【摘要】：螺蟲乙酯(Spirotetramat)是一種能有效防治蚜蟲、薊馬、粉虱等刺吸式口器害蟲的殺蟲劑。目前,國內(nèi)外關(guān)于螺蟲乙酯的研究,主要集中在合成工藝、藥效、在植物體內(nèi)的消解殘留及在環(huán)境中的遷移轉(zhuǎn)化方面。有研究發(fā)現(xiàn)螺蟲乙酯對(duì)害蟲的田間藥效已有所下降,昆蟲害蟲會(huì)發(fā)生代謝或其他原因?qū)е聦?duì)螺蟲乙酯產(chǎn)生抗藥性,目前尚無螺蟲乙酯在昆蟲及哺乳動(dòng)物體內(nèi)的代謝研究以報(bào)道。為了研究螺蟲乙酯在家蠶體內(nèi)的代謝規(guī)律,本論文以螺蟲乙酯為研究對(duì)象,以家蠶為材料,建立了螺蟲乙酯及4種代謝物在家蠶主要組織部位中的殘留分析方法;研究了螺蟲乙酯對(duì)家蠶的毒性及其在家蠶中腸、絲腺、脂肪、血液、糞便中螺蟲乙酯及代謝物的分布;分析了螺蟲乙酯對(duì)家蠶3大解毒酶系的活性變化影響;通過qRT-PCR技術(shù)分析了螺蟲乙酯對(duì)家蠶解毒酶相關(guān)基因表達(dá)的影響。主要研究結(jié)果如下:(1)采用QuEChERS樣品前處理方法,結(jié)合液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)檢測技術(shù),以負(fù)離子掃描和多反應(yīng)檢測模式(MRM),建立了家蠶中腸、絲腺、脂肪中螺蟲乙酯及代謝物的殘留分析方法。結(jié)果表明,以甲醇為提取溶劑,經(jīng)C18凈化,螺蟲乙酯及代謝物的添加回收率為80.2-108.7%,滿足農(nóng)藥殘留檢測要求,適合家蠶各組織部位樣品中殘留螺蟲乙酯及代謝物的多殘留檢測。(2)分析了各組織部位中螺蟲乙酯及2種代謝物的分布及隨時(shí)間的變化情況。結(jié)果表明,B-enol及B-keto能在家蠶所有組織中檢測到;B-glu僅在中腸及糞便中被檢測到;B-mono無法檢測到。從變化趨勢看,螺蟲乙酯能在中腸中降解為B-enol、B-keto及B-glu,且B-glu能通過糞便快速排出體外。經(jīng)過血液的流動(dòng),螺蟲乙酯及B-enol能在絲腺中積累,含量升高,且不易被降解轉(zhuǎn)移,而在脂肪中,B-enol含量不斷增高,說明螺蟲乙酯在脂肪內(nèi)被有效降解為B-enol,B-keto在中腸、絲腺、脂肪中都呈下降趨勢,說明螺蟲乙酯被快速降解為B-keto,隨后B-keto慢慢被轉(zhuǎn)移并排出。(3)螺蟲乙酯暴露后,測定家蠶各組織部位(中腸、血液、絲腺和脂肪)3種解毒酶的活性變化。研究發(fā)現(xiàn),在中腸中,處理組3種酶活性均高于對(duì)照組,中腸是家蠶的主要消化器官,螺蟲乙酯在中腸中能被快速代謝,并被快速排出體外,說明中腸可能是代謝螺蟲乙酯的主要場所,且3種酶均有參與螺蟲乙酯的代謝。在絲腺中,僅GST活性有所上升,螺蟲乙酯能夠在絲腺中少量代謝,但大量的螺蟲乙酯及代謝物在絲腺中積累。在脂肪中,P450活性較高,為對(duì)照組的1.87-2.44倍,螺蟲乙酯在脂肪中大多能被代謝,但B-enol持續(xù)升高,說明P450可能參與螺蟲乙酯的代謝,但脂肪不能將B-enol代謝并排出體外。在血液中,僅GST活性上升,說明血液對(duì)有毒物質(zhì)較小的代謝作用可能與GST有關(guān)。(4)以解毒酶 7 個(gè)相關(guān)基因CYP9a19 CYP9a22、CYP6AB4、GST01、GSTe2、Bm CarE-11和BmCarE8-V1為研究對(duì)象,研究螺蟲乙酯處理后家蠶解毒基因的表達(dá)情況。結(jié)果表明在中腸中,P450 3種基因的上調(diào)說明P450參與了家蠶對(duì)螺蟲乙酯的代謝過程。GST相關(guān)基因上調(diào)水平較低,最高上調(diào)了 1.7-1.8倍。說明GST不是中腸主要的解毒酶。相比中腸中7種基因較高的表達(dá)量,脂肪中基因表達(dá)量較低,且隨時(shí)間無顯著變化趨勢,這可能是由于螺蟲乙酯對(duì)于脂肪合成的抑制作用,影響了解毒酶基因的表達(dá),從而調(diào)控解毒酶活性。通過螺蟲乙酯在家蠶體內(nèi)的代謝研究,以明確其在家蠶體內(nèi)的代謝產(chǎn)物;了解家蠶的主要代謝途徑;闡明解毒酶的作用及相關(guān)基因的調(diào)控作用。因此,此研究為螺蟲乙酯的合理使用和安全性評(píng)價(jià)提供了理論依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：揚(yáng)州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：S482.3
【圖文】：

