楠木是中國從古至今的深受人們喜愛的名貴樹種,有著巨大的使用價值及生態(tài)意義。近年來在浙江省楠木種植區(qū)發(fā)現(xiàn)一種新型枝枯病害,枝條被侵染后出現(xiàn)黑褐色病斑,病情加重后分杈處腫脹并縱向開裂,嚴(yán)重的感病植株全冠幅枯死。發(fā)病區(qū)平均發(fā)病率為63.72%,平均病情指數(shù)為29.17,楠屬Phoebe Nees、潤楠屬M(fèi)achilus Nees樹種均被發(fā)現(xiàn)感染此類病害,病情較為嚴(yán)重。本研究進(jìn)行了大量的研究實(shí)驗(yàn),調(diào)查分析了病害發(fā)生的規(guī)律及影響因素,對病害致病菌進(jìn)行了分離鑒定,對其的生物學(xué)特性進(jìn)行了探究,結(jié)果為今后楠木枝枯病的科學(xué)防控提供有效理論指導(dǎo)。結(jié)果如下:1.該種病害4月初~5月中旬在林間零星發(fā)生,6月~9月底為高發(fā)期,研究數(shù)據(jù)可知在立地條件變化的情況下楠木枝枯病的發(fā)病率和病情指數(shù)也會有顯著性的變化,包括樹高、坡向等,但是顯著性差異并不表現(xiàn)在坡位不同、郁閉度指數(shù)不同的樣地之間的發(fā)病率和病情指數(shù)上。種植在半陽坡和半陰坡的楠木其枝枯病發(fā)病率以及病情指數(shù)要比種植在陽坡和陰坡的楠木要高。5年以上樹齡的楠木發(fā)病率以及感病指數(shù)較高,其中5年~30年的楠木病情最為嚴(yán)重。林分密度越大的楠木種植林發(fā)病率以及感病指數(shù)越高。樹高1 m以上的楠木與樹高1 m以下的楠木發(fā)病率以及病情指數(shù)差異性顯著,其中樹高1 m至5 m的楠木病情最為嚴(yán)重。單一品種楠木純林和多品種楠木混合種植的林地發(fā)病程度要比楠木與其他樹種混合種植的林地嚴(yán)重。2.分離純化后比較其形態(tài)及培養(yǎng)特性,將分離得到的菌株分為兩組,分別編號為JDHNY1為優(yōu)勢菌種,分離率為68.32%;JDHNY2為23.46%。對JDHNY1、JDHNY2進(jìn)行致病性測定,JDHNY1能夠引起健康楠木枝條發(fā)病,分離純化后依舊能得到JDHNY1。使用ITS序列及EF1-α序列對JDHNY1進(jìn)行形態(tài)學(xué)以及生物學(xué)鑒定,將所得序列上傳至NCBI,獲得登錄號MK040561以及MH663527。并篩選下合適的載參比序列。結(jié)合系統(tǒng)發(fā)育樹及培養(yǎng)特性可知,假可可毛色二孢Lasiodiplodia pseudotheobromae為楠木枝枯病病原菌。3.病原菌在以葡萄糖為碳源的處理下菌落直徑擴(kuò)展速率最快,葡萄糖為假可可毛色二孢最適碳源;以硫酸銨為氮源的處理下菌落直徑擴(kuò)展速率最快,硫酸銨為假可可毛色二孢最適氮源;PDA培養(yǎng)基上菌落直徑擴(kuò)展速率最快,PDA培養(yǎng)基最適合假可可毛色二孢;病原菌在10℃低溫條件下也能發(fā)育,最適溫度區(qū)間為25℃~35℃,假可可毛色二孢屬于高溫適生菌;不同光照條件對于假可可毛色二孢發(fā)育的影響并不明顯;假可可毛色二孢在pH值5~11之間均能生長,最適pH值為5~6。這是Lasiodiplodia pseudotheobromae引起楠木枝枯病的首次報道;楠木為假可可毛色二孢的新寄主;同時也是假可可毛色二孢少數(shù)幾則在南亞熱帶以外的氣候區(qū)域被發(fā)現(xiàn)的報道之一。
【學(xué)位單位】：浙江農(nóng)林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：S763.7
【部分圖文】：

