【摘要】：本文對東北林業(yè)大學(xué)校園內(nèi)的花楸病害進(jìn)行標(biāo)本采集,病原菌的分離、純化、鑒定、接種試驗(yàn)和再分離,確定該病害為花楸爛皮病并鑒定其致病病原菌。對病原菌的生物生態(tài)學(xué)特性進(jìn)行了研究;以校園內(nèi)花楸3～5年生枝條的樹皮內(nèi)生真菌的群落組成為基礎(chǔ),通過平板對峙實(shí)驗(yàn)篩選出具有開發(fā)利用潛能的拮抗菌株,為花楸爛皮病的生物防治打下了基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下:1、通過對東北林業(yè)大學(xué)校園內(nèi)花楸樹的發(fā)病情況調(diào)查,確定了花楸爛皮病具有較強(qiáng)的致病性。通過柯赫氏法則接種驗(yàn)證,確定了花楸爛皮病的致病病原菌,以形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)相結(jié)合的方法,對花楸爛皮病的病原菌進(jìn)行了鑒定,確定其無性型為核果殼囊孢[Cytosporaleucostoma(Speg.)Sacc.],有性型為白孔座殼菌[Leucostoma persoonii(Nitschke)Hohn.],該病害為花楸上的新病害。2、通過對病原菌生物生態(tài)學(xué)特性的研究,得出該病原菌核果殼囊孢[Cytospora leucostoma(Speg.)Sacc.],最適生長溫度為23℃;對酸堿度適應(yīng)能力較強(qiáng),在pH值為4.5～9.2的范圍內(nèi)均能生長,但在pH值為6.2時菌絲生長最為迅速;病原菌在以淀粉為碳源的培養(yǎng)基上生長最好,以蛋白胨為氮源的培養(yǎng)基上生長最快;在全光照的條件下菌絲生長最快;在半光照的條件下更易產(chǎn)生分生孢子器及分生孢子;在變溫條件下病原菌易產(chǎn)分生孢子器和分生孢子;在15℃條件下孢子萌發(fā)率最大;濕度越大孢子萌發(fā)率越高,在相對濕度100%(即水滴中)萌發(fā)率最大。3、通過對花楸3～5年生枝條樹皮內(nèi)生真菌群落的研究,得出樹皮真菌的種類較豐富,共分離出13屬(種)真菌,其中,12屬(種)為半知菌,1種為接合菌。其中優(yōu)勢種為Paecilomyces sp.、Penicillium sp.、Trichoderma longibrachiatum Trichoderma harzianum,分離率為 16.8%、21.3%、13.0%和 12.7%。4、在選出的6種真菌與病原菌的平板對峙試驗(yàn)中,長枝木霉(Trichoderma longibrachiatum)對病原菌菌絲的抑制效果最強(qiáng),抑制率為70.34%,其次為哈茨木霉(Trichoderma harzianum)、綠色木霉(Trichoderma virida,抑制率分別為 49.58%和46.52%,這三種真菌對病原菌的抑制率均能達(dá)到40%以上。根據(jù)對病原菌的抑菌率、拮抗系數(shù)和被覆蓋的程度等指標(biāo),最終篩選出可以有效抑制花楸爛皮病病原菌的拮抗菌株為哈茨木霉(Trichoderma harzianum)、長枝木霉(Trichoderma longibrachiatum)和綠色木霉(Trichoderma viride)。5、三種生防菌的發(fā)酵液對花楸爛皮病原菌菌絲生長和孢子萌發(fā)抑制作用差別均較大,對菌絲抑制率最高的是T-2哈茨木霉(Trichoderma harzianum),在發(fā)酵液含量為50%時抑制率為70.21%。對孢子萌發(fā)抑制作用最強(qiáng)的是T-1長枝木霉(Trichoderma longibrachiatum),24h時萌發(fā)率被抑制在58%以下。
【圖文】：

