竹肉球內(nèi)生菌又名戈茨肉球菌,是中國傳統(tǒng)中藥,僅在非洲和亞洲有所發(fā)現(xiàn),在中國,主要分布在川東,藏北,云南西北部等海拔較高的地區(qū)。作為中國長期以來的民間傳承的抗菌消炎藥,近年來又在抗癌方面嶄露頭角,但對其化學(xué)成分進行的研究報道卻很少,因此對其含有的生物活性物質(zhì)的研究與開發(fā),具有非常重要的意義。本論文通過鹽析法對竹肉球內(nèi)生菌進行浸提,離心,沉淀,最后通過凍干的方法得到竹肉球內(nèi)生菌(Engleromyces goetzei P.Hennings)的粗提物,并進行對該粗提物的抑菌活性試驗,結(jié)果表明該粗提物對農(nóng)業(yè)致病真菌的菌絲生長均有不同程度的抑制作用。再經(jīng)分子篩G-25凝膠柱純化后得到的產(chǎn)物,經(jīng)茚三酮和雙縮脲定性反應(yīng)證明該產(chǎn)物為粗多肽,采用濾紙片法和平板對峙法,以抑菌圈為指標進行抑菌活性檢測,結(jié)果表明對農(nóng)業(yè)致病真菌的菌絲生長均有不同程度的抑制作用,其中,對小麥赤霉病菌(Gibberella zeae),核果炭疽病菌(Drupe anthrax)和茄子黃萎病菌(Verticilllium albo-atrum)的抑菌活性最高,IC_(50)分別為8.65μg/m L,9.48μg/m L和8.94μg/m L。并讓抗菌肽在酸堿,高溫,酶解和有機溶劑環(huán)境下對其穩(wěn)定性進行研究,結(jié)果表明除了有一定的溶劑選擇性和α-淀粉酶,胃蛋白酶對其有一定的水解性之外,該抗菌肽具有很強的穩(wěn)定性。用HPLC對粗多肽進一步純化,得到電泳純的抗菌肽,并通過質(zhì)譜認定該抗菌肽的分子量大概在5796.0 Da。以上研究,為進一步開發(fā)和研究竹肉球內(nèi)生菌中新型的天然抗菌肽,打下了理論基礎(chǔ)。
【學(xué)位單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：TQ28;S481
【部分圖文】：

圖 2.1 粗多肽凍干樣品.2. 1 The Lyophilized Sample of Crude Polypep實驗縮脲試劑反應(yīng)為作為一種定性試驗，主要均顯陽性（在雙縮脲反應(yīng)中，反應(yīng)液變?yōu)樽仙镔|(zhì)并且 5 min 內(nèi)變色顏色未發(fā)生得到的黃色絮狀物質(zhì)為多肽類物質(zhì)且含肽對真菌的抑菌活性測定表 2.1 粗多肽的抑菌效果ab 2. 1 TheAntibacterial Effect of Crude Pepti抑菌活性無菌水土溫水甲醇丙酮

graminearum 的抑菌作用最強。2.4.3.2 竹肉球內(nèi)生菌粗多肽對細菌的抑菌活性測定如下圖2.2所示，粗多肽浸提液對Escherichia coli和Staphyloccocus aureus Rosenbach的抑菌圖，可以看出經(jīng) 30 ℃培養(yǎng)一天后觀察粗多肽浸提液紙片和無菌蒸餾水處理過的紙片，發(fā)現(xiàn)兩者都沒有明顯的抑制效果，說明該提取到的粗多肽對 Escherichia coli 和Staphyloccocus aureus Rosenbach 無明顯的抑制作用。

如圖3.1 所示：圖 3.1 凝膠過濾層析原理的示意圖Fig 3.1 The Schematic Diagram of Principle of Gel Filtration Chromatography3.3.1.2 凝膠過濾層析的純化步驟（1）柱材：根據(jù)柱型號計算稱取適量的 Sephadex G-25 干粉顆粒，將干膠顆粒用沸水水浴 2 h 除去顆粒中的空氣。然后通過酸洗和堿洗對其進行消毒處理，最后用無菌抽濾水將酸堿沖洗干凈。用蒸餾水浸泡，輕輕攪動柱材（不能出現(xiàn)氣泡）然后靜置，待柱材沉降后，傾去上層漂浮的顆粒，反復(fù) 4-6 次(Wright J G et al, 2008)。（2）層析柱：將層析柱反復(fù)清洗干凈，與烘箱中干燥備用。（3）裝柱：將層析柱固定在與地面垂直的鐵架臺上，用夾子將其下端出口封住，將處理好的柱材中的水用 2～2.5 倍柱材體積的 1.1%醋酸緩沖液代替，并輕輕攪拌成懸浮液，然后通過玻璃棒引流灌入層析柱中，打開柱的下端出口，讓柱材自然沉降，若出現(xiàn)柱材斷層和有氣泡等現(xiàn)象就必須重新裝柱。（4）平衡：通過恒流泵控制流速為 0.8 mL/min，用兩倍柱體積的 1.1%的醋酸緩沖液進行平衡。（5）上樣與洗脫：將平衡好的層析柱底端出口打開，接通紫外檢測儀，將粗多肽樣品液 1.5～2 mL 上樣

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本文編號：2833456