【摘要】：平菇(Pleurotus ostreatus Kummer)是全世界廣泛栽培的食用菌之一。平菇黃斑病是平菇栽培中最重要的病害,據(jù)報道主要由托拉斯假單胞桿菌(Pseudomonas tolaasii Paine)引起,癥狀通常表現(xiàn)為菌蓋表面出現(xiàn)大面積黃化或出現(xiàn)黃色銹斑,有時會在菌蓋表面產(chǎn)生凹陷的病斑,嚴(yán)重時整個子實體卷曲萎黃,甚至完全腐爛。當(dāng)栽培設(shè)施較差,栽培管理相對粗放,栽培環(huán)境潮濕且通風(fēng)較差時,平菇黃斑病容易爆發(fā),常造成重大經(jīng)濟(jì)損失。對平菇黃斑病病原物種類及品種抗病性開展研究,對進(jìn)一步明確黃斑病發(fā)生規(guī)律,開展抗病品種選育和病害綜合防治,都具有重要的現(xiàn)實意義。本研究在湖北、福建、北京、河南、遼寧等5個平菇主產(chǎn)省市18個栽培基地進(jìn)行了平菇黃斑病調(diào)查,采集了97份病害標(biāo)本。調(diào)查發(fā)現(xiàn),平菇黃斑病田間癥狀存在黃色斑點類、黃色斑塊類、黃化龜裂類、片狀黃化類、黑色斑點類和菌蓋濕腐類等六種類型。對感病組織進(jìn)行分離與純化,共獲得了197株細(xì)菌分離物。通過觀察細(xì)菌菌落形態(tài),剔除了51株形態(tài)相同的培養(yǎng)物,將其它146株細(xì)菌分離物進(jìn)行致病性驗證,發(fā)現(xiàn)其中23株細(xì)菌分離物對平菇子實體具有明顯的致病性,且在接種后感病的菌蓋組織中能再次分離到細(xì)菌接種物,判斷它們均為平菇黃斑病的病原物。根據(jù)菌落形態(tài)特征、16S rDNA分子序列Blast比對和Biolog系統(tǒng)鑒定結(jié)果,在23株細(xì)菌性病原物中鑒定出10個屬11種細(xì)菌,包括5株托拉斯假單胞桿菌(Pseudomonas tolaasii),4株是應(yīng)變假單胞桿菌(P.reactans),而棲霉菌屬(Mycetocola)和腸桿菌屬(Enterobacter)細(xì)菌各有3株,鞘氨醇桿菌屬(Sphingobacterium)和沙雷氏菌屬(Serratia)細(xì)菌各有2株,葡萄球菌屬(Staphylococcus)、依格納季氏菌屬(Ignatzschineria)、普羅維登斯菌屬(Providencia)和西地西菌屬(Cedecea)等各有1株。采用Biolog系統(tǒng)進(jìn)行進(jìn)一步鑒定,明確沙雷氏菌屬(Serratia)和葡萄球菌屬(Staphylococcus)的3種病原物分別為居泉沙雷氏菌(Serratia fonticola)、普城沙雷氏菌(Serratia plymuthica)和松鼠葡萄球菌(Staphylococcus sciuri)。另有假單胞桿菌屬2個菌株暫無法鑒定到種。采用不同病原物接種后觀察其癥狀,發(fā)現(xiàn)不同的病原物引起不同的癥狀。托拉斯假單胞桿菌(Pseudomonas tolaasii)既能引起菌蓋出現(xiàn)凹陷型黃褐色病斑,也能引起子實體蜷縮。應(yīng)變假單胞桿菌(Pseudomonas reactans)和鞘氨醇桿菌屬細(xì)菌(Sphingobacterium)主要引起黃化型癥狀。棲霉菌屬(Mycetocola sp.)細(xì)菌也引起黃化癥狀,但多在子實體凹陷處形成斑塊,也能導(dǎo)致菌蓋停止發(fā)育。而腸桿菌屬(Enterobacter)、松鼠葡萄球菌(Staphylococcus sciuri)和依格納季氏菌屬(Ignatzschineria)細(xì)菌感染后導(dǎo)致子實體表面出現(xiàn)分散的淺黃色斑點。上述研究結(jié)果表明,平菇黃斑病存在病原物多樣性及癥狀多樣性。接種病原物后出現(xiàn)的癥狀在田間調(diào)查中均有發(fā)現(xiàn),但不能將田間癥狀與病原物種類完全對應(yīng)起來。2018年春季在山東省泰安市調(diào)查了平菇97個栽培品種黃斑病自然發(fā)病率及病情指數(shù),分析了品種抗病力與菌柄軟硬程度和菌蓋顏色深淺的相關(guān)性。依據(jù)菌蓋色澤或菌柄硬度,將97個栽培品種分為60個菌蓋色澤偏深的栽培品種和37個菌蓋色澤偏淺的栽培品種,或?qū)⑵浞譃?4個菇柄偏硬的栽培品種和23個菌柄疏松偏軟的栽培品種。結(jié)果表明,平菇菌柄疏松偏軟的品種平均自然發(fā)病率和病情指數(shù)分別達(dá)到37.0%和21.12,均高于菌柄偏硬的品種(18.1%和8.04),F檢驗表明兩者之間抗病能力差異達(dá)到極顯著水平。平菇色澤偏深的品種平均自然發(fā)病率和病情指數(shù)分別為26.0%和13.06,高于色澤偏淺的品種(17.1%和8.02),但兩類品種之間抗病性差異不顯著。選擇25個抗病力存在差異的平菇栽培品種,采用托拉斯假單胞桿菌進(jìn)行接種試驗,觀察發(fā)現(xiàn)華平801等感病品種在接種后10 h內(nèi)即可出現(xiàn)癥狀,而華平36等抗病品種在接種72 h之后才出現(xiàn)輕微癥狀。華平801等感病品種菌蓋上病斑先局部變微黃色,后迅速擴展,最后菌蓋大面積焦黃,且萎縮;華平36等抗病品種僅局部出現(xiàn)淡黃色斑點,病斑幾乎不再擴展。
【學(xué)位授予單位】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S436.461
【圖文】：