測序后得到的ＰＣＲ產(chǎn)物５９４ｂｐ，通過與ＮＣＢＩ數(shù)據(jù)庫進(jìn)行結(jié)果比對，與核果殼囊孢逡逑／ｅｗｃ0５ｆ0ＯＴａ邋（登錄號：ＫＹ９７７５３５．１）相比較覆蓋度９９邋％，同源性１００邋％。通逡逑過Ｍａｇｅ５．０構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹如圖２－３，邋ＨＧＢ３５與Ｃ邋／ｅｗｃｏ＾ｏｍａ處于同一分枝上。逡逑＞ＨＧＢ３５病原菌ＩＴＳ基因序列逡逑ＧＧＡＡＧＴＡＡＡＡＧＴＣＧＴＡＡＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＧＴＴＧＧＴＧＡＡＣＣＡＧＣＧＧＡＧＧＧＡＴＣＡＴＴＧＣＴ逡逑ＧＧＡＡＧＣＧＣＣＧＣＡＡＧＧＴＧＣＡＣＣＣＡＧＡＡＡＣＣＣＴＴＴＧＴＧＡＡＣＴＴＡＴＡＣＣＴＡＴＡＴＣＧＴＴＧＣ逡逑ＣＴＣＧＧＣＧＣＴＧＧＣＴＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＣＧＴＧＧＡＧＧＧＧＧＣＣＣＧＣＣＴＣＴＧＧＴＣＧＴＡＡＡＡＡＧＣ逡逑ＣＡＧＧＧＧＡＧＧＡＣＡＧＣＡＧＧＣＣＣＧＣＣＧＧＴＧＧＣＣＴＡＣＴＡＡＡＣＴＣＴＴＧＴＡＴＴＴＡＴＴＧＡＧＴＡ逡逑ＡＡＡＴＣＴＧＡＧＴＡＡＧＣＴＴＣＴＡＡＡＴＧＡＡＴＣＡＡＡＡＣＴＴＴＣＡＡＣＡＡＣＧＧＡＴＣＴＣＴＴＧＧＴＴＣＴ逡逑ＧＧＣＡＴＣＧＡＴＧＡＡＧＡＡＣＧＣＡＧＣＧＡＡＡＴＧＣＧＡＴＡＡＧＴＡＡＴＧＴＧＡＡＴＴＧＣＡＧＡＡＴＴＣＡＧ逡逑－１４－逡逑

明該菌對無機(jī)氮利用率不高，但是無氮條件下菌絲更為稀疏。再次為凡《４＞＾０３和逡逑（ＮＨ４）２Ｓ０４，最次為ＮａＮ０３，說明該菌對以ＮＨ４形態(tài)下存在的氮元素的利用率要比在逡逑Ｎ０３Ｂ態(tài)下存在的氮元素利用率高。生長曲線見圖３－４：逡逑１．５－１逡逑Ｔ逡逑Ｑ邋１．０－邐■邋Ｔ逡逑Ｅ邐丁逡逑0邐丁邐Ｉ—．咖．—逡逑Ｖ－／邐１逡逑—ｐ＊邐邐邐邋＇邋＇邐？人Ｖ邐Ｖ邋■＇逡逑．．．．．．．逡逑■邋■邋邐逡逑０邋５－逡逑？ｊ邋＾邐？邐．．．逡逑00邋蛋白胨邐ＮａＮＣｈ邐ＮＨｉＮＯ＾邋（ＮＨＯ２ＳＯ１邋無氮逡逑圖３－４不同l#源對病原菌伣菌絲的影響逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋３－４邋Ｅｆｆｅｃｔ邋ｏｆ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ邋ｎｉｔｒｏｇｅｎ邋ｓｏｕｒｃｅｓ邋ｏｎ邋ｔｈｅ邋ｍｙｃｅｌｉａ邋ｏｆ邋Ｃｙｔｏｓｐｏｒａ邋ｌｅｕｃｏｓｔｏｍａ逡逑３．３．４不同培養(yǎng)基對病原菌菌絲生長的影響逡逑菌絲在大部分的培養(yǎng)基上均能生長，其中在ＰＤＡ上病原菌的菌絲生長最快，菌落逡逑致密，其次是ＳＤＡ培養(yǎng)基，在這兩種培養(yǎng)基上菌絲密且厚；在玉米粉培養(yǎng)基〔ＰＳＡ培逡逑養(yǎng)基和查彼培養(yǎng)基上菌絲生長較稀疏，，只長表面一層。生長曲線見圖３－５：逡逑１．２－，逡逑丁逡逑￣ｒ￣逡逑０．９－逡逑Ｘ－Ｖ逡逑Ｅ邐－－Ｉ－丁逡逑Ｕ邐丁逡逑０．６－逡逑ｍ逡逑人丨０．３＿逡逑０．０－１—Ｉ邐１邐＊邐邐１——————ｒ邐邐邐１邐邐邐．邐逡逑玉米粉邐查彼邐ＰＳＡ邐ＰＤＡ邐ＳＤＡ逡逑培養(yǎng)基類型逡逑圖３－５不同培養(yǎng)基對病原菌菌絲的影響逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋３－５邋Ｅｆｆ
【學(xué)位授予單位】：東北林業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S763.7

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2681839