蜂蜜作為天然的甜味食品,素有“天然抗生素”的美譽(yù),然而近年來(lái)南方地區(qū)頻發(fā)的蜂蜜中毒事件,引起了廣大消費(fèi)者的恐慌,成為食品安全問(wèn)題中亟待解決的突出問(wèn)題。黃杜鵑和曼陀羅等有毒蜜源植物在我國(guó)分布廣泛,在大宗蜜源植物流蜜匱乏時(shí),蜜蜂易于采集其花蜜,并將有害物質(zhì)轉(zhuǎn)移并富集到蜂蜜中,形成有毒蜂蜜。木藜蘆烷類毒素和托品烷類生物堿分別作為杜鵑和曼陀羅中主要毒性成分,誤食微量便可導(dǎo)致人的中毒反應(yīng),嚴(yán)重者甚至導(dǎo)致死亡。鑒于此,本研究基于超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜開(kāi)發(fā)了蜂蜜中的木藜蘆烷類毒素及托品烷類生物堿的準(zhǔn)確定量分析方法并進(jìn)行系統(tǒng)的方法學(xué)驗(yàn)證。旨在及時(shí)有效的規(guī)避有毒蜂蜜誤食的風(fēng)險(xiǎn),保護(hù)消費(fèi)者的安全,為蜂產(chǎn)品質(zhì)量安全及風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估等提供技術(shù)支持。本研究主要分為兩個(gè)部分,第一部分建立了蜂蜜中4種木藜蘆烷類毒素(鬧羊花毒素II、鬧羊花毒素III、木藜蘆毒素I和木藜蘆毒素III)的UHPLC-MS/MS檢測(cè)方法,采用甲醇/水(20:80,v/v,含0.1%乙酸)作為提取液,0.1%乙酸-水和0.1%乙酸-甲醇作為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫。該方法的檢測(cè)限為2.0μg/kg~5.0μg/kg,定量限為5.0μg/kg~10.0μg/kg。在5.0~50.0μg/kg添加濃度范圍內(nèi),4種木藜蘆烷類毒素的平均回收率為77.94%~109.21%,日內(nèi)變異系數(shù)為4.06%~9.82%,日間變異系數(shù)為4.94%~13.11%,并采用開(kāi)發(fā)的方法對(duì)我國(guó)各地17種蜂蜜品種進(jìn)行木藜蘆烷類毒素檢測(cè)分析,結(jié)果表明我國(guó)部分蜂蜜中存在木藜蘆烷類毒素污染的風(fēng)險(xiǎn),其污染的蜜種主要集中在杜鵑蜂蜜、雜花蜂蜜以及部分野生蜂蜜中。然而,我國(guó)大宗商品蜜中未檢出該類污染物,較為安全。第二部分,本研究首先采用UHPLC-Q Exactive Plus高分辨質(zhì)譜技術(shù)對(duì)曼陀羅花蜜中的托品烷類生物堿進(jìn)行識(shí)別與鑒定,共得到4種托品烷類生物堿,即茛菪堿、東茛菪堿、山茛菪堿、去甲基山茛菪堿。為明確曼陀羅花蜜中的托品烷類生物堿是否通過(guò)蜜蜂的采集行為轉(zhuǎn)移至蜂蜜中形成有毒蜂蜜,本研究采用液相色譜串聯(lián)高分辨質(zhì)譜對(duì)蜂蜜中的托品烷類生物堿進(jìn)行檢測(cè)分析,結(jié)果表明疑似陽(yáng)性蜂蜜樣本中存在與曼陀羅花蜜中一致的4種托品烷類生物堿,其中東茛菪堿約占85.0%以上。為了探究我國(guó)蜂蜜中托品烷類生物堿污染的含量,本試驗(yàn)開(kāi)發(fā)了蜂蜜中4種托品烷類生物堿的UHPLC-MS/MS定量檢測(cè)方法。采用0.1%甲酸-水和0.1%甲酸-乙腈作為流動(dòng)相,甲醇/水(20:80,v/v)作為提取液,得到該方法的檢測(cè)限為0.05μg/kg,定量限為0.1μg/kg。在0.1~0.5μg/kg添加濃度范圍內(nèi),平均回收率為74.93%~103.42%,日內(nèi)變異系數(shù)為2.63%~10.81%,日間變異系數(shù)為3.78%~14.13%。
【學(xué)位單位】：煙臺(tái)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：S896.1;O657.63
【部分圖文】：

煙臺(tái)大學(xué)碩士學(xué)位論文本試驗(yàn)實(shí)際樣品的檢測(cè)中，待測(cè)的 17 種蜂蜜中共有 7 種蜂蜜存在不同程度的木藜蘆烷類毒素污染，即杜鵑蜂蜜，野生蜂蜜、雜花蜜、雪脂蓮蜜、柑橘蜜、石榴蜜和油菜蜜，其中杜鵑蜂蜜中木藜蘆烷類毒素含量最高，鬧羊花毒素 II 達(dá) 661.5 μg/kg，鬧羊花毒素達(dá) III 885.3 μg/kg，木藜蘆毒素 I 達(dá) 548.6 μg/kg，木藜蘆毒素 III 達(dá) 796.4μg/kg。另外，受檢的大宗商品蜜如荊條蜜、椴樹(shù)蜜、洋槐蜜、枸杞蜜和棗花蜜中均未檢出該類毒素，尚未發(fā)現(xiàn)木藜蘆毒素威脅，較為安全，如圖 2-2 所示。

煙臺(tái)大學(xué)碩士學(xué)位論文2.3.3 樣品前處理的優(yōu)化蜂蜜基質(zhì)較為黏稠，含糖量較高，當(dāng)有機(jī)溶劑比例較高時(shí)則不易完全溶解，因此最終采用 20%的有機(jī)溶劑進(jìn)行提取。文獻(xiàn)報(bào)道，酸化的有機(jī)溶劑有利于木藜蘆烷類毒素的提取，因此本文對(duì)甲醇/水（20:80，v/v）、乙腈/水（20:80，v/v）、乙酸乙酯/水(20:80，v/v)、甲醇/水 (20:80，v/v，含 0.1%乙酸)、甲醇/水 (20:80，v/v，含 0.1%甲酸)等 5 種提取劑進(jìn)行了測(cè)試，回收率如圖 2-5 所示。甲醇/水 (20:80，v/v，含 0.1%乙酸)作為提取劑時(shí)，目標(biāo)化合物表現(xiàn)出良好的回收率，目標(biāo)物的平均回收率范圍為80.1~102.5，而乙酸乙酯的共萃取物較多，具有較強(qiáng)的基質(zhì)效應(yīng)，回收率也相對(duì)較低。因此最終選擇甲醇/水 (20:80，v/v，含 0.1%乙酸)作為提取溶液。由于低溫可以有效的促進(jìn)糖和其他雜質(zhì)的沉淀，因此提取結(jié)束后采用低溫高速離心進(jìn)行凈化，降低基質(zhì)效應(yīng)，進(jìn)而提高靈敏度。

40圖 3-3 4 種托品烷類生物堿二級(jí)碎片離子質(zhì)譜圖Fig.3-3 Fragment ion mass spectrum of 4 tropane alkaloids.

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1 張靜;蜂蜜中木藜蘆烷類毒素及托品烷類生物堿液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)方法的研究[D];煙臺(tái)大學(xué);2019年

本文編號(hào)：2829327