【摘要】：Turnip crinkle virus(TCV)是卡莫病毒家族的成員,其基因組是以RNA形式存在于蛋白質(zhì)病毒外殼中。該病毒的亞基因組RNA1則表達(dá)兩個重疊的移動蛋白(MP)P8和P9,這兩個蛋白參與TCV病毒細(xì)胞間和長距離的擴(kuò)散,同時還參與病毒誘導(dǎo)的宿主RNA沉默的細(xì)胞間傳播。對于擬南芥中與TCV病毒P8蛋白相互作用的Atp8蛋白已在本世紀(jì)初得到驗證和分析。本課題則關(guān)注煙草Nicotiana benthamiana中Nbp8蛋白與TCV病毒P8蛋白的相互作用以及煙草N.benthamiana中可能與TCVp8蛋白相互作用的蛋白,以期待進(jìn)一步揭示煙草蛋白與TCVp8蛋白的互作對病毒誘導(dǎo)的RNA沉默在細(xì)胞間傳播的調(diào)控機(jī)制。對Atp8蛋白在煙草N.benthamiana中的同源蛋白Nbp8與TCVp8蛋白酵母雙雜交互作的驗證實驗發(fā)現(xiàn),Nbp8與TCVp8未表現(xiàn)明顯的相互作用。TCVp8對擬南芥cDNA文庫的酵母篩庫及同源比對得到159個與TCVp8互作的蛋白,參考前人的研究和基因重復(fù)出現(xiàn)的次數(shù)最終確定Nb AT5G37740,Nb SYTA,Nb CSN5A和Nb WRKY21進(jìn)行進(jìn)一步篩選驗證。已驗證了Nb CSN5A與TCVp8在酵母雙雜交實驗中未表現(xiàn)明確的相互作用。下一步將驗證篩選出的其他蛋白與TCVp8互作的情況,進(jìn)而構(gòu)建遺傳材料以驗證互作蛋白在TCVp8對RNA沉默細(xì)胞間傳播過程中所起的作用。在確定了與TCVp8互作的蛋白后,可以探究在TCV侵染過程中,TCV對短距離RNA沉默傳播影響的機(jī)制,進(jìn)而提出一種植物抗病的新的可能。
【學(xué)位授予單位】：杭州師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：S435.72
【圖文】：

域是從一個核心支柱伸展出去的。gRNA 結(jié)構(gòu)可以同應(yīng)中的一種逃脫。比如，gRNA 的 RNA 二級結(jié)構(gòu)和并且 RNA 折疊的程度與宿主細(xì)胞抗病毒反應(yīng)產(chǎn)物的基因組也可以提供一種結(jié)構(gòu)障礙，也就是與參與宿標(biāo)位點(diǎn)結(jié)合的障礙（Chattopadhyay et al., 2015）。 TCV RNA 基因組只編碼 5 個開放閱讀框。5 ORF 和毒 RNA 復(fù)制所必須的(圖 1.1)。兩個小的細(xì)胞間移動 RNA（sgRNA）編碼的移動蛋白。從基因組 3 端病毒外殼蛋白（CP）的 mRNA。盡管 CP 蛋白的基本功表明它在與病毒宿主細(xì)胞的相互作用中也起著關(guān)鍵強(qiáng)的抑制作用，這種抑制作用在 RNA 沉默的非常早表著一種獨(dú)特的病毒編碼的抑制子（Qu et al., 2003

siRNA 的積聚并封閉轉(zhuǎn)移性沉默，但并沒有封閉初級 siRNA 調(diào)控的沉默。一個明顯的現(xiàn)象是 dcl2 突變體在所有情況下都終止了所有的二級 siRNA，包括由其他 DCL 產(chǎn)生的二級 siRNA。作為對比，DCL4 缺失突變體產(chǎn)生了一個發(fā)卡轉(zhuǎn)入基因轉(zhuǎn)移性沉默的巨大轉(zhuǎn)變和對有意義轉(zhuǎn)入基因的增強(qiáng)的沉默（Mlotshwa et al.,2008）。有限的沉默傳播可能是通過胞間連絲完成。因為與鄰近細(xì)胞通過胞間連絲的閉塞實現(xiàn)偶聯(lián)獨(dú)立的氣孔防衛(wèi)細(xì)胞，在擬南芥中的 RNA 沉默傳播過程中并未受影響。另外，大范圍的沉默的傳播與由 SDE1 和 SDE3 介導(dǎo)的轉(zhuǎn)移性相關(guān)。這是因為這種傳播與二級而不是初級 siRNA 的生成密切相關(guān)，而且二級 siRNA 幾乎不包括 21nt 大小的家族。

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本文編號：2737122