由蕓薹根腫菌(Plasmdiophora brassicae Woron.)侵染引起的根腫病(Clubroot disease)是十字花科蔬菜生產(chǎn)上一種難以防治的毀滅性世界病害,主要原因之一是根腫菌具有遺傳多樣性,導(dǎo)致生理小種的分化。明確蕓薹根腫菌生理小種種類及地理分布,對根腫菌生理小種的分化監(jiān)測及抗病育種工作具有重要意義。本論文旨在建立一套簡便穩(wěn)定、適應(yīng)性廣的蕓薹根腫菌單孢分離體系,對我國不同地區(qū)蕓薹根腫菌進行單孢分離,采用Williams鑒別系統(tǒng),對獲得的蕓薹根腫菌單孢系菌株進行生理小種鑒定。主要結(jié)果如下:1.建立了一套簡便穩(wěn)定、植株成活率高、發(fā)病率高、適應(yīng)性廣的蕓薹根腫菌單孢分離體系。通過對瓊脂塊法進行改進,用瓊脂糖凝層代替常規(guī)瓊脂塊,解決了瓊脂塊法含雜質(zhì)較多,不易區(qū)分單孢的問題,確定了蕓薹根腫菌單孢分離的最佳瓊脂糖凝層濃度為1.3%;明確了單孢接種的最佳苗齡為大白菜感病品種‘菊心’在81孔盒催芽24 h,接種后最佳培養(yǎng)條件為暗培養(yǎng)24h。采用本文建立的瓊脂糖凝層法和已報道的液滴法、瓊脂塊法3種單孢分離方法進行單孢分離方法比較,表明瓊脂糖凝層法為最佳單孢分離方法,接種后菊心大白菜發(fā)病率為17.45%,發(fā)病率明顯高于液滴法和瓊脂塊法。2.利用建立的瓊脂糖凝層法對我國20個不同采集地區(qū)根腫菌菌樣進行單孢分離,分離得到蕓薹根腫菌單孢系菌株275株,擴繁并保存單孢系菌株205株。3.明確了我國8個地區(qū)蕓薹根腫菌單孢系菌株生理小種的種類及地理分布。采用Williams鑒別系統(tǒng),對獲得的40株單孢系菌株進行生理小種鑒定。鑒定出2號、4號、5號、6號、7號、8號、9號、10號、12號和14號等10個不同的生理小種種類。其中4號為優(yōu)勢小種,所在樣品菌株中出現(xiàn)的頻率為42.5%;其次共有9株單孢系為生理小種5號,所在樣品菌株中出現(xiàn)的頻率為22.5%。湖北宜昌、重慶武隆、云南昆明和四川廣元等4個高原地區(qū)的優(yōu)勢小種為生理小種4號;山東青島、河南新野和北京順義等3個平原、丘陵地區(qū)單孢系小種頻率較高的為生理小種4號和5號,對鑒別寄主的感染力和擴繁能力整體較弱。通過本論文的研究,建立了一套簡便穩(wěn)定的蕓薹根腫菌單孢分離體系,明確了我國8個地區(qū)蕓薹根腫菌生理小種種類和地理分布,為選育十字花科蔬菜抗根腫病品種、有效控制根腫病的蔓延提供了理論依據(jù)。
【學(xué)位單位】：河北北方學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：S436.3
【部分圖文】：

圖 2-1 十字花科根腫病的分級標準Fig.2-1 The classification of cruciferous clubroot disease腫病分級標準從左到右依次為 0 級，1 級，2 級，3 級，4 級。lubroot disease in the figure are 0, 1, 2, 3 and 4 from left to right.蕓薹根腫菌單孢分離方法的建立——瓊脂糖凝層法脂糖濃度的篩選對不同瓊脂糖溶液的篩選，確定雜質(zhì)較少、透明度較清晰、硬度適中、易于脂糖凝層。稱取 0.3 g、0.36 g、0.39 g、0.45 g、0.54 g 和 0.6 g 的瓊脂糖分別分別量取 30 mL 蒸餾水加入三角瓶，放于高壓滅菌鍋高壓滅菌 121℃ 30 mi1.2%、1.3%、1.5%、1.8%和 2%的瓊脂糖溶液。待溶液冷卻至 55℃左右時，不同瓊脂糖溶液中均勻蘸取一層。述試驗內(nèi)容 2.2.2.1 制備根腫菌孢懸液，利用血球計數(shù)板將云南省昆明市云南懸液調(diào)整到理論值為 5×103個孢子·mL-1。待蘸取的瓊脂糖溶液薄層凝固后，懸液各 5 μL，均勻涂布于各瓊脂糖凝層。在顯微鏡下觀察，用手術(shù)刀切取約眠孢子的瓊脂糖凝層。此過程需快速完成，不可將瓊脂糖薄層風干。?

河北北方學(xué)院碩士學(xué)位論文 第二章 材料與方法復(fù)分別接種 4 個鑒別寄主（JQ、BS、LT、WB）各 10 株甘藍幼苗，避免不同單孢系菌株之間相互感染，同時以感病品種‘菊心’作為對照，55 d 后調(diào)查并記錄各個寄主發(fā)病情況，統(tǒng)計根腫病的發(fā)病率及病情指數(shù)并對結(jié)果進行分析，調(diào)查方法及病情分級同 2.2.1.1。?病情指數(shù)≥10 為感�。�+），病情指數(shù)＜10 為抗�。�-）。

0.90 60 透明度適中、質(zhì)地適中、1.08 60 透明度一般、質(zhì)地較硬、瓊1.20 60 透明度差、質(zhì)地太硬、瓊度瓊脂糖凝塊對根腫菌休眠孢子活力影響差異不顯著（表 3-3，2-PI 雙熒光復(fù)染法對瓊脂糖塊處理后的根腫菌孢懸液進行染色觀察發(fā)菌孢子活性是無影響，可供后期試驗。表 3-3 不同瓊脂糖濃度對根腫菌休眠孢子活力影響Table 3-3 Effect of different agarose concentration to P. brassicae resting spores vit濃度（m/v）Concentration平均活孢子率（%）Live spores rates1% 97.431.2% 97.781.3% 98.381.5% 98.241.8% 98.382.0% 98.29對照孢子 98.37
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本文編號：2852706