25圖 3-1 部分平菇主產(chǎn)區(qū)的平菇黃斑類癥狀類型Fig 3-1 Symptom types of yellow blotch disease on P. ostreatus in the main cultivated areas注：1～4 黃色斑點類；5～6 黃色斑塊類；7～8 菌蓋黃化龜裂類；9～12 大片黃化類；13～16 黑色斑點類；17～18 菌蓋濕腐類Note: 1~4, yellow spots; 5~6, yellow plaques; 7~8, yellow cracks; 9~12, extensive yellowing;13~16, black spots; 17~18, pileus wet rot

27圖 3-2 23 株細(xì)菌分離物接種于華平 801 子實體后的感病癥狀Figure 3-2 Symptoms of 23 bacterial isolates after inoculating on fruit bodies of Pleurotusostreatus strain 801注：1：HX-3a、2：SY-7、3：JX-4、4:SN-6a、5：HX-3b、6：TZ-7、7：ZMD-4、8：ZMD-5、9：ZMD-2、10：HB-3、11：XZ-5b、12：SN-6b、13：F1-4、14：ZJL-3a、15：HN-1b、16：SY-11、17：SN-5a、18：DZ-1b、19：HB-1b、20：DZ-1a、21：ZJL-4b、22：ZJL-4c、23：HX-3cNote: 1, HX-3a; 2, SY-7; 3, JX-4; 4:SN-6a; 5, HX-3b; 6, TZ-7; 7, ZMD-4; 8, ZMD-5; 9, ZMD-2;10, HB-3; 11, XZ-5b; 12, SN-6b; 13, F1-4; 14, ZJL-3a; 15, HN-1b; 16, SY-11; 17, SN-5a; 18, DZ-1b;19, HB-1b; 20, DZ-1a; 21, ZJL-4b; 22, ZJL-4c; 23, HX-3c

華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2018 屆碩士研究生學(xué)位（畢業(yè)）論文3.2.3 16S rDNA 分子鑒定結(jié)果對 23 種病原菌用 16S 通用引物 27F 和 1492R 的進(jìn)行 PCR 擴增，電泳檢測結(jié)果如圖 3-3，16S 擴增片段大小約為 1500 bp。將測序結(jié)果質(zhì)控拼接后得到各病原物的16S rDNA 序列，提交到 NCBI 數(shù)據(jù)庫進(jìn)行 Blast 比對，與親緣關(guān)系最近的的物種的部分序列比對結(jié)果見附錄。

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本文編號：2764544