【摘要】：根腫病是由蕓薹根腫菌(Plasmodiophora brassicae)引起的一種土傳病害,在世界范圍內(nèi)十字花科作物產(chǎn)區(qū)均有發(fā)生,造成嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失。根腫菌在土壤中能夠長(zhǎng)期存活,使得根腫病的防控手段有限,導(dǎo)致該病害不斷發(fā)生和蔓延。本研究采用分子生物學(xué)技術(shù),初步建立蕓薹根腫菌早期診斷方法和定量檢測(cè)體系,用于監(jiān)測(cè)田間時(shí)空動(dòng)態(tài)變化,為研究根腫菌的成災(zāi)和根腫病的流行提供了理論參考及技術(shù)支持。主要研究結(jié)果如下:1.基于常規(guī)PCR技術(shù)建立根腫病的早期診斷方法。該方法能夠特異性檢測(cè)蕓薹根腫菌DNA,而對(duì)代表性的真菌、細(xì)菌、線蟲(chóng)及寄主植物內(nèi)生菌等沒(méi)有擴(kuò)增產(chǎn)物。靈敏性檢測(cè)表明,根腫菌DNA最低濃度1×10~(-3) ng/μL,土壤帶菌最低濃度為1×10~3個(gè)孢子/克土,種子帶菌最低濃度1×10~5個(gè)孢子/克種子。同時(shí),該方法能夠用于多種十字花科作物(包括罹病油菜、白菜、莖瘤芥、甘藍(lán)、蘿卜)的根腫病早期診斷與預(yù)測(cè),也能夠用于不同播種階段的油菜根部及其根圍土壤的田間帶菌檢測(cè)。2.利用qPCR方法構(gòu)建根腫菌定量檢測(cè)體系。該體系能夠用于根腫菌孢子及土壤、種子和罹病寄主植株的帶菌定量檢測(cè)。靈敏性分析表明,qPCR方法能夠檢測(cè)根腫菌孢子最低濃度為1×10~1個(gè)孢子,土壤帶菌最低濃度為1×10~3個(gè)孢子/克土,植物(油菜、白菜和榨菜)帶菌最低濃度為1×10~3個(gè)孢子/克根組織,種子帶菌最低濃度為1×10~3個(gè)孢子/克種子。此外,比較發(fā)現(xiàn)不同樣品的回歸曲線呈平行關(guān)系,且樣品濃度在1×10~5水平下,理論與實(shí)際濃度水平差異較小,且根腫菌孢子濃度與病情指數(shù)呈正相關(guān)。該檢測(cè)體系具有評(píng)估田間根腫病的發(fā)生與流行預(yù)警的可能性。3.應(yīng)用早期診斷和定量檢測(cè)技術(shù),監(jiān)測(cè)田間根腫菌群體的時(shí)空動(dòng)態(tài)。在時(shí)間動(dòng)態(tài)方面,同一生長(zhǎng)季內(nèi)根腫菌的群體密度隨時(shí)間呈先降后升趨勢(shì)。在空間動(dòng)態(tài)方面,根腫菌主要垂直分布在地下0?50cm范圍內(nèi),并具有動(dòng)態(tài)分布特點(diǎn)。其中,播種后4周根腫菌主要集中在20?40cm的土層范圍內(nèi),8周則聚集在0?30cm的范圍內(nèi)。水平分布發(fā)現(xiàn),田間根腫菌群體密度與病害發(fā)生具有相關(guān)性,存在分布集中區(qū)域(即病害熱點(diǎn)),且經(jīng)過(guò)一個(gè)生長(zhǎng)季節(jié)后將出現(xiàn)新的潛在病害熱點(diǎn)現(xiàn)象。本研究建立根腫菌的早期診斷方法和定量檢測(cè)體系,初步實(shí)現(xiàn)田間根腫菌的精準(zhǔn)檢測(cè)及群體動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè),為根腫病的早期預(yù)警及流行預(yù)測(cè)等提供理論參考和技術(shù)支持。
【學(xué)位授予單位】：沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：S436.3
【圖文】：

圖 2 1 PCR 反應(yīng)條件（退火溫度）優(yōu)化；3：54oC；4：56oC；5：58oC；6：60oC；7：62oC；8：611：70oC.1 Optimization of the annealing temperature in PCR 2: 52oC; 3: 54oC; 4: 56oC; 5: 58oC; 6: 60oC; 7: 62oC; 8: 64oC線蟲(chóng)等樣品 DNA 作為模板進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增，ssicae 模板 DNA 進(jìn)行有效擴(kuò)增且呈 PCR 陽(yáng)及陰性對(duì)照均未出現(xiàn)擴(kuò)增產(chǎn)物（圖 2 2），說(shuō). brassicae 具有較高的特異性。

+圖 2 1 PCR 反應(yīng)條件（退火溫度）優(yōu)化C；2：52oC；3：54oC；4：56oC；5：58oC；6：60oC；7：62oC；8：64oC；9：66oC11：70oC.Fig 2 1 Optimization of the annealing temperature in PCR reactioner; 1: 50oC; 2: 52oC; 3: 54oC; 4: 56oC; 5: 58oC; 6: 60oC; 7: 62oC; 8: 64oC; 9: 66oC; 10異性微生物及線蟲(chóng)等樣品 DNA 作為模板進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增，結(jié)果表明菌 P. brassicae 模板 DNA 進(jìn)行有效擴(kuò)增且呈 PCR 陽(yáng)性反應(yīng)，、內(nèi)生菌及陰性對(duì)照均未出現(xiàn)擴(kuò)增產(chǎn)物（圖 2 2），說(shuō)明 PCR 根腫菌 P. brassicae 具有較高的特異性。

沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文腫菌 DNA 定量后，分別稀釋成不同 DNA 模 DNA 濃度下限為 1 pg/μl，同時(shí)擴(kuò)增條帶亮度模板 DNA 濃度在 100 fg/μl 及陰性對(duì)照無(wú)法進(jìn)行菌孢子土樣中提取的 DNA 作為模板進(jìn)行 PCR壤中根腫菌孢子含量的靈敏性。該反應(yīng)體系檢103個(gè)孢子/克（圖 2 4），而土壤孢子含量在 1×1增條帶，表明 PCR 檢測(cè)體系對(duì)根腫菌 DNA 及

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本文編號(hào)：2787775