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普通煙草重要抗病基因的分子標(biāo)記檢測及其抗性鑒定

發(fā)布時(shí)間:2020-07-02 20:00
【摘要】:煙草是我國重要的經(jīng)濟(jì)作物,煙草生產(chǎn)和銷售在我國國民經(jīng)濟(jì)中占有重要地位。煙草花葉病和黑脛病是危害煙草產(chǎn)量和品質(zhì)的極為嚴(yán)重的世界性病害。近年來,我國主要煙草產(chǎn)區(qū)兩種病害的發(fā)生率均呈現(xiàn)出逐年上升的趨勢,嚴(yán)重影響著我國的煙草產(chǎn)量和質(zhì)量。研究表明,在生產(chǎn)上防御和控制煙草病害最經(jīng)濟(jì)、最有效的方法就是推廣培育抗病的煙草品種。優(yōu)良品種是作物生產(chǎn)的重要基礎(chǔ),而選擇又是培育優(yōu)良品種的重要環(huán)節(jié)。近年來,隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展和應(yīng)用,煙草抗病特性分子標(biāo)記的不斷開發(fā)、標(biāo)記本身穩(wěn)定性和準(zhǔn)確性的不斷加強(qiáng),為煙草抗病育種中親本選配和后代抗病基因型篩選提供了新的技術(shù)和方法。目前普通煙草已建立了較為穩(wěn)定的、包括抗花葉病N基因、抗黑脛病Ph基因在內(nèi)的多種重要抗病特性的特異分子標(biāo)記。為此,本研究在查閱大量煙草抗TMV和抗黑脛病分子標(biāo)記相關(guān)研究的基礎(chǔ)上,利用甄別和檢選的煙草TMV和煙草黑脛病抗性特性的特異分子標(biāo)記,對60份普通煙草育種親本種質(zhì)資源、65份不育系雜交種材料、35份高代材料進(jìn)行了抗TMV、抗黑脛病特性基因的特異分子標(biāo)記檢測,同時(shí)進(jìn)行了以上材料的溫室抗病特性鑒定及煙草抗病特性基因的特異分子標(biāo)記與溫室抗病特性的關(guān)聯(lián)性分析,獲得了以下研究結(jié)果:1.160份煙草材料煙草花葉病抗性基因的4個(gè)特異性分子標(biāo)記檢測表明,有77份、137份、34份、37份材料分別含有標(biāo)記NM2、F10、E1+E2和N2,分別占比為48.1%、85.6%、21.3%和23.1%;9份材料不含煙草花葉病的抗性標(biāo)記。供試材料中,F10標(biāo)記分布率最廣。2.160份煙草材料黑脛病抗性基因的5個(gè)特異分子標(biāo)記檢測表明,有123份、143份、140份、138份和140份材料含有標(biāo)記PT20383、INDel10617、ST141、Scf_30K和TM62,分別占比為76.9%、89.4%、87.5%、86.3%和87.5%,共6份材料不含黑脛病的抗性標(biāo)記。供試材料中,黑脛病抗性基因的5個(gè)連鎖標(biāo)記分布率較高,均76%以上。3.160份煙草材料溫室花葉病抗性特性鑒定表明:有20份材料既表現(xiàn)出對煙草花葉病的抗性(HR,MR和R),又含有抗性基因4個(gè)連鎖標(biāo)記。其中,NC71、9J22、CV87、雙抗70、抗88和Coker176共6份材料表現(xiàn)高抗;高代材料16F5-32、育種親本材料89-07-1-2、吉煙5號、Coker86、臺(tái)煙8號和CV91,共6份材料表現(xiàn)出抗性特性;不育系材料9D45、9C37、9G45、9G07和19J06、高代材料6F5-18、16F5-16和16F5-4,共8份材料表現(xiàn)中抗特性。該20份材料既表現(xiàn)出對花葉病的抗性特性,又含有抗性基因的連鎖標(biāo)記,是煙草花葉病抗性育種良好的種質(zhì)資源。4.160個(gè)煙草材料溫室苗期黑脛病抗性特性鑒定表明:有42份材料既含有黑脛病抗性基因的5個(gè)連鎖標(biāo)記,又表現(xiàn)出對黑脛病的抗性(HR,MR和R),其中,革新三號、NC55-1、73、9J25、16F5-15、16F5-16、16F5-39、16F5-40和16F5-44,共9份材料表現(xiàn)高抗;育種親本材料秦?zé)?6和不育系材料9E07表現(xiàn)抗性特性(R);親本材料皺葉紅大、雙抗70、云煙110、FLorida301和Ti245,不育系材料9A15、9A45、9A11、9B37、9J02、9J05、9J06、9J11、9J20、9J21、9J38、QY201、9D37、9C15、9G45、9G38,高代材料5FB10-3、16F5-18、16F5-29、16F5-32、16F5-46、16F5-52、6FA10-3、NC89、16F5-11、16F5-26,共31份材料表現(xiàn)中抗(MR)。該42份材料既表現(xiàn)出對黑脛病的抗性特性,又含有抗性基因的連鎖標(biāo)記,是煙草黑脛病抗性育種良好的種質(zhì)資源。5.對4個(gè)煙草花葉病抗性基因連鎖標(biāo)記對應(yīng)的病情指數(shù)分別進(jìn)行單倍型分析表明:煙草品種的煙草花葉病病情指數(shù)與花葉病抗性基因的4個(gè)連鎖標(biāo)記的有無均達(dá)到極顯著相關(guān)(p0.01),且含有抗性基因的材料煙草花葉病病情指數(shù)極顯著低于不含抗性基因材料的病情指數(shù)(p0.01)。表明煙草花葉病抗性基因?qū)┰嚥牧系目共⌒云鸬街匾恼{(diào)控作用。6.對5個(gè)黑脛病抗性基因緊密連鎖標(biāo)記對應(yīng)的病情指數(shù)分別進(jìn)行單倍型分析表明:煙草品種病情指數(shù)與抗性基因的5個(gè)緊密連鎖標(biāo)記的有無均達(dá)到極顯著相關(guān)(p0.01),含有抗性基因的材料病情指數(shù)極顯著低于不含抗性基因的材料(p0.01)。表明供試材料中的黑脛病抗性基因?qū)诿劜〉目剐云鹬匾恼{(diào)控作用。7.對160份煙草品種材料分別進(jìn)行煙草花葉病和黑脛病的抗性基因特異分子檢測,并對上述資源同步開展TMV和黑脛病人工接種抗病鑒定,結(jié)果表明:共有31份材料對煙草花葉病和黑脛病均表現(xiàn)出抗性特性(HR、R和MR);共有21份供試材料,均含煙草花葉病抗性基因的4種標(biāo)記和黑脛病抗性基因的5種標(biāo)記。其中,親本NC71、雙抗70和不育系9J06、9D45、9G07共5份材料既含有抗性基因的所有連鎖標(biāo)記,又在抗性鑒定中表現(xiàn)出對煙草花葉病和黑脛病的雙抗特性,是優(yōu)良的育種材料。
【學(xué)位授予單位】:西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2019
【分類號】:S435.72
【圖文】:

抗性基因,花葉病,試材,煙草


圖 2-1 煙草部分供試材料花葉病抗性基因連鎖標(biāo)記分子檢測情況Figure 2-1 Detection of mosaic marker molecules of mosaic disease resistance genes in tobacco注: M: 2000 (5000) bp DNA Marker; CK: 陽性對照; ck: 陰性對照; 其余為部分供試煙草材料抗性基因連鎖標(biāo)記 NM2的檢測; B: 抗性基因連鎖標(biāo)記 F10的檢測; C: 抗性基因連鎖標(biāo)記 E1+檢測; D: 抗性基因連鎖標(biāo)記 N2 的檢測Note: M: 2000 (5000) bp DNA Marker; CK: positive control; ck: negative control; the rest are pthe tested tobacco material; A: detection of the resistance gene linkage marker NM2; B: resistance glinkage marker F10 Detection; C: detection of resistance gene linkage marker E1+E2; D: detectionresistance gene linkage marker N2通過對供試的 160 個(gè)煙草材料進(jìn)行分子檢測,結(jié)果表明(表 2-2,附錄 B):77 個(gè)品種含有標(biāo)記 NM2,占比 48.1%;137 個(gè)品種含有標(biāo)記 F10,占比 85.6%;3品種含有標(biāo)記 E1+E2,占比 21.3%;37 個(gè)品種含有標(biāo)記 N2,占比 23.1%;4 個(gè)標(biāo)含有的品種有 29 個(gè),占供試材料的 18.1%;10 份材料不含抗性標(biāo)記。在 60 份育本材料、35 份高代材料、65 份不育系材料中,F(xiàn)10 標(biāo)記的分布率均為最高,分別81.7%、50.0%、96.7%。表 2-2:煙草花葉病抗性基因連鎖標(biāo)記在不同類型供試材料中的分布Table 2-1 Distribution of TMV resistance gene linkage markers in different types of tested mate

煙草花葉病,煙草苗期,病害程度,抗性鑒定


QB(60)NM2 29 48.3F10 49 81.7E1 12 20.0N2 12 20.0GD(35)NM2 21 35.0F10 30 50.0E1 4 6.7N2 9 15.0BYX(65)NM2 27 45.0F10 58 96.7E1 18 30.0N2 16 26.72.4.2 煙草花葉病抗病性鑒定結(jié)果對 160 個(gè)供試的煙草材料進(jìn)行苗期花葉病抗性特性鑒定,以革新三號為抗病對照品種, G-140 為感病對照品種,煙草花葉病病害程度分級按照 GB/T 23222 的規(guī)定進(jìn)行(圖 2-2)。煙草花葉病抗性鑒定結(jié)果(附錄 F)表明,160 份供試材料中,共有 75 份材料表現(xiàn)出對煙草花葉病的抗性(HR, MR 和 R),占供試材料的 46.9%。

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