發(fā)布時(shí)間：2020-06-15 05:39

【摘要】：玉米作為主要的糧食作物,受多種病毒的危害。課題組在大田調(diào)查中發(fā)現(xiàn)有花葉、斑駁、黃化等多種癥狀的玉米植株,在實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)過程中發(fā)現(xiàn)玉米樣品中有玉米褪綠斑駁病毒玉米褪綠斑駁病毒(Maize chlorotic mottle virus,MCMV)單獨(dú)侵染樣品,甘蔗花葉病毒(Sugarcane mosaic virus，SCMV)單獨(dú)侵染樣品,及兩個(gè)病毒復(fù)合侵染導(dǎo)致玉米致死性壞死病(Maize lethal necrosis disease,MLND)的樣品。通過摩擦接種于玉米幼苗保存了采自元謀的玉米樣品毒源。在調(diào)查過程中發(fā)現(xiàn)玉米致死性壞死病與海拔高度相關(guān),即隨著海拔升高,MLND癥狀減輕,猜測(cè)癥狀的變化可能受溫度的影響。為了揭示這一現(xiàn)象,人工模擬設(shè)置不同的溫度,接種病毒后在不同溫度下生長(zhǎng)。具體研究?jī)?nèi)容如下:1.利用ELISA和RT-PCR鑒定了分別被玉米褪綠斑駁病毒和甘蔗花葉病毒單獨(dú)侵染的植株,并測(cè)定了其全基組序列。生物學(xué)實(shí)驗(yàn)表明來自于元謀的這兩個(gè)病毒分離物都能通過機(jī)械摩擦進(jìn)行傳播。2.培養(yǎng)至3葉期的玉米植株選取上部2個(gè)葉片接種MCMV后分別移至23℃、27 ℃、31 ℃和35℃條件下培養(yǎng)。研究結(jié)果表明,低溫有利于發(fā)病,癥狀表現(xiàn)為花葉和褪綠斑駁,而高溫不利于發(fā)病,35 ℃時(shí)發(fā)病率僅為6%,接種14天后癥狀消失,但接種7天后接種率為100%。接種21天后,利用qRT-PCR對(duì)MCMV的cp基因相對(duì)表達(dá)量進(jìn)行檢測(cè),超薄切片后利用透射電鏡觀察細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的改變。定量分析結(jié)果表明隨著溫度的升高,cp基因的表達(dá)量下調(diào)。超薄切片結(jié)果顯示在四個(gè)不同溫度下細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)都發(fā)生了變化,特別是線粒體和葉綠體。溫度轉(zhuǎn)換實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明由最高溫和最低溫進(jìn)行的轉(zhuǎn)換,癥狀發(fā)生的改變最明顯,qRT-PCR檢測(cè)結(jié)果表明病毒量與癥狀表達(dá)有直接的關(guān)系。高溫轉(zhuǎn)換至低溫的細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)變化最明顯,葉綠體瓦解,坍塌,破壞最為嚴(yán)重。3.接種SCMV+MCMV的玉米植株在四個(gè)不同溫度下培養(yǎng),利用ELISA檢測(cè)接種率,接種后第14天MCMV接種率在四個(gè)溫度下接種率都為100%，SCMV 在四個(gè)溫度下(23 ℃、27 ℃、31 ℃、35 ℃)接種率為 33%,72%,88%，780%。溫度對(duì)SCMV的接種率和潛育期影響較大。第21天時(shí),復(fù)合侵染的玉米植株隨溫度升高,發(fā)病癥狀更加嚴(yán)重,MCMVcp和SCMVcp基因表達(dá)量隨溫度升高而上調(diào)。第28天時(shí),在35℃最高溫下生長(zhǎng)的沒有進(jìn)行溫度交換的玉米植株,玉米葉片干枯整株死亡。而由高溫轉(zhuǎn)移至最低溫的玉米植株有新葉長(zhǎng)出,植株沒有死亡。
【學(xué)位授予單位】：云南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：S435.13
【圖文】：

目前各玉米產(chǎn)區(qū)報(bào)道的引起玉米致死性壞死的都是導(dǎo)致的。當(dāng)兩種病毒協(xié)同侵染時(shí)可導(dǎo)致玉米植株迅減產(chǎn)�；騼H有少量的產(chǎn)量。由于ＳＣＭＶ引起的玉米發(fā)生的病害，因此一旦有ＭＣＭＶ的出現(xiàn)就可能會(huì)７３年ＭＣＭＶ首次發(fā)現(xiàn)于秘魯，而隨后報(bào)道的ＭＣ致的玉米致死性壞死病為多。１９７８年玉米致死性壞隨后在剛果、肯尼亞、埃塞爾比亞、盧旺達(dá)、夏威現(xiàn)ＭＣＭＶ開始到２０世紀(jì)９０年代，ＭＣＭＶ在發(fā)源后，ＭＬＮＤ迅速出現(xiàn)在東南亞、撒哈拉以南的非的面積從北部的埃塞俄比亞到南部的坦桑尼亞和肯近１２０萬(wàn)平方公里。２０１１年ＭＬＮＤ在非洲肯尼亞

逡逑ＩＩ』Xu逡逑圖１．２玉米致死性壞死癥狀逡逑ａ：健康玉米；ｂ：玉米致死性壞死癥狀（攝于２０１７年５月）逡逑玉米致死性壞死病的癥狀表現(xiàn)為葉片嚴(yán)重黃化，剛開始從葉片的邊緣壞死，逡逑隨后從外到內(nèi)逐步壞死，直至整株玉米死亡，植株越小壞死越嚴(yán)重［１６］。在非洲的逡逑大多數(shù)國(guó)家，玉米作為人們主要的主食，但ＭＬＮＤ的出現(xiàn)導(dǎo)致玉米絕收，該病逡逑己經(jīng)影響了糧食安全。很明顯，最近ＭＬＮＤ的出現(xiàn)，在全世界已經(jīng)造成了嚴(yán)重逡逑的經(jīng)濟(jì)損失。逡逑２邋ＭＣＭＶ研究進(jìn)展逡逑２．１邋ＭＣＭＶ基因組結(jié)構(gòu)逡逑ＭＣＭＶ是番前叢矮病毒科（ｆａｍｉｌｙ邐玉米堘綠斑駁病毒屬（ｇｅｎｕｓ逡逑Ｍａｃ／？／ｏｗｏｖｚ＞？ｓ）的成員，基因組為一條單鏈正義ＲＮＡ，全長(zhǎng)約４．４邋ｋｂ，是一種直逡逑徑為３０邋ｎｍ的二十面體病毒�；蚪M包含７個(gè)開放閱讀框，分別編碼ｐ３２，邋ｐ５０、逡逑ｐｉｌｌ、ｐ７、ｐ７ｂ、ｐ３１、ｐ２５蛋白。ＭＣＭＶ在５＇端有１１７邋ｎｔ的非編碼區(qū)，３瑞有逡逑３４６邋ｎｔ的非編碼區(qū)。ＭＣＭＶ第一個(gè)ＯＲＦ編碼一個(gè)３２邋ｋＤａ的蛋白Ｐ３２

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 曹省艷;王強(qiáng);周小藝;;熒光定量PCR技術(shù)的研究進(jìn)展與應(yīng)用[J];農(nóng)家顧問;2015年04期

2 方琦;董家紅;鄭寬瑜;張仲凱;;番茄環(huán)紋斑點(diǎn)病毒與馬鈴薯Y病毒復(fù)合侵染煙草的細(xì)胞病理特征[J];植物學(xué)報(bào);2014年06期

3 雷屈文;李e

本文編號(hào)：2713980