毛茛科植物烏頭(Aconitum carmichaelii Debx.)在四川栽培面積廣,在道地產(chǎn)區(qū)江油有超過1300多年的栽培歷史。附子為烏頭的子根加工品,有回陽救逆、補(bǔ)火助陽等功效;川烏是其干燥母根,具有祛風(fēng)除濕,溫經(jīng)止痛等功效。在烏頭栽培過程中,霜霉病是對其產(chǎn)量和質(zhì)量影響較大的病害之一,具有發(fā)病率高,季節(jié)性強(qiáng),難以防治等特點(diǎn),其病原菌為烏頭霜霉(Peronospora aconiti Yu),屬霜霉科(Peronosporaceae)霜霉屬(Peronospora)真菌,該病原菌屬于專性寄生菌。在自然界,病原菌與寄主植物互作是普遍存在的現(xiàn)象。當(dāng)植物遭受病害脅迫時,植物體為了抵御病原體而產(chǎn)生防御反應(yīng),由此產(chǎn)生系列生理生化變化,以應(yīng)對病害脅迫。而植物的系列生理生化的變化,能影響其根際土及其內(nèi)生微生物群落的組成及相關(guān)功能。為了探索烏頭霜霉與烏頭植株互作對烏頭生理生化及內(nèi)生和根際放線菌菌群的影響,本實(shí)驗(yàn)在系統(tǒng)測定烏頭霜霉病病原菌生物學(xué)特性基礎(chǔ)上,對烏頭植株感病前后不同的生理生化變化以及根際和內(nèi)生放線菌多樣性和群落結(jié)構(gòu)變化進(jìn)行了研究,為進(jìn)一步研究烏頭霜霉病奠定基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下:1.初步明確了烏頭霜霉孢子囊的萌發(fā)條件烏頭霜霉孢子囊以形成芽管的方式萌發(fā),4~25℃范圍內(nèi)孢子囊均可萌發(fā),18℃時萌發(fā)率最高;相對濕度低于95%時,烏頭霜霉孢子囊不萌發(fā),相對濕度100%條件下孢子囊萌發(fā)率最高;pH 5.74~8.06范圍內(nèi)烏頭霜霉孢子囊均可萌發(fā),pH值為5.93時孢子囊萌發(fā)率高于其他條件,但整體萌發(fā)率均較低;在葡萄糖、蔗糖、可溶性淀粉、甘油四種供試碳源的處理下,烏頭霜霉孢子囊萌發(fā)均受抑制,均低于對照組蒸餾水中孢子囊萌發(fā)率;接種實(shí)驗(yàn)中烏頭葉片接種點(diǎn)呈棕褐色壞死病斑,出現(xiàn)過敏性反應(yīng)。2.研究了霜霉病脅迫下烏頭各種生理生化指標(biāo)的變化特征隨著病級的上升,烏頭葉片內(nèi)葉綠素含量不斷下降;可溶性糖含量總體呈上升—下降—上升—再下降的“M”型變化趨勢;0級烏頭葉片的SOD含量最低,病情最為嚴(yán)重的4級葉片SOD含量最高且與其他幾級差異極顯著(P(27)0.01);POD、PPO以及PAL的活性都呈升高-降低-升高的“N”形變化趨勢;而烏頭葉片內(nèi)MDA含量隨著病級的增長遞增。烏頭感染霜霉病前后,與抗病相關(guān)的生理生化指標(biāo)具有顯著差異。3.霜霉病作用下烏頭內(nèi)生和根際放線菌菌群變化特征從健康及患霜霉病烏頭根際土中,共獲得可培養(yǎng)放線菌279株,去重復(fù)后,得57株,其中10株屬于相同菌株,健康植株根際土特有的菌株有21株,患病植株根際土特有的菌株有26株;與健康烏頭相比,感染霜霉病烏頭根際土所含可培養(yǎng)放線菌數(shù)量和種類均較多。從健康與患病烏頭的母根、子根、莖和葉中,共獲得20株內(nèi)生放線菌。從患病植株中分離的內(nèi)生放線菌全為鏈霉菌屬,較為單一,而健康植株所含內(nèi)生放線菌種類較病株豐富,且健株和病株不含共同菌株。烏頭霜霉菌的侵染使得烏頭根際和內(nèi)生放線菌菌群結(jié)構(gòu)及多樣性均發(fā)生了改變。從以上71株去重復(fù)的內(nèi)生和根際土放線菌中,篩選出了對供試病原菌具較強(qiáng)拮抗活性的菌株15株。
【學(xué)位單位】：成都中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：S435.67
【部分圖文】：

體接種方法葉盤法和整葉法分別接種烏頭霜霉孢子囊懸浮液。取健康烏頭植真葉，在流動自來水下沖洗干凈葉片表面灰塵、泥土等雜質(zhì)，然后泡 30s 消毒，滅菌 ROH2O 潤洗 3 次，滅菌 ddH2O 潤洗 1 次，最干葉片表面水分[19]。葉盤法：健康葉片消毒后，取葉片靠近葉尖部位，用無菌打孔 mm 的葉盤，將葉盤放入保濕基質(zhì)中，每皿 5 個葉盤，葉背朝法接種 35μL 孢子囊懸浮液，對照組接種等量滅菌蒸餾水[20]。同用葉盤漂浮法進(jìn)行接種，在無菌培養(yǎng)皿內(nèi)注入不同濃度孢子囊懸面朝上懸浮于培養(yǎng)皿內(nèi)。整葉法：健康葉片消毒后，取整葉使其葉背朝上放入保濕基質(zhì)接孢子囊懸浮液，每點(diǎn) 5 μL，對照組接種等量滅菌 ROH2O。

圖 2- 2 孢子囊萌發(fā)情況A:密生孢子囊的孢囊梗；B、C、D:孢子囊萌發(fā)各形態(tài)Fig.2-2 The germination of sporangiaA: Cyst stalks of dense sporangia; B, C, D: germination forms of sporangia度對孢子囊萌發(fā)的影響 2-4 所示，在供試溫度范圍內(nèi)，0 ℃條件下烏頭霜霉孢子囊不可萌范圍內(nèi)孢子囊均可萌發(fā)，但 4 ℃條件下前 9 h 無孢子囊萌發(fā)。孢子度升高先增大后降低，18℃時達(dá)最大值。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，低溫或溫低孢子囊萌發(fā)能力，18 ℃時烏頭霜霉孢子囊萌發(fā)率達(dá)最高。表 2- 4 不同溫度下孢子囊萌發(fā)率（%）Tab.2-4 The germination rate of sporangia at different temperatures (%)時間(h)

圖 3- 2 蔗糖含量標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.3-2 Standard curve of sucrose content 不同霜霉病病級葉片可溶性糖含量圖 3-3 所示，隨著病級升高，烏頭葉片可溶性糖含量呈上升—下降的“M”型變化趨勢。在五個病級中，0 級的可溶性糖含量最低，為溶性糖含量最高，達(dá)到峰值，為 5.65%。通過差異性分析，與除 2 級外，1、3、4 級葉片可溶性糖含量變化呈顯著性差異（P 極顯著水平（P=0.00 0.01）；1、3、4 級間可溶性糖含量變化無)。deadababc5.006.007.00可溶性
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本文編號：2861843