【摘要】：側(cè)孢短芽胞桿菌具有抗菌、殺蟲、生物降解轉(zhuǎn)化等功能,在生物防治、環(huán)境保護(hù)和微生物菌劑開發(fā)等方面有著巨大的應(yīng)用價(jià)值和潛力。本文從側(cè)孢短芽胞桿菌培養(yǎng)液中分離純化出一種新的蛋白激發(fā)子PeBL2,它能引起煙草葉片過敏性反應(yīng)�？寺〔@得了激發(fā)子PeBL2的基因序列,成功實(shí)現(xiàn)了在大腸桿菌中的表達(dá)與純化,具體的研究結(jié)果如下:通過硫酸銨沉淀、離子交換色譜和高效液相色譜(HPLC),從側(cè)孢短芽胞桿菌A60發(fā)酵液中分離純化出一種新的蛋白激發(fā)子PeBL2,它可以引起典型的HR。采用電噴霧四極桿飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜(ESI-Q-TOF-MS/MS)對(duì)PeBL2進(jìn)行鑒定,獲得的肽段與基因組中假想蛋白最匹配,命名為PeBL2。該蛋白含有156個(gè)氨基酸,理論分子質(zhì)量為17.22kDa。從側(cè)孢短芽胞桿菌A60中克隆到471bp的PeBL2基因,并將其構(gòu)建到pET28a-TEV/LIC載體上進(jìn)行原核表達(dá)。純化的重組表達(dá)蛋白PeBL2能夠引起煙草葉片的超敏反應(yīng)和氧爆發(fā),并且能夠提高煙草的抗病性。用20μM的重組蛋白PeBL2處理六周齡的煙草葉片,同時(shí)利用BSA作為對(duì)照。接種灰葡萄孢菌菌塊,3天后通過測(cè)量病斑直徑來計(jì)算病斑抑制率。隨機(jī)選取10個(gè)病斑測(cè)量直徑,發(fā)現(xiàn)在處理和BSA之間有明顯的差異。其中PeBL2處理的病斑直徑平均為14.11mm,而對(duì)照組的病斑直徑平均為22.5mm。與對(duì)照組相比,PeBL2處理明顯抑制了灰葡萄孢菌的病斑擴(kuò)展,說明PeBL2能誘導(dǎo)煙草葉片對(duì)灰葡萄孢菌的抗性。
【學(xué)位授予單位】：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：S476

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