【摘要】：小菜蛾P(guān)lutella xylostella(L.)取食十字花科植物,其發(fā)生世代多、繁殖能力強(qiáng)、寄主范圍廣且抗藥性水平高,是當(dāng)前重要的世界性害蟲。小菜蛾腸道生存著多種多樣的微生物,長期協(xié)同進(jìn)化使小菜蛾和其腸道微生物間存在緊密的共生關(guān)系。隨著腸道微生物研究方法不斷改進(jìn),人們對腸道微生物了解日益加深。本課題組前期研究解析了小菜蛾腸道微生物的多樣性及其與食物消化之間的關(guān)系,但到目前為止,關(guān)于小菜蛾腸道微生物的來源與傳播途徑還知之甚少。本項(xiàng)目利用不同研究手段分析小菜蛾腸道微生物的來源及其傳播方式,促進(jìn)對小菜蛾腸道微生物的了解和后續(xù)深入研究,有助于基于腸道微生物為靶標(biāo)的害蟲生物防治。主要研究結(jié)果如下:1.小菜蛾腸道細(xì)菌來源的初步探索利用傳統(tǒng)微生物分離純培養(yǎng)方法分別對蘿卜苗和小菜蛾各齡期腸道細(xì)菌進(jìn)行分離培養(yǎng),發(fā)現(xiàn)變形菌門(Proteobacteria)的腸桿菌Enterobacter spp.、西地西菌 Cedecea spp.和泛菌 Pantoea spp.廣泛分布于蘿卜苗和小菜蛾4齡腸道,其中路德維希腸桿菌Enterobacter ludwigii存在于小菜蛾各個(gè)齡期腸道;且在細(xì)菌含量較少的人工飼料中飼養(yǎng)的小菜蛾,其腸道細(xì)菌含量也較低,該結(jié)果提示小菜蛾腸道細(xì)菌和食物上的細(xì)菌存在著潛在關(guān)聯(lián),小菜蛾可以從食物中獲取并建立其腸道菌群。2.小菜蛾腸道細(xì)菌的垂直傳播利用微生物分離純培養(yǎng)法發(fā)現(xiàn)腸桿菌Enterobacter spp.不僅存在于小菜蛾各齡期腸道,同時(shí)在卵巢和卵中也存在;用活細(xì)胞核酸染料SYT09對腸桿菌Enterobacter spp.RE1染色,染色后喂食小菜蛾,激光共聚焦顯微鏡檢測到目的菌在小菜蛾幼蟲腸道、蛹腸道、成蟲腸道和成蟲卵巢中均存在;將腸桿菌Enterobacter spp.RE1-KN(含卡那霉素抗性質(zhì)粒的腸桿菌Enterobacterspp.RE1)喂食小菜蛾后,從小菜蛾4齡幼蟲腸道、蛹腸道、成蟲腸道、卵巢和卵表面都檢測到腸桿菌Enterobacter spp.RE1-KN的存在;提示小菜蛾可以從食物中獲得并建立其腸道菌,同時(shí)小菜蛾從食物中獲得的細(xì)菌可以從腸道轉(zhuǎn)移到生殖器官卵巢和卵。將小菜蛾的卵消毒后,浸泡在腸桿菌Enterobacter spp.RE1-KN菌液中,晾干后于無菌飼料的培養(yǎng)瓶中飼養(yǎng),4齡后解剖腸道檢測到腸桿菌Enterobacter spp.RE1-KN的存在,表明小菜蛾的卵可以攜帶細(xì)菌傳播到腸道中,上述結(jié)果表明小菜蛾的腸道細(xì)菌可能存在經(jīng)卵垂直傳播的現(xiàn)象。3.小菜蛾腸道細(xì)菌的水平傳播把食用腸桿菌Enterobacterspp.RE1-KN(含卡那霉素抗性質(zhì)粒的腸桿菌Enterobacterssp.RE1)的飼料和食用不含該菌飼料的小菜蛾3齡幼蟲進(jìn)行等比例混合,以不含菌的飼料進(jìn)行混合飼養(yǎng),4齡時(shí)解剖腸道發(fā)現(xiàn)各個(gè)重復(fù)組的小菜蛾腸道均全部含有腸桿菌Enterobacter spp.RE1-KN,表明小菜蛾的社會活動可以使腸道細(xì)菌在種群間進(jìn)行傳遞,小菜蛾腸道細(xì)菌存在水平傳播的現(xiàn)象。
【學(xué)位授予單位】：福建農(nóng)林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S433.4
【圖文】：

３．１．１蘿卜苗細(xì)菌的分離鑒定逡逑用ＬＢ、ＮＡ和厭氧菌瓊脂（Ａｎａｅｒｏｂｉｃ邋Ａｇａｒ）邋３種培養(yǎng)基對實(shí)驗(yàn)室種植的蘿逡逑卜苗進(jìn)行細(xì)菌分離與培養(yǎng)（圖１），９６小時(shí)后挑取顏色、形態(tài)和大小各異的菌落逡逑在ＬＢ培養(yǎng)基中至少純化５次得到單菌落（圖２），這些菌落的形狀大多為桿狀，逡逑革蘭氏染色以陰性為主（表５）。經(jīng)１６Ｓ邋ｒＤＮＡ擴(kuò)增、測序和ｂｌａｓｔ比對后，共鑒逡逑定邋２４邋株不同細(xì)菌（ＧｅｎＢａｎｋ邋Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ邋Ｎｕｍｂｅｒ：邋ＭＨ１４１４４７、ＭＨ１４１４４８、逡逑ＭＨ１４１４４９、ＭＨ１４１４５０、ＭＨ１４１４５１、ＭＨ１４１４５２、ＭＨ１４１４５３、ＭＨ１４１４５４、逡逑ＭＨ１４１４５５、ＭＨ１４１４５６、ＭＨ１４１４５７、ＭＨ１４１４５８、ＭＨ１４１４５９、ＭＨ１４１４６０、逡逑ＭＨ１４１４６１、ＭＨ１４１４６２、ＭＨ１４１４６３、ＭＨ１４１４６４、ＭＨ１４１４６５、ＭＨ１４１４６６、逡逑ＭＨ１４１４６７、ＭＨ１４１４６８、ＭＨ１４１４６９、ＭＨ１４１４７０），分別為邐N希潁ⅲ礤澹螅穡�、辶x希粒潁簦瑁潁錚猓悖椋悖簦澹蟈澹螅穡澹懼澹蹋澹椋媯螅錚睿椋悖殄澹螅穡澹蹋澹悖歟澹潁悖椋悖殄澹悖椋洌澹悖幔潁猓錚歟幔簦幔澹牛睿簦澹潁錚猓悖椋悖簦澹蟈澹螅穡�，邋ＰｃｉｎｔｅP澹徨義希鰨椋紓幔睿蟆ⅲ校悖恚簦錚澹徨澹幔紓紓歟錚恚澹潁悖椋睿�、厌e恚錚睿澹歟歟徨澹螅穡澹櫻簦澹睿錚簦椋錚穡瑁錚恚錚睿悖椋簀澹恚悖椋歟簦錚穡瑁椋歟椋�、辶x希螅穡�、ＣｈｉｙｓｅｅP猓幔悖歟澹潁椋鰨鑠澹螅穡

本文編號：2773665