【摘要】：葡萄座腔菌(Botryosphaeria dothidea)是危害林果病害的重要病原菌,危害嚴(yán)重。真菌病毒作為一類重要的生防因子,有望在該類病害病菌中發(fā)現(xiàn)和應(yīng)用。本研究以19個(gè)B.dothidea菌株為出發(fā)菌株,通過對(duì)其中13個(gè)菌株真菌病毒的提取、分離、鑒定及功能分析,明確B.dothidea真菌病毒的分類地位及功能,為明確B.dothidea真菌病毒的系統(tǒng)演化及生物防控新的思路提供依據(jù),主要研究結(jié)果如下:篩選出了dsRNA病毒高效的分離方法以sdau11-122和sdau11-64為供試菌株,選用水飽和酚作為抽提劑和真菌RNA提取酶切法進(jìn)行比較,以操作的方便性和dsRNA的提取的質(zhì)量兩個(gè)指標(biāo)為標(biāo)準(zhǔn),篩選出真菌RNA提取酶切法是提取B.dothidea dsRNA病毒是高效的方法,該方法的提取時(shí)間縮短了一半,提取的質(zhì)量好。其他sdau11-65、sdau11-71等17個(gè)菌株按此方法進(jìn)行了dsRNA的提取,驗(yàn)證了方法的高效性且發(fā)現(xiàn)病毒具有多樣性。明確B.dothidea部分菌株dsRNA病毒的分類地位通過全基因測序、BLAST比對(duì),發(fā)現(xiàn)sdau11-122菌株的病毒的RdRp大小為1408 bp,CP基因大小為1562 bp,通過同源性對(duì)比,其與Botryosphaeria dothidea partitivirus 1的同源性達(dá)到了99%,屬于雙分體病毒科(Paritiviridae)雙分體病毒屬(Partitivirus),命名為BdPV2;sdau11-64菌株的病毒序列片段大小為5161 bp,經(jīng)對(duì)比后發(fā)現(xiàn)其與Sphaeropsis sapinea RNA virus 1的同源性達(dá)到了99%,屬于整體病毒科(Totiviridae)維多利亞病毒屬(Victorivirus),將其命名為Botryosphaeria dothidea Victorivirus 2(BdVV2),這是首次在B.dothidea中發(fā)現(xiàn)該種真菌病毒。明確了13個(gè)真菌病毒的功能通過對(duì)13個(gè)野生菌株采用原生質(zhì)體制備、結(jié)合病毒唑得到脫毒菌株,提取病毒粒子并轉(zhuǎn)染獲得再生菌株,通過測定野生菌株、脫毒菌株和再生菌株在菌落顏色、菌落生長特性和人工刺傷接種方法,研究結(jié)果表明:脫毒菌株sdau11-119和sdau11-65與野生及再生菌株顏色差異表現(xiàn)較小其他菌株顏色均有一定差異;sdau11-122、sdau11-71、sdau12-60等菌株野生、脫毒及再生菌絲生長速率無差異,致病力測定野生菌株和再生菌株病斑較大,而脫毒后的菌株病斑的較小,說明病毒對(duì)病原菌具有促生作用;sdau11-64、sdau11-119、sdau11-86、sdau11-80、sdau12-40等菌株生長速率脫毒菌株高于野生及再生菌絲,致病力測定野生菌株和再生菌株病斑較小,而脫毒后菌株病斑較大,存在弱毒現(xiàn)象,致病力較弱,具有重要的生防價(jià)值。
【學(xué)位授予單位】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：S476
【圖文】：

山東農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文析ea dsRNA 病毒提取方法的篩選othidea 菌株中提取高質(zhì)量的 dsRNA 病毒，以 sdau11-12和酚抽提法和酶切法兩種方法同時(shí)取菌株等量的菌絲進(jìn)的瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行檢測（如圖 1），根據(jù)結(jié)果顯示呈彌散狀且條帶不亮，說明在抽提過程中出現(xiàn)降解或者 dsRNA 條帶相對(duì)較為清晰且量大，說明通過真菌 RNA，且此類方法能夠高效的節(jié)約時(shí)間，可用于后續(xù) B. doth

葡萄座腔菌 dsRNA 病毒鑒定及功能分析及 sdau12-93 片段大小相似，其中 sdau11-64 和 sdau11-122 均為 5000 bp 和 2500 bp 左sdau11-71 片段大小在 2300bp-2500 bp;而 sdau12-60 片段較小約為 4500 bp 以及 2300 bpsdau11-118 以及 sdau11-123 未檢測到 dsRNA，上述結(jié)果顯示 dsRNA 在菌株中普遍存具有多樣性。

山東農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文上的為 1545 bp；而從 sdau11-64 中分離出來的病毒序列經(jīng)過 BLAST 對(duì)比后與 Sphaeropsissapinea RNA virus 1 的同源性達(dá)到了 99%（圖 4），屬于整體病毒科（Totiviridae）維多利亞病毒屬（Victorivirus），將其命名為 Botryosphaeria dothidea Victorivirus 2（BdVV2）。BdVV2序列長度為 1562 bp,sphaeropsis sapinea RNA virus 1 的序列全長為 1623 bp，完全對(duì)比上的為 1545 bp。

【參考文獻(xiàn)】

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7 許傳俊;黃s

本文編號(hào)：2788362