近年來貴州省獼猴桃產(chǎn)業(yè)呈噴井式發(fā)展,已成為貴州省重要的扶貧產(chǎn)業(yè)。獼猴桃軟腐病是獼猴桃果實貯藏期的重要病害,其主要致病菌為葡萄座腔菌(Botryosphaeria dothidea)。目前針對獼猴桃軟腐病的防治主要以化學防治為主,化學農(nóng)藥雖可有效控制獼猴桃軟腐病的發(fā)生,但存在耐藥性、抗性、環(huán)境污染及農(nóng)藥殘留等諸多問題。茉莉酸甲酯(methyl jasmonate,MeJA)作為高等植物體內(nèi)廣泛存在的內(nèi)源調(diào)節(jié)激素,在植物生長發(fā)育和次生代謝方面發(fā)揮著極為重要的作用,目前已有人利用MeJA直接抑制植物病原真菌,且達到較理想的效果,但MeJA對獼猴桃軟腐病菌B.dothidea的抑菌活性及作用機制尚未見相關研究,阻礙了MeJA作為抑制劑的開發(fā)和實際應用。鑒于此,本研究通過測定MeJA對獼猴桃軟腐病菌B.dothidea的抑菌作用,并進一步研究MeJA對B.dothidea菌絲形態(tài)、超微結構、呼吸代謝及酶活性、細胞膜結構及遺傳物質的影響,開展了MeJA對獼猴桃軟腐病菌的防治及果實品質的影響,為MeJA在獼猴桃上的應用提供理論依據(jù)。主要研究結果如下:1.采用組織分離法對獼猴桃病果進行分離,以柯赫氏法則測定致病性,獲得一株致病力較高的菌株。通過形態(tài)學及分子生物學rDNA-ITS序列測定,該菌株與B.dothidea同源性達100%。因此,確定本試驗分離所獲得的獼猴桃軟腐病的致病菌株為B.dothidea。2.采用菌絲生長速率法、稱重法、孢子萌發(fā)法測定不同濃度MeJA對B.dothidea菌絲生長、菌絲生長量及孢子萌發(fā)的影響。結果顯示,MeJA對獼猴桃軟腐病菌B.dothidea菌絲生長有抑制作用,EC_(50)為0.2327 mmol/L;0.80 mmol/L MeJA對B.dothidea菌絲生長量抑制率達86.51%;同時MeJA對B.dothidea孢子萌發(fā)的具有抑制作用,濃度為0.80 mmol/L時抑制率達83.74%。通過掃面電鏡及透射電鏡觀察,0.80 mmol/L MeJA處理B.dothidea菌絲后,可導致菌絲細胞細胞壁溶解、細胞核及線粒體增多且形狀變得不規(guī)則、細胞內(nèi)空腔增加,從而破壞B.dothidea菌絲細胞結構達到殺死病原菌的作用。3.利用碘乙酸、丙二酸和磷酸鈉三種真菌典型呼吸抑制劑同MeJA進行疊加使用,通過MeJA與呼吸抑制劑疊加率來判斷MeJA抑制病原真菌的呼吸途徑,并測定MeJA處理后呼吸代謝酶活性。結果表明,MeJA和丙二酸疊加使用,疊加率最低,認為MeJA通過三羧酸循環(huán)抑制獼猴桃軟腐病原菌呼吸代謝;而MeJA與碘乙酸疊加率較高,提示糖酵解途徑可能也受到MeJA的影響;MeJA處理對細胞代謝過程中ATP能量消耗與合成、代謝酶活琥珀酸脫氫酶、蘋果酸脫氫酶的產(chǎn)生均有影響,MeJA抑制琥珀酸脫氫酶、蘋果酸脫氫酶活性,干擾三羧酸循環(huán),抑制ATP的合成,進而導致線粒體內(nèi)ATP衰竭,達到殺死病原菌的效果。4.通過電導法、紫外分光光度法測定菌絲培養(yǎng)液電導率、蛋白質及核酸相對泄漏度;采用考馬斯亮藍法、CTAB法測定MeJA對B.dothidea蛋白質及DNA含量,探究MeJA處理B.dothidea對菌絲細胞膜功能及遺傳物質的影響。結果顯示,MeJA處理可引起菌絲細胞膜相對電導率、蛋白質與核酸相對泄漏度升高,隨著時間延長,作用效果越明顯;且MeJA處理B.dothidea后菌絲細胞壁β-1,3-葡聚糖酶活性增強,細胞壁幾丁質主要組分N-乙酰氨基葡萄糖含量升高;MeJA處理后B.dothidea體內(nèi)蛋白質、DNA含量明顯降低,可能直接抑制或干擾病原菌DNA及蛋白質的合成。5.為明確MeJA對獼猴桃軟腐病田間防效及果實品質的影響,在獼猴桃不同生長期利用MeJA進行處理。田間試驗結果顯示:采前一個月用0.5 mmol/L MeJA浸果對獼猴桃軟腐病控制效果較好,防效達到77.70%;且MeJA處理可有效改善果實外觀品質,提高果實維生素C、可溶性固形物含量,MeJA處理可提高果實硬度,明顯延緩果實可溶性固形物、可溶性糖含量的上升速率,降低維生素C的損失率,從而達到改善獼猴桃果實貯藏性能。本研究表明,MeJA處理可以直接抑制B.dothidea的生長,破壞菌絲細胞功能及結構,抑制DNA和蛋白質的合成,0.5 mmol/L MeJA對田間獼猴桃軟腐病防效達到77.70%,且能提高獼猴桃果實品質,改善貯藏性能。研究結果可為MeJA在獼猴桃上的應用提供理論參考。
【學位單位】：貴州大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：S436.634.1
【部分圖文】：

有 0.00（CK）、0.8 mmol/L MeJA 的 PDA 培養(yǎng)基上取直徑為 5 mm 的菌餅，用 2.5%戊二醛，磷酸緩沖4℃），1%鋨酸固定液固定 2-3 h。乙醇梯度脫水，埋處理。3%醋酸鈾-枸櫞酸鉛雙染色法染色后，對切。每個樣品至少觀察 10 份超薄切片。析定將分離純化的菌株回接到健康獼猴桃果實上，結果發(fā)病，且發(fā)病癥狀與田間自然發(fā)病癥狀相同，依次實上病斑進行再分離得到的菌株在 PDA 培養(yǎng)基上的表明所分離得到的病原菌是獼猴桃軟腐病的病原菌，致病性相對較強，作為后續(xù)研究菌株。

州大學 2019 碩士論文 茉莉酸甲酯對 Botryosphaeria dothidea 的抑菌作用及其代謝酶活性的影2 病原菌形態(tài)特征RF-2 菌落初期白色，棉絮狀，培養(yǎng) 3~4 d 后，菌落中央逐漸轉為墨綠色散，后再轉為黑色，邊緣不整齊，經(jīng) 72 h 生長菌落直徑達 70 mmA/B），分生孢子無色，無隔膜，壁薄，外壁光滑，長橢圓形，平均寬 5.88 (4) μm，平均長度 19.59(17.86～21.43) μm (圖 2.2-C)。A B C

2.2 RF-2 病原菌菌絲形態(tài)及孢logy of mycelia and spores of RF/ITS5對菌株RF-2進行 PCR的片段長度分別為 523 bp對，菌株 RF-2 與葡萄座腔菌.1、KF 293916.1）同源性達于同一分支，進化距離最近 為 B. dothidea（圖 2.4）。

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本文編號：2811790