圖１．３技術(shù)路線圖逡逑

圖２．１提取溶劑對(duì)螺蟲乙酯及代謝物添加回收率的影響逡逑（ａ：脂肪，ｂ：中腸，ｃ：絲腺，ｄ：血液，ｅ：糞便）逡逑２．２．２凈化方法的選擇逡逑采用甲醇溶液能有效的提取螺蟲乙酯及代謝物，但是生物樣品提取液仍含有較多內(nèi)源逡逑性干擾物，如蛋白質(zhì)、脂肪等，本研究應(yīng)用改良的ＱｕＥＣｈＥＲＳ方法，以甲醇為提取溶劑，逡逑考察了邋ＧＣＢ、Ｃ１８及其等質(zhì)量混合物共３種吸附劑及用量（２４、４８、９６ｍｇ）對(duì)家蠶樣品的逡逑凈化效果及對(duì)添加回收率的影響。結(jié)果表明，對(duì)于家蠶中腸樣品的凈化，ＧＣＢ、Ｃ１８均能有逡逑效吸附色素等雜質(zhì)。ＧＣＢ吸附雜質(zhì)效果更為明顯，但對(duì)Ｂ－ｋｅｔｏ、Ｂ－ｅｎｄ的回收率影響較大。逡逑以Ｃ１８為吸附劑，螺蟲乙酯及代謝物在中腸樣品中的添加回收率的范圍為７９．６－１０９．３％，且逡逑隨著添加量的增多，樣品中雜質(zhì)去除率增高，但回收率降低。當(dāng)吸附劑為ＧＣＢ、Ｃｌ８等質(zhì)逡逑量混合物時(shí)，能有效吸附雜質(zhì)，對(duì)螺蟲乙酯及代謝物回收率影響較小，但在４８、％邋ｍｇ添逡逑加量下對(duì)Ｂ－ｋｅｔｏ的回收率有較大影響，回收率分別為７１．２％和６９．９％。逡逑

暴露于螺蟲乙酯２４邋ｈ后，５齡幼蟲未表現(xiàn)出明顯的中毒癥狀，但７２邋ｈ后高濃度（５００逡逑ｍｇ／Ｌ）處理的家蠶表現(xiàn)出食桑量減少，發(fā)育不良的癥狀，死亡率為１９．８％，低濃度（５０邋ｍｇ／Ｌ）逡逑處理的家蠶未表現(xiàn)出明顯的食桑量減少情況（圖３．１－３．２）。本試驗(yàn)的供試濃度為２００ｍｇ／Ｌ，逡逑低于其ＬＣ５0值。逡逑＊２－１邐５００邋ｍｇＬ邐－？－ＣＫ邐２．０邋ｎ邐ｍ邋ｍｇ／Ｉ邋－Ａ－５０逡逑Ｉ＇＇２＂逡逑ｉ邋Ｔ邐ｉ０－８－邋ｋ；逡逑１邋°．４－逡逑４邋￣邋１邐邋ｉ邐！邐１邐－邋ｉ邐邐Ｉ邋＇邐Ｉ逡逑０邐２４邐４８邐７２邐２４邐４８邐７２逡逑時(shí)間（ｈ）邐時(shí)間（ｈ＞逡逑圖３．１螺蟲乙酯對(duì)家蠶生長的影響邐圖３．２螺蟲乙酯對(duì)家蠶食葉量的影響逡逑２．２螺蟲乙酯在家蠶主要器官中的分布及代謝逡逑家蠶在給藥后２４ｈ內(nèi)，螺蟲乙酯在中腸、脂肪體、絲腺、血液及糞便中均有發(fā)現(xiàn)，螺逡逑蟲乙酯主要代謝物Ｂ－ｋｅｔｏ、Ｂ－ｅｎｏｌ在各組織部位及糞便中都能檢測到，在中腸及糞便中能逡逑檢測到微量的Ｂ－ｇｌｕ，未能檢測到Ｂ－ｍｏｎｏ邋（表３．１）。由此推測螺蟲乙酯在家蠶體內(nèi)主要通逡逑過酯鍵斷裂生成主要代謝物Ｂ－ｅｎｏｌ，Ｂ－ｅｎｏｌ又經(jīng)過氧化反應(yīng)生成代謝物Ｂ－ｋｅｔｏ，少

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本文編號(hào)：2765308