近年來,蕓薹屬根腫病在大白菜及其他十字花科作物上發(fā)生頻繁,嚴(yán)重影響十字花科作物的產(chǎn)量和品質(zhì)。自然界中根腫菌在多種生理小種混生狀態(tài)下侵染寄主,同一來源的根腫菌中存在不同的致病型,所以利用單孢分離進(jìn)行純化和分離生理小種可能更有價值。本研究建立了一套較完善的單孢分離技術(shù)體系;利用此體系對沈陽和山東地區(qū)根腫菌進(jìn)行了單孢分離和鑒定;預(yù)測了根腫菌rDNA中ITS區(qū)域大致位置,并利用PCR技術(shù)檢測了不同生理小種之間在分子水平上的差異。具體結(jié)果如下:本研究通過優(yōu)化接菌方法、接種苗齡及植株的培養(yǎng)程序,建立了蕓薹屬根腫菌單孢分離技術(shù)體系,即采用瓊脂糖塊冷凍盒法將根腫菌單孢接種在2-3日齡幼苗的根系上,后期采用水培-基質(zhì)過度培育-土培結(jié)合的方法培育接菌植株。該體系可使根腫菌單孢侵染率達(dá)到47.8%,植株成活率達(dá)到67%。采用上述優(yōu)化后的單孢分離體系對沈陽地區(qū)和山東地區(qū)進(jìn)行單孢分離及Williams生理小種鑒定,在沈陽地區(qū)根腫菌中分離出4、8、9、11號單孢生理小種,在山東地區(qū)根腫菌中分離出1、2、4、8、9、11、13、15、16號單孢生理小種,發(fā)現(xiàn)沈陽和山東地區(qū)的優(yōu)勢生理小種均為4號單孢生理小種。比較分析了CTAB法、硅藻土法及試劑盒法3種根腫菌DNA提取方法的優(yōu)缺點的比較,同時采用菌液直接作為模板進(jìn)行PCR檢測,發(fā)現(xiàn)用試劑盒法和直接利用菌液進(jìn)行PCR檢測能更好地排除植物寄主的影響;從NCBI數(shù)據(jù)庫中搜索根腫菌序列進(jìn)行Blastn比對,并與同源性較高的其它真菌序列進(jìn)行同源分析,預(yù)測了根腫菌ITS區(qū)域的大致位置,通過PCR技術(shù)檢測不同生理小種,初步推測其在18S、ITS-1、ITS2-2區(qū)域上存在著差異。綜上所述,同一來源根腫菌確實存在著不同的生理小種,各生理小種在根腫菌在18S及ITS區(qū)域上可能存在著差異。
【學(xué)位單位】：沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：S435.654
【部分圖文】：

圖 2.1 大白菜接菌 8 d 根系被感染狀況注：A.1 日齡幼苗 B.2 日齡幼苗 C.3 日齡幼苗 D.4 日齡幼苗. 紅色箭頭表示根腫菌侵染位置Fig 2.1 The root after 8 days of inoculation by Plasmodiophora brassicaing; B. 2-day-old seedling; C. 3-day-old seedling; D. 4-day-old seedling. The red arrow indicates the iPlasmodiophora brassicae.孢接菌方法優(yōu)化腫菌單孢對植株的侵染率，本研究采用 2 日齡大白菜‘74凍盒與培養(yǎng)皿單孢接菌法對植株的侵染率的影響（表 2.2）通培養(yǎng)皿，保證單孢有充分的時間接觸根毛，提高了侵染率表 2.2 大白菜‘742’不同接菌方式侵染率對比表Table 2.2 Infection rate of different inoculation methods方式接菌總數(shù)被侵染總數(shù)

分兩批進(jìn)行無菌土培養(yǎng)和基質(zhì)過渡—無菌土培養(yǎng)，通的植株成活率增加了 1 倍以上（表 2.3），并且生長狀況種方法植株的最大葉面寬度，發(fā)現(xiàn)生長 1 周時生長情況差基質(zhì)過渡培養(yǎng)明顯優(yōu)于無菌土培養(yǎng)（圖 2.2）。表 2.3 無菌土培養(yǎng)與基質(zhì)過渡—無菌土培養(yǎng)成活率調(diào)查表Table 2.3 Survival rate of axenic culture and medium-axenic culture方法Method總數(shù)Sum成活植株數(shù)Number of living plants成Rate菌土培養(yǎng)psis culture200±2 54±3 渡-無菌土培養(yǎng)-asepsis culture200±5 134±2 值差異極顯著（P < 0.01）.ficant difference regional average at 0.01 levels，respectively（t method）.

共 13 個單孢占 32.5%，9 號生理小種只有 3 個，占 7.5%，8 號小1 個單孢，占 2.5%。對 4 個寄主進(jìn)行 Williams 鑒定分析，發(fā)現(xiàn)寄主結(jié)球甘藍(lán) 對沈陽地區(qū)的根腫抗病性較強(qiáng)（圖 2.3）。40 個單孢寄主蕪菁甘藍(lán)品種 WB， 100%發(fā)病，發(fā)病程度最重，而結(jié)球甘藍(lán) JQ 的發(fā)病率 57.5%，發(fā)病程度最輕率 90%，發(fā)病程度較重。證實沈陽地區(qū)的根腫菌對蕪菁甘藍(lán)寄主的侵染力強(qiáng)，寄主的侵染力相對較弱。表 2.4 沈陽地區(qū)根腫菌生理小種鑒定結(jié)果Table 2.4 The results of Plasmodiophora brassicae single spores in Shenyang area生理小種Race所占比例The proportion生理小種菌株號Physiological race strain number4 號 57.5% 1/2/3/7/10/11/14/15/16/24/26/27/28/20/30/31/32/33/34/36/37/38/408 號 2.5% 299 號 7.5% 4/13/1911 號 32.5% 5/6//8/9//12/17/18/20/21/22/25/35/39

【參考文獻(xiàn)】

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1 楊曉云;張淑霞;張清霞;司朝光;王媛;王殿純;;抗根腫病大白菜品種對不同地區(qū)根腫病菌的抗性鑒定[J];中國蔬菜;2015年06期

2 徐學(xué)忠;胡靖鋒;楊紅麗;田志梅;和玉春;和江明;;抗根腫病大白菜新品種CCR11242的選育[J];山東農(nóng)業(yè)科學(xué);2015年05期

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5 譚

本文編號：2829257