436.66;S476
【部分圖文】：

2圖 1-2 指狀青霉 Pds01 菌落形態(tài)的防治主要采用化學防治。抑霉唑-脫甲基酶抑制劑類殺菌劑，通過特的活性發(fā)揮抑菌作用。但是，由于化。前人的研究表明，指狀青霉對 3 種：（1）IMZ-R1 型，其 CYP51復插入突變[10]；（2）IMZ-R2 型，變[11]；（3）IMZ-R3 型，其 CYP51B

圖 1-2 指狀青霉 Pdw03 菌落形態(tài)控措施采后病害的手段包括三種：化學防制綠霉病最主要的方法，由于化學多數(shù)國家廣泛使用。常用的化學殺并咪唑類、雙胍鹽類和唑類（抑霉用于整果浸泡或者表面噴灑，對果劑對人類健康、環(huán)境也會產(chǎn)生危害環(huán)保的殺菌劑。

圖 2-3 安托芬處理對接種指狀青霉 Pds01 菌株柑橘果實綠霉病發(fā)病情況的影響柑橘果實接種指狀青霉 Pds01 菌株后，安托芬處理對綠霉病發(fā)病率的影響見表 2-5。結果表明安托芬能顯著降低柑橘果實綠霉病的發(fā)病率。對照組和 1 × MFC安托芬處理組果實均在第 3 d 開始腐爛，腐爛率分別為 33±4%和 13±4%，而 10 ×MFC 安托芬處理組果實從第 4 d 開始腐爛，腐爛率為 9±4%。當貯藏時間達到 5 d時，對照組的腐爛率達 100±0%，且整果腐爛，而 10 × MFC 安托芬處理組的腐爛率僅為 27±1%。表 2-5 安托芬處理對柑橘果實綠霉�。ㄖ笭钋嗝� Pds01）發(fā)病率的影響處理方式發(fā)病率（%）貯藏時間 (d)1 2 3 4 5對照組 0±0a0±0a33±4a87±2a100±0a
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本文編號：2880884