6 月～9 月底為高發(fā)期，品種單一的楠木種植林大多爆發(fā)式發(fā)生，受害枝比例高達(dá) 50%～100%，病情嚴(yán)重的林分全林樹冠枯萎。2017 年至 2018 年對楠木枝枯病主要發(fā)病區(qū)長期跟蹤觀察后，總結(jié)主要發(fā)病癥狀如下：該種病害主要危害 5～30 年長勢較弱的楠木，各個楠木品種均有出現(xiàn)該種病害發(fā)病癥狀，該種病害主要侵染 1～3 年生側(cè)枝或者是樹梢部位的枝段，侵染后發(fā)生病變的部位大多集中于枝條基部和分杈處，枝條受病原物侵害后，發(fā)病初期枝條表皮出現(xiàn)黑褐色水漬形病斑。隨著病情的發(fā)展病斑會逐漸擴(kuò)大，該段枝條上的樹葉會逐漸萎蔫發(fā)黃病害加重后當(dāng)年生枝條枯死，觀察病斑橫切面發(fā)現(xiàn)樹皮韌皮部，內(nèi)皮部甚至木質(zhì)部出現(xiàn)不同程度的病變發(fā)黑，嚴(yán)重處可達(dá)木質(zhì)部2～3 cm。發(fā)病后期多年生枝條發(fā)生病變的韌皮部出現(xiàn)增生腫大的癥狀，腫脹部位會再沿枝條方向開裂形成多條裂紋，部分梢端主干上會形成瘤狀物,樹葉基本枯黃脫落，枝條干枯嚴(yán)重著會整枝斷裂脫落。整個病害過程中并未發(fā)現(xiàn)葉片出現(xiàn)病斑，病變部位未發(fā)現(xiàn)蟲孔、蟲眼、木屑、排泄物等蛀干害蟲危害的痕跡，發(fā)病過程中無分泌物流出。但次年能從存活的主干上抽出新梢，新梢其生長正常無異。目前所發(fā)現(xiàn)病害都發(fā)生在海拔 300～20 米區(qū)域。

浙江楠木枝枯病病原菌鑒定及系統(tǒng)發(fā)育分析3.2.2 病原菌培養(yǎng)特性觀察利用組織分離法對所采集帶有典型病斑的楠木枝條進(jìn)行病原菌分離純化，得到75 株菌株，根據(jù)培養(yǎng)基生長特性以及切片鏡檢結(jié)果將其分為 2 組。第一組:菌 A 在 PDA 平板上生長速度較快，25℃條件下 2 天即可長滿 90 mm 培養(yǎng)皿。25℃條件下生長速度為 16～19 mm/d。菌落早期呈現(xiàn)白色或灰白色，氣生菌絲較少，后期隨著色素沉淀變?yōu)槟谏�，氣生菌絲發(fā)達(dá)，呈蛛絲狀，簇狀直立生長。初期菌絲無隔，無色透明，后期菌絲有隔。產(chǎn)孢細(xì)胞透明，無隔，圓柱形;分生孢子初期透明無色，單胞，卵形或橢圓形，壁厚表面光滑，成熟后深褐色，雙胞，有隔，測量 50 個分生孢子的大小為（12.6～16.2） μm×（22.4～32.2） μm，L/W 比為 1.8～2.0。子實(shí)體的產(chǎn)生需要 30 天左右，表生，黑色近碳質(zhì)，周圍有絨狀灰黑色菌絲。根據(jù)病原菌的菌落特征和形態(tài)特征，初步確定該病原物為 Botryosphaeriaceae 真菌。

圖 3.2 菌種 B 的形態(tài)特征Fig 3.2 Microscopic characteristics of strain B3.2.3 病原菌孢子誘導(dǎo)分離所得菌株在 PDA 培養(yǎng)基上生長速度均較快，在燕麥培養(yǎng)基以及楊樹皮煎汁培養(yǎng)基上生長速度較慢，在 2％楊樹枝條水瓊脂培養(yǎng)基菌上生長速度最慢。楊樹樹皮煎汁培養(yǎng)基上，氣生菌絲不發(fā)達(dá)，緊貼培養(yǎng)基，稀疏且長勢較弱，孢子誘導(dǎo)效果略好于 PDA 培養(yǎng)基，30 左右部分培養(yǎng)基表面產(chǎn)生子實(shí)體，少且分散。燕麥培養(yǎng)基上菌株生長較弱，氣生菌絲較少，菌株生長緊貼培養(yǎng)基，幾乎沒有孢子產(chǎn)生。2％楊樹枝條水瓊脂培養(yǎng)基上，幾乎沒有氣生菌絲，20 天后大部分培養(yǎng)基均產(chǎn)生子實(shí)體，能夠進(jìn)行徒手切片制作。改善光照條件對于誘導(dǎo)菌株產(chǎn)孢有一定作用，將菌落表面劃碎或刮傷使菌絲體收到損傷也可以誘導(dǎo)菌株產(chǎn)生分生孢子。

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