由大豆疫霉(Phytophthora sojae)引起的大豆疫病是大豆生產中的毀滅性病害。生產上用甲霜靈防治大豆疫病時出現了抗藥性,同種類型的高效殺菌劑苯霜靈田間應用較少。另外,氟吡菌胺是目前開發(fā)的抑菌結構新穎的苯甲酰胺類殺菌劑,國內外均有對辣椒疫霉的相關研究,在大豆疫霉上未見報道。因此,本研究主要從大豆疫霉對兩種殺菌劑的抗藥性風險評價、抗藥性生理生化機制、以及有效的植物提取物篩選等幾個方面來開展研究。研究的主要結果如下:1、通過有性生殖+紫外誘變獲得9株氟吡菌胺抗性菌株,突變頻率為2.25%,抗性水平在502.9~1063.3倍之間。通過有性生殖+藥劑選擇獲得6株苯霜靈抗性菌株,突變頻率為2%,抗性水平分別在52.0~97.2倍之間。在相關抗性突變體中,氟吡菌胺抗性菌株F6-1、F6-3、F6-4、F7-1、F7-2、F7-4可以穩(wěn)定遺傳,雖然其菌絲生長、產孢子囊能力、產卵孢子能力都低于親本,但其仍然有強的致病力和產孢能力;苯霜靈抗性菌株B6-4、B6-5、B6-7可以穩(wěn)定遺傳,且菌絲生長速率顯著高于親本,但其孢子囊產量、卵孢子產量以及致病力都顯著低于親本,但仍然有致病力和產孢能力。另外,交互抗性的結果表明,抗氟吡菌胺菌株與霜脲氰、甲霜靈、叮吡嗎啉、醚菌酯之間不存在交互抗性;抗苯霜靈菌株與氟吡菌、丁吡嗎啉、醚菌酯之間不存在交互抗性,但苯霜靈與霜脲氰存在正交互抗性。因此,大豆疫霉對氟吡菌胺和苯霜靈都具有一定的抗性風險,所以生產上使用氟吡菌胺或是苯霜靈時應注意與不存在交互抗性的藥劑交替使用或是混用。2、通過測定大豆疫霉抗氟吡菌胺和苯霜靈突變體以及親本菌株的生理生化性狀,結果表明,抗藥性突變體和親本菌株在含有較高濃度的葡萄糖和NaCl的培養(yǎng)基上菌絲生長受到抑制。在沒有殺菌劑處理的條件下,氟吡菌胺抗性菌株的滲透性低于親本菌株,而苯霜靈抗性菌株的滲透性則顯著高于親本菌株。隨著氟吡菌胺和苯霜靈處理時間的延長,抗藥性突變體和親本菌株的β-1,3葡聚糖酶活力均呈下降趨勢。在不同的處理時間段里發(fā)現苯霜靈抗性菌株的可溶性蛋白含量都顯著低于親本菌株。而氟吡菌胺抗性菌株的可溶性蛋白含量和親本沒有顯著的規(guī)律。3、采用Biolog表型芯片技術,測定了大豆疫霉氟吡菌胺抗性菌株及其親本菌株對PM1和PM3微孔板的碳氮源物質利用情況。結果表明:抗性菌株和親本菌株均能利用PM1中的95種碳源物質和PM3中的95種氮源物質。在PM1微孔板中抗性突變菌株F7-2對碳源物質的利用率明顯高于親本菌株P7076。而在PM3微孔板中,F7-2對碳源物質的利用率明顯低于親本菌株P7076。4、通過測定大豆疫霉親本菌株及抗性菌株對多種植物提取物的敏感性,結果發(fā)現,和厚樸酚、5,5-二烯丙基-2,2’二苯基二醇、鹽酸小檗堿對大豆疫霉菌株的抑菌效果較好。綜上可為開發(fā)防治疫病有效植物源農藥及對抗性菌株治理提供參考。
【學位單位】：西南大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：S435.651
【部分圖文】：

圖 2-1 氟吡菌胺抗性菌株與不同殺菌劑的交互抗性Figure 2-1 Cross-resistance between fluopicolide and others fungicides2.4.2 抗苯霜靈突變體對 4 種殺菌劑的交互抗性測定大豆疫霉親本菌株和抗苯霜靈突變體對苯霜靈、霜脲氰、丁吡嗎啉、醚菌酯和氟吡菌胺的敏感性，用 SPSS 軟件分析 EC50值（圖 2-2），結果發(fā)現親本菌株和抗藥性突變體對苯霜靈的敏感性與其它四種殺菌劑的敏感性相關系數分別為 0.9120、0.4640、0.4890、-0.0573，F 檢驗的顯著水平 P 值分別為 0.0040、0.2940、0.2660 和 0.1780。其中親本菌株和抗藥性突變體對苯霜靈的敏感性與對霜脲氰的敏感性之間的顯著性水平小于 0.05，說明在 P=0.05 水平上有顯著性差異，即苯霜靈與霜脲氰之間存在正交互抗性，大豆疫霉菌對苯霜靈產生抗藥性之后，對霜脲氰的敏感性也會跟著降低，而與丁吡嗎啉、醚菌酯和氟吡菌胺之間則不存在交互抗性。

圖 2-2 苯霜靈抗性菌株與不同殺菌劑的交互抗性Figure 2-2 Cross-resistance between benalaxyl and others fungicides2.5 抗藥突變體的菌絲生長速率由大豆疫霉親本菌株及抗藥性突變體菌絲生長 6 d 的情況可知，抗氟吡菌胺突變體 F6-1、F6-3、F6-4 菌絲生長速率顯著低于親本菌株 P6497，F7-1、F7-2、F7-4 菌絲速率生長顯著低于親本菌株 P7076，抗藥性突變體之間差異不顯著；抗苯霜靈突變體 B6-4、B6-5、B6-7 的菌絲生長速率顯著高于親本菌株 P6497，抗藥性突變體之間沒有顯著性差異，且生長至第 5 d 時抗苯霜靈突變體均長滿了整個平板(圖 2-3)。2.6 抗藥突變體的游動孢子囊產量對抗藥性突變體的游動孢子囊產量測定（圖 2-4），結果表明抗氟吡菌胺突變體 F6-1、F6-3、F6-4 的游動孢子囊產量比親本菌株 P6497 分別減少了 37.93%、18.97%、29.31%，F7-1、F7-2、F7-4 的游動孢子囊產量比親本菌株 P7076 分別減

第二章 大豆疫霉抗氟吡菌胺和抗苯霜靈突變體的獲得圖 2-3 大豆疫霉不同抗藥突變體菌落擴展直徑Figure 2-3 Mycelial growth colony diameter of different resistant mutants

【參考文獻】

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本文編號：